的幼苗按随机区组分置温度为26度，光照时 间为14h/d的温室内培养，培养期间及时补充灭菌水。
[0030] ⑶待花生生长到花期时，用叶绿素计SPAD-502P1US测叶片叶绿素含量。生长45天 后收获，立即测量地上部株高、鲜重、干重、根瘤重、根瘤固氮活性。花生根瘤固氮活性检测 采用乙炔还原法。。测量结果如下：
[0031] 表1花生根瘤菌盆栽实验结果
[0032]
[0033] 由表1的实验结果可以看出，花生根瘤菌(Bradyrhizobium sp. )nC61059具有明 显的促生和固氮能力，跟其他菌株相比固氮能力优势明显。
[0034] 施用过花生根瘤菌(Bradyrhizobium sp. )nC61059的花生植株与对照组相比，单 株叶绿素含量提尚12.28%，单株鲜重提尚40.60%，单株固氣活性提尚695%。
[0035] 为了进一步确定本实施根瘤菌菌株YIC61059的系统进化地位，通过对其16SrRNA 基因进行扩增构建系统发育进化树。PCR反应采用通用引物：正向引物27F和反向引物 1492R1CR反应体系为：反应体系50yL体积，反应液组成：lyL DNA模板，25yL2 XMastarMix， lyL 27F，lyL 1492R，超纯水补足至SOyl^PCR扩增程序:95°C5min;30个循环(94°Clmin，56 °C lmin，72°C 1.5min); 72°C5min。扩增产物经1.0 %琼脂糖凝胶电泳检测合格后送北京奥科 鼎盛生物科技有限公司测序。将测到的DNA序列进行人工矫正后，使用NCBI中的BIAST软件 在线比对，经过比对，本实施菌株与参比菌株Bradyrhizobium liaoningense USDA 3622τ 相似度为99.9%，所以断定这株菌株为慢生根瘤菌属，在上述盆栽实验中与花生有较好的 结瘤效果，于是可以确定它为花生根瘤菌。
[0036] 慢生根瘤菌（Bradyrhizobium sp. )"nC61059 16S rRNA序列
[0037]
[0038] 3高效固氮花生根瘤菌YIC61059的菌剂制备与应用
[0039]⑴实验时间为7月上旬至10月中旬。小区实验设计图如附图1。将实验小区土地平 整并起垄，垄间距约1.6m。参照实施例2中的菌株活化方法将本实施菌株活化培养制成根瘤 菌剂。
[0040] 挑取颗粒饱满、大小均匀的花生种子，在阴凉无阳光处将花生种子放入活化的接 种菌液中浸泡20min。
[0041] 实验组将粘有根瘤菌剂的种子均匀播种至试验田中，行间距为40cm，株距10cm，播 种深度为5cm。实验对照组均不施加根瘤菌剂，直接将种子播种至整理好的试验田中，行距、 株距、种植深度都与实验组相同。其中施肥对照组按每667m 2施过磷酸钙1.5kg，硫酸钾 8.0kg，尿素4.8kg用量施加肥料。
[0042]播种后立即用大水漫灌，及时喷施除草剂乙草胺。50%乙草胺每667m2用量100~ 150mL，喷施时按规定用量加水混匀后均匀喷施于垄面。
[0043] 将大垄中双行的花生覆膜，膜宽100cm，厚度为0.005~0.006mm，透光率为70%~ 90%，膜与垄面贴实无褶皱，减少杂草的生长。
[0044] ⑵田间管理
[0045] 花生始花期植株生长旺盛，有效花大量开放，大批果针陆续入土，应及时检查将覆 膜揭开以免导致下针困难，结果率、饱果率降低。花生根瘤菌固氮能力较强，固氮量基本可 满足自身需求。花生生长期间要及时清除田间杂草。
[0046]花生既怕干旱又怕渍水，要以土壤含水量保持60%为宜，切忌土壤含水量过高，过 度干旱也易降低花生产量。应根据降雨量的多少及时补充水量和排涝工作。
[0047]当中下部叶片转黄脱落，多数荚果果壳硬化，种子颗粒饱满、光润、呈现品种特有 的色泽时收获。收获时对花生主侧根长度和果实鲜重进行统计分析。收获后及时晾晒，称量 果实干重，统计果实百仁重和千克仁数，进行统计分析，试验结果如图2,3及表2。
[0048] 表2为接种菌株YIC61059种植花生的田间小区试验中花生的百粒重和千克仁数。
[0049]
[0050] 统计结果表明，接种本实施菌株YIC61059的小区花生主根和侧根长度均较不施肥 处理的花生大。同时与不施肥的花生相比，接种YIC61059的花生单株果实鲜重增加了 18.98%，单株果实干重增加24.48%，促生增产效果明显，且与施肥处理相比差距不显著。 接种本实施菌株YIC61059的花生百粒重均大于不施肥和施肥处理的花生，同时千克仁数也 小于其他两个对照处理。此数据结果表明接种YIC61059能够有效提高花生果仁品质，增加 果实饱满程度。
[0051 ]因此，本实施菌株YIC61059在花生的种植应用中能够显著促进花生的生长及果实 产量品质的提高，达到显著增产的目的;此外，本实施菌株根瘤菌剂是绿色环保的微生物肥 料，其在花生种植上的应用和推广能够有效降低生产成本，提高作物产量、改善作物品质， 减少环境污染，并在一定程度上改善土壤的理化性状，促进农业的长远和可持续发展。
【主权项】
1. 一种花生慢生根瘤菌，其特征在于:慢生根瘤菌(Bradyrhizobium sp. )YIC61059,该 菌株已于2015年10月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称 CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号），其保藏编号为CGMCC No. 11507。2. 按权利要求1所述的花生根瘤菌的应用，其特征在于:所述根瘤菌在促进花生生长中 的应用。3. 按权利要求2所述的花生慢生根瘤菌的应用，其特征在于:所述根瘤菌在促进花生种 植中作为产量增产剂的应用。4. 按权利要求2或3所述的花生慢生根瘤菌的应用，其特征在于:将所述慢生根瘤菌于 TY液体培养基中28 °C，180rpm摇床震荡培养2-3天，待菌液0D6Q(^ 1.0;将所得菌液直接喷洒 在花生种子表面，而后将喷洒有菌液的花生种子直接播种，即可使花生产量得以增长。
【专利摘要】本发明属应用微生物技术领域，具体的说是一种花生慢生根瘤菌YIC61059及其应用。慢生根瘤菌(Bradyrhizobium？sp.)YIC61059，该菌株已于2015年10月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏编号为CGMCC？No.11507。本发明菌株生长速度快，共生固氮能力强，在温室和大田环境下能够显著促进花生的生长，提高花生的产量；可用于制作高效根瘤菌剂，减少化肥使用造成的环境污染，实现增产、节氮、生态的协调一致，因此本发明在花生种植业上有广阔的应用前景。CGMCC No.1150720151015
【IPC分类】A01P21/00, C12N1/20, A01N63/00, C12R1/41
【公开号】CN105567615
【申请号】CN201610141897
【发明人】解志红, 吴海龙, 李岩, 刘卫, 任承钢, 姜南, 杨金保
【申请人】中国科学院烟台海岸带研究所
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年3月14日