促血管发生的肽和肽缀合物的制作方法
【专利摘要】提供了源自内皮分化基因3(EDG3)的7次跨膜受体的第2个环的短的生物活性序列，以及包含渗透性增强部分的肽缀合物，所述短的生物活性序列可用于刺激血管发生。还提供了包含所述肽的药物组合物，以及在其中发生血液供应不足或与内皮功能异常相关的状况中的使用方法，所述状况诸如外周血管疾病、冠状动脉疾病、脑血管疾病、糖尿病和延迟的伤口愈合、肺病、眼病以及与严重感染相关的病理状况。
【专利说明】促血管发生的化和化缀合物 发明领域
[0001] 本发明设及源自内皮分化基因 3化DG3)的7次跨膜受体的第2个环的短的生物活性 肤，W及包含渗透性增强部分的肤缀合物，所述短的生物活性肤可用于刺激血管发生和血 管完整性。
[0002] 发明背景
[0003] 人类基因组中最大的受体家族之一是7次跨膜受体（7l:ransmembrane receptor; 7-TMR)超家族，也被称为G蛋白偶联受体(GPCR)，计约2000种蛋白。G蛋白偶联受体调节许多 重要的生理过程。至少40%的已经开发的处方药具有与运些受体相关的作用。运些药物的 大多数通过干扰在细胞外发生的与受体结合的配体起作用。
[0004] 在科学界存在持续的努力，W定义阻断受体及其信号转导伴侣G蛋白之间的细胞 内相互作用的化合物。
[0005] 已知7TMR受体的第二个细胞内的环在信号转导中发挥重要作用，因为该区域中的 突变引起7TMR相关信号转导的扰乱。例如，曾试图（Benovic等化.J.Clin.Pharmac.，30:3s-12s，1990)通过施用相应于该受体的第二个完整的环的肤来干扰把肾上腺素受体信号转 导。但是，运些结果非常不令人满意。
[0006] 血管发生是重要的天然过程，其发生在胚胎发生期间W及成人健康身体的伤口愈 合的过程中，并且导致血液恢复流回到受伤的组织中。在女性中，血管发生还发生在每月的 生殖周期期间W逐渐形成子宫内膜并且在排卵期间支持卵母细胞的成熟；W及发生在妊娠 期，当胎盘形成时，建立母体和胎儿间的循环的过程中。健康的身体通过血管发生刺激生长 因子和血管发生抑制物的相互作用来控制血管发生，并且两者之间的平衡决定血管发生被 刺激还是被抑制。
[0007] 在若干治疗领域中，对控制血管发生存在增长的兴趣。在一方面，目标是控制或减 少在疾病诸如癌症、糖尿病性失明、年龄相关的黄斑变性、类风湿性关节炎、牛皮癖W及另 外的状况中发生的过量的和病理性血管发生。在运些病理状况中，新的血管供给患病组织 例如肿瘤组织，为其提供必需的氧气和营养物，从而使其能够病理性生长。在一些情况中， 病理性血管发生多次破坏正常组织。此外，例如在肿瘤组织中形成的新的血管，使肿瘤细胞 能够逃逸到循环系统中并且转移到其他器官。通常，当患病的细胞产生异常量的血管发生 生长因子、压倒存在于身体中的天然血管发生抑制物的作用时，发生过量的血管发生。
[000引现今开发的抗血管发生疗法目的在于通过祀向并中和促进新的血管形成的任何 刺激物来预防新的血管生长。
[0009]调节血管发生的另一个目标是刺激在其中发生血液供应不足，导致组织缺血的状 况中的新血管形成的产生。通常，运些状况是诸如冠状动脉疾病、外周动脉疾病、中风和延 迟的伤口愈合(例如在溃瘍性病变中）的疾病。在运些状况中，当充足的血管生长和循环未 被适当地恢复时，由于血液流动不足，存在组织死亡的风险。通常，当组织不产生充足量的 血管发生生长因子时，发生血液供应不足，并且治疗性血管发生目的在于通过使用生长因 子或它们的模拟物刺激新血管的生长。
[0010] 血管发生促进疗法的主要目标是通过诱导身体建立新的侧支血管，产生生物旁 路-即物理地绕开患病的或堵塞的动脉。
[0011] 已经显示1-憐酸銷氨醇（SlP)是血清中主要的促血管发生因子化nglish等， Cardiovasc Resovasc Res.2001 ;49:588-599) eSlP在血小板活化后从其释放，并且有助于 伤口愈合过程。其产生由銷氨醇激酶催化，而降解经由裂解产生栋桐醒和憐酸乙醇胺或通 过去憐酸化。SlP通过引发内皮细胞的增殖和迁移W及毛细管形态发生，并稳定新形成的内 皮毛细管(通过增强细胞-细胞接触和招募平滑肌细胞），而在血管发生反应中作为关键要 素。SlP还能够与内皮分化基因化DG)G-蛋白偶联受体家族的成员（即，也被称为SlPl的 EDG1，也被称为S1P3的邸G3,也被称为肥18、AGR16或S1P2的邸G5,也被称为S1P4的邸G6和也 被称为S1P5的EDG8)结合，W引起生物响应。运些受体经由6(1)、6(9)、6(12/13)和1^〇与多 效应器系统区别地偶联，所述多效应器系统包括腺巧酸环化酶、憐脂酶C和憐脂酶D、细胞外 信号调节激酶、C-Jun N末端激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶和非受体酪氨酸激酶。运些信号 传导途径与转录因子活化、细胞骨架蛋白、粘附分子表达、半脫天冬酶活性等相关联。因此， 1-憐酸銷氨醇能够经由受体依赖性机制影响多种生物响应，包括有丝分裂发生、分化、迁移 和细胞调亡。另外，已提出SlP发挥细胞内作用，例如在Ca(2+)移动中发挥细胞内作用。近 期，显示化elIer等2014化1:ure Communications ,5,5215)SlP通过S1P3信号传导在成人中 的骨形成中发挥重要作用。
[0012] 显示7次跨膜受体S1P3(也被称为抓G3)的第2个环参与血管发生。Licht等2003 (Blood, 102,2099-2107)表明促血管发生信号传导W及与已知的血管发生因子的协同作用 被具有源自抓G3的第2个环的C末端（残基143-151)的序列肉豆違基-Gly-Met-Arg-Pro-Ty;r-Asp-Ala-Asn-Lys-Arg(SEQ ID NO: 1)的9氨基酸肤诱导。在该出版物中未公开更短的 序列。
[0013] WO 01/81408和其US对应申请US 6,864,229公开了源自某些G-蛋白偶联受体(蛋 白酶激活受体1 (PAR 1)、PAR2、PAR4、CCKB、CCKA、SSTR2和MC4)的第S个细胞内环的肤和肤缀 合物。运些文件未提供源自G-蛋白偶联受体的第二个环的肤的序列和/或活性，运些文件也 未公开或暗示源自S1P3/EDG3G-蛋白偶联受体的肤或缀合物。
[0014] WO 2004/022576提出了源自7次跨膜受体抓G3的第2个环的至少5个氨基酸的肤和 类似物，所述肤和类似物可用于刺激血管发生。公开的肤包含天然序列的至少6个氨基酸或 者是运些肤的类似物，例如源自天然抓G3序列的序列Met-Arg-Pr〇-Tyr-Asp-Ala(SEQ ID ^:3)的化合物^6-4'旨斗'〇-了7'-4311-41曰(569 10^:2)。由于长的肤序列的影响活性和 选择性的柔性构象，并且它们包含肤酶的多个裂解位点，因此长的肤序列不是作为治疗剂 的最理想的。
[0015] 设及人类前列腺相关丝氨酸蛋白酶（prostate-associated serine protease; PRASP)的US 6，075，136描述了用于测量PRASP活性的测定，所述测定测量作为膜凝乳蛋白 酶样丝氨酸蛋白酶(包括PSA)的通用底物的合成肤甲基-0-班巧酷-Arg-Pro-Tyr-NH-P-硝 基苯胺的水解（Qiristensson,A.等 1990,Eur .J.Biochem. 194:755-763)。
[0016] 因此，对提供更适合作为用于在其中发生血液供应不足的状况中刺激血管发生的 药物候选物的改进的肤存在未满足的需求。
[0017] 发明概述
[0018]本发明首次提供了可用于刺激血管生长和用于改进内皮功能异常、特别是与过量 渗漏相关的内皮功能异常的情况的短的合成肤和肤缀合物。所提供的肤为作为用于治疗其 中血管生长是期望的血管素乱诸如外周血管疾病、屯、肌缺血、外周动脉疾病、组织移植和糖 尿病，W及用于通过1-憐酸銷氨醇(SlP)受体介导的其他素乱和状况的治疗剂的候选物。 [00 19]现在公开了与内皮分化基因3化DG3)的7次跨膜受体的细胞内的第2个环的序列共 有仅3个氨基酸同源性的新型肤，所述新型肤有效刺激血管发生，并且在刺激血管发生中与 其他血管发生刺激物协同地发挥作用。
[0020]根据一方面，本发明提供了一种3-10个氨基酸的肤，所述肤包含核屯、序列RPY，其 中R是精氨酸残基或修饰的精氨酸残基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残 基或修饰的酪氨酸残基，其中所述肤共有与具有序列Met-Arg-Pr〇-Tyr-Asp(SEQ ID N0:4) 的内皮分化基因受体3化DG3)的相应残基143-147的那些氨基酸相同的不超过3个氨基酸。 [0021 ]根据一些实施方案，所述肤由3-9个氨基酸组成。
[0022] 根据又其他实施方案，所述肤由4-8个氨基酸组成。
[0023] 根据一些特定的实施方案，所述肤由4、5或6个氨基酸组成。每个可能性代表本发 明的单独的实施方案。
[0024] 根据一个实施方案，所述肤能够促进血管的生长。根据特定的实施方案，所述肤能 够刺激血管发生。根据另一个实施方案，所述肤能够改善内皮功能，特别是减少功能异常的 内皮的渗漏。
[0025] 根据一个实施方案，所述肤还包含经由直接的键或经由接头与所述肤共价地连接 的渗透性增强部分(permeability-enhancing moiety)，W形成肤缀合物。根据本发明的渗 透性增强部分可与活性肤的任何游离基团连接。
[00%]根据一些实施方案，所述接头由1-5个氨基酸残基组成。
[0027] 根据一些特定的实施方案，所述接头由甘氨酸残基组成。
[0028] 根据一些特定的实施方案，所述渗透性部分是脂肪酸并且所述接头是甘氨酸残 基。
[0029] 根据另一些实施方案，所述RPY序列选自由W下组成的组：
[0030] Arg-Pro-Tyr；
[0031] Arg-Pr〇-35(HTyr;
[0032] hArg-Pro-Tyr；
[0033] Mrg-Pr〇-35dITyr 和
[0034] hArg-4Hyp-Tyr；
[0035] 其中hArg是高精氨酸，35dITyr是3，5-二舰酪氨酸并且4Hyp是4?基脯氨酸。每个 可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0036] 根据其他实施方案，本发明提供了按照式I的肤缀合物：
[0037] Z-X-R-P-Y-B (式I)
[0038] 其中Z表示经由直接的键或经由接头共价地连接的能够增加渗透性的部分，X表示 除了甲硫氨酸之外的天然的或合成的氨基酸残基，或X可不存在，R是精氨酸残基或修饰的R 残基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨酸残基，并且B表 示末端簇酸基、酷胺基、醋基或醇基。
[0039] 根据一些实施方案，肤缀合物中的肤选自由W下组成的组：
[0040] Gly-Arg-Pr〇-Tyr-B(SEQ ID NO.5)；
[0041] Gly-Nle-Arg-Pr〇-Tyr-B(SEQ ID NO.6)；
[0042] Gly-Nle-Arg-Pr〇-35(HTyr-B(SEQ ID N0.7);
[0043] Gly-Nle-hArg-Pr〇-Tyr-B(SEQ ID NO.8)；
[0044] 617-饥6-114巧斗的-35(1口7尸8(569 10備.9);和
[0045] Gly-Nle-Mrg-4HyP-Tyr(沈Q ID NO.IO)。
[0046] 每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0047] 根据一些实施方案，所述接头由1-5个氨基酸残基组成。
[004引根据一些特定的实施方案，X是正亮氨酸(Nle)残基。
[00例修饰的精氨酸残基的非限制性实例是:高精氨酸化ArgKN-甲基精氨酸(醒eArg)、 瓜氨酸、2-氨基-3-脈基丙酸、N-亚氨基乙基A-鸟氨酸、N CO -单甲基A-精氨酸、N CO -硝基-心精氨酸、D-精氨酸、2-氨基-3-脈基丙酸、N O，O -二甲基-心精氨酸、N O -硝基-D-精氨酸。 每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0050] 修饰的脯氨酸残基的非限制性实例是：高脯氨酸化omop;roline，hP;ro)、（4-径基） Pro(4HyP)、（3-^基)Pro(3HyP)、丫-苄基-脯氨酸、丫-(2-氣-苄基)-脯氨酸、丫-(3-氣-节 基)-脯氨酸、丫-(4-氣-苄基)-脯氨酸、丫-(2-氯-苄基)-脯氨酸、丫-(3-氯-苄基)-脯氨酸、 丫-(4-氯-苄基)-脯氨酸、丫-(2-漠-苄基)-脯氨酸、丫-(3-漠-苄基)-脯氨酸、丫-(4-漠-节 基)-脯氨酸、丫 -(2-甲基-苄基)-脯氨酸、丫 -(3-甲基-苄基)-脯氨酸、丫 -(4-甲基-苄基)-脯氨酸、丫-(2-硝基-苄基)-脯氨酸、丫-(3-硝基-苄基)-脯氨酸、丫-(4-硝基-苄基)-脯氨 酸、丫-(1-糞甲基)-脯氨酸、丫-(2-糞甲基)-脯氨酸、丫-(2,4-二氯-苄基)-脯氨酸、丫-(3， 4-二氯-苄基)-脯氨酸、丫-(3,4-二氣-苄基)-脯氨酸、丫-(2-;氣-甲基-苄基)-脯氨酸、 丫-(3-立氣-甲基-苄基)-脯氨酸、丫-(4-立氣-甲基-苄基)-脯氨酸、丫-(2-氯基-苄基)-脯 氨酸、丫 -(3-氯基-苄基)-脯氨酸、丫 -(4-氯基-苄基)-脯氨酸、丫 -(2-舰-苄基)-脯氨酸、 丫-(3-舰-苄基)-脯氨酸、丫-(4-舰-苄基)-脯氨酸、丫-(3-苯基-締丙基-苄基)-脯氨酸、 丫-(3-苯基-丙基-苄基)-脯氨酸、丫-(4-叔-下基-苄基)-脯氨酸、丫-二苯甲基-脯氨酸、 丫-(4-联苯-甲基)-脯氨酸、丫-(4-嚷挫基-甲基)-脯氨酸、丫-(3-苯并嚷吩基-甲基)-脯氨 酸、丫-(2-嚷吩基-甲基)-脯氨酸、丫-(3-嚷吩基-甲基)-脯氨酸、丫-(2-巧喃基-甲基)-脯 氨酸、丫-(2-化晚基-甲基)-脯氨酸、丫-(3-化晚基-甲基)-脯氨酸、丫-(4-化晚基-甲基)-脯氨酸、丫-締丙基-脯氨酸、丫-丙烘基-脯氨酸、O-修饰的脯氨酸残基、赃晚酸、氮杂环下 烧-3-簇酸。每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0051] 修饰的酪氨酸残基的非限制性实例是:3,5-二舰酪氨酸(35dITyr)、3,5-二漠酪氨 酸(35地Tyr )、高酪氨酸、D-酪氨酸、3-氨基-心酪氨酸、3-氨基-D-酪氨酸、3-舰-心酪氨酸、 3-舰-D-酪氨酸、3-甲氧基-心酪氨酸、3-甲氧基-D-酪氨酸a-甲状腺素、D-甲状腺素、心甲 状腺原氨酸、D-甲状腺原氨酸、0-甲基-心酪氨酸、0-甲基-D-酪氨酸、D-甲状腺原氨酸、0-乙 基-心酪氨酸、0-乙基-D-酪氨酸、3，5，3 ' -S舰-1^-甲状腺原氨酸、3，5，3 ' -S舰-D-甲状腺原 氨酸、3，5-二舰-1^-甲状腺原氨酸、3，5-二舰-D-甲状腺原氨酸、D-间-酪氨酸、k间-酪氨酸、 D-邻-酪氨酸、1^-邻-酪氨酸、苯丙氨酸、取代的苯丙氨酸、N-硝基苯丙氨酸、P-硝基苯丙氨 酸。每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0052] 根据特定的实施方案，Z是豆違酷-甘氨酸(Myr-Gly)，X是正亮氨酸(Nle)，R选自由 精氨酸残基、高精氨酸残基化ArgKNa-甲基精氨酸残基(NMeArg)、瓜氨酸残基、2-氨基-3-脈基丙酸残基组成的组;P是脯氨酸残基或4径基脯氨酸残基(4HyP)，并且Y选自由酪氨酸残 基、3,5二舰酪氨酸残基(35d口yr)、3,5二漠酪氨酸残基(35地Tyr)和高酪氨酸残基组成的 组。每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0053] 根据一些实施方案，肤缀合物选自由W下组成的组：
[0054] Myr-Gly-Arg-Pro-Tyr-WH沈Q ID NO: 11);
[0055] Myr-Gly-Nle-Arg-Pro-Tyr-WH沈Q ID NO: 12);
[0056] Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-35(HTyr-NH2(沈Q ID N0:13);
[0化7] Myr-Gly-Nle-Mrg-Pro-Tyr-NHs(沈Q ID NO: 14);
[0化引 ]?7尸617-饥6-114巧斗的-35(1口7尸畑2(沈9 10側：15);和
[0059] Myr-Gly-Nle-Mrg-4HyP-Tyr(沈Q ID N0:16)。
[0060] 每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0061] 根据特定的实施方案，提供了由通过任选的接头与包含核屯、序列RPY的序列共价 地连接的细胞渗透性增强部分组成的促血管发生肤缀合物，其中R是精氨酸残基或修饰的 精氨酸残基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨酸残基，其 中所述肤共有与邸G3的相应残基143-147的那些氨基酸相同的不超过3个氨基酸。
[0062] 之前公开的源自抓G3的肤的长度为至少6个氨基酸，并且包含与天然抓G3序列相 同或同源的至少5个残基。已知最短的肤是具有序列Nle-Arg-P:r〇-Ty:r-Asn-Ala(SEQ ID NO: 2)的肤R002L106，它包含在其6个位置中的4个中的与天然邸G3序列Met-Arg-Pro-Tyr-Asp-Ala(SEQ ID N0:3)的那些残基相同的残基(加下划线的），W及为存在于天然序列中的 残基的保守取代的残基(天冬酷胺代替天冬氨酸，斜体）。本发明的抓G3来源的序列更短，并 且包含与天然序列相同或同源的不超过3个连续残基。现在出乎意料地发现，负责血管生成 活性的核屯、序列是Arg-Pro-Tyr序列，并且比之前已知的肤更短的根据本发明的肤比较长 的序列更具活性，所述较长的序列与其所源自的天然序列具有更高的同源性。
[0063] 根据特定的实施方案，提供了包含核屯、序列RPY的肤缀合物，其中R是精氨酸残基 或修饰的精氨酸残基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨 酸残基，所述肤缀合物还包含通过任选的接头与肤偶联的渗透性增强部分。
[0064] 根据一些实施方案，活性肤被缀合到S肤Asp-Arg-Tyr、或其同源序列。
[0065] 根据一些实施方案，肤的氨基末端被修饰，例如其可被酷化。根据另外的实施方 案，簇基末端被修饰，例如其可被酷化、酷胺化、还原或醋化。
[0066] 明确的理解的是，之前已知的肤被排除在本发明之外。
[0067] 本文中所公开的肤的环状形式也在本发明的范围内。
[006引本领域已知的主动地或被动地促进化合物进入细胞或增强化合物进入细胞的渗 透性的任何部分可被用于与根据本发明的肤核屯、缀合。非限制性实例包括:疏水性部分，诸 如脂肪酸、类固醇和大的芳香族或脂肪族化合物;可具有细胞膜受体或载体的部分，诸如类 固醇、维生素和糖类、天然的和非天然的氨基酸W及转运体肤。根据优选的实施方案，疏水 性部分是脂质部分或氨基酸部分。
[0069]渗透性增强部分可与肤部分中的任何位置、优选地与肤部分的氨基末端直接地或 通过间隔物或接头连接。
[0070] 本发明的又另一个目标是提供促进血管和刺激血管发生的肤和缀合物，包括具有 另外提高的稳定性和细胞渗透性特性的拟肤化合物。此类化合物的非限制性实例包括:选 择的肤残基的N-烷基化;选择的肤残基的侧链修饰;非天然氨基酸;将氨基甲酸醋、脈、横酷 胺和阱用于肤键替换；W及通过肤键或非肤键并入非肤部分，所述非肤部分包括但不限于 赃晚、赃嗦和化咯烧。根据本发明的拟肤中的氨基酸残基之间的经修饰的键可选自由W下 组成的组:酷胺键、脈键、氨基甲酸醋键、阱键或横酷胺键。除非另有明确说明，否则氨基酸 残基之间的键全部是酷胺键。
[0071] 根据一些实施方案，根据本发明的肤或肤缀合物包含至少一个非天然编码的氨基 酸残基。
[0072] 根据一些特定的实施方案，至少一个非天然的氨基酸残基选自由W下组成的组： 正亮氨酸(Nle)、修饰的精氨酸(Arg)、修饰的脯氨酸(Pro)和修饰的酪氨酸(Tyr)。
[0073] 根据一些实施方案，核屯、序列RPY的至少一个残基是非天然编码的氨基酸残基或 修饰的残基。
[0074] 根据其他实施方案，根据本发明的肤缀合物包含至少一个非天然的渗透性增强部 分。
[0075] 在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分 的至少一种W上定义的肤或肤缀合物，所述药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂、稀 释剂或载体。
[0076] 根据一些实施方案，RPY序列选自由W下列组成的组：
[0077] Arg-Pro-Tyr；
[007引 Arg-Pr0-35(HTyr;
[00 巧]Mrg-Pro-Tyr;
[0080] Mrg-Pr〇-35dITyr;和
[0081] hArg-4Hyp-Tyr〇
[0082] 根据其他实施方案，所述药物组合物包含选自由W下组成的肤：
[0083] Gly-Arg-Pro-Tyr-WH沈Q ID NO.5);
[0084] Gly-Nle-Arg-Pro-Tyr-NHs(沈Q ID NO.6);
[00化]Gly-Nle-Arg-Pr〇-35(HTyr-NH2(沈Q ID N0.7);
[0086] Gly-Nle-Mrg-Pro-Tyr-WH沈Q ID NO.8);
[0087] 617-饥6-114巧斗的-35(1口7尸畑2(沈9 10側.9);和
[0088] Gly-Nle-Mrg-4HyP-Tyr(沈Q ID N0.10)。
[0089] 每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0090] 根据一个实施方案，药物组合物中包含的肤包含:经由直接的键或经由接头与所 述肤共价地连接W形成肤缀合物的渗透性增强部分，药学上可接受的载体。
[0091] 根据特定的实施方案，所述渗透性增强部分是脂肪酸并且所述接头是一段1-12个 氨基酸残基。
[0092] 根据一些特定的实施方案，所述接头由甘氨酸残基组成。
[0093] 根据另一个实施方案，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含按照式I的肤 缀合物：
[0094] Z-X-R-P-Y-B (式I)
[00M]其中Z表示经由直接的键或经由接头共价地连接的能够增加渗透性的部分，X表示 除了甲硫氨酸之外的天然的或合成的氨基酸残基，或X可不存在，R是精氨酸残基或修饰的R 残基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨酸残基，并且B表 示末端簇酸基、酷胺基、醋基或醇基。
[0096] 根据特定的实施方案，X是正亮氨酸残基。
[0097] 根据特定的实施方案，Z是豆違酷-甘氨酸(Myr-Gly)、X是正亮氨酸(Nle)、R选自由 精氨酸残基、高精氨酸残基化ArgKN-甲基精氨酸残基(醒eArg)、瓜氨酸残基、2-氨基-3-脈 基丙酸残基组成的组;P是脯氨酸残基或4径基脯氨酸残基(4Hyp)，并且Y选自由W下组成的 组:酪氨酸残基、3,5二舰酪氨酸残基(35d口yr)、3,5二漠酪氨酸残基(35地Tyr)和高酪氨酸 残基。
[0098] 根据一些实施方案，药物组合物中的肤缀合物选自由W下组成的组：
[0099] Myr-Gly-Arg-Pro-Tyr-WH沈Q ID NO. 11);
[0100] Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(沈Q ID N0.12);
[0101] Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-35(HTyr-NH2(沈Q ID N0.13);
[0102] Myr-Gly-Nle-Mrg-Pro-Tyr-NHs(沈Q ID NO. 14);
[0103] ]?7尸617-饥6-114巧斗的-35(1口7尸畑2(沈9 10側.15);和
[0104] Myr-Gly-Nle-Mrg-4HyP-Tyr(沈Q ID N0.16)。
[0105] 每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0106] 根据本发明的一些实施方案的药物组合物包含旨在提高稳定性、溶解度、渗透性， 或提供至少一种活性成分的特定、延长或调节(modified)释放的药学上可接受的载体。
[0107] 根据一些实施方案，所述载体适合于通过吸入施用。
[0108] 根据一些实施方案，根据本发明的用于通过吸入施用的制剂选自由脂质体制剂、 干粉制剂、悬液制剂、溶液制剂、计量剂量吸入器制剂和雾化器制剂组成的组。
[0109] 根据一些实施方案，用于吸入的制剂包含W下的至少一种：表面活性剂、推进剂 (propel Iant)和共溶剂。
[0110] 根据一些特定的实施方案，吸入制剂包含至少一种表面活性剂。
[0111] 根据一些特定的实施方案，吸入制剂包含纳米颗粒。
[0112] 根据一些实施方案，用于吸入的制剂包含直径小于化m的颗粒，W到达支气管区 域。
[0113] 根据一些特定的实施方案，干粉制剂包含乳糖。
[0114] 根据其他实施方案，提供了调节释放(modified-release)的药物组合物，所述调 节释放的药物组合物包含根据本发明的肤和至少一种载体。
[0115] 根据一些实施方案，调节释放的药物组合物为选自由W下组成的组的形式:可生 物降解的微球、非可生物降解的微球、任何合适的几何形状的植入物、可植入的棒、可植入 的胶囊、可植入的环、或延长释放的凝胶或易受侵蚀的基质。
[0116] 药物组合物可单独地施用或与诸如血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因 子(FG巧和干细胞因子(SC巧的其他血管发生刺激物一起施用。
[0117] 本发明的药物组合物可用于治疗其中发生血液供应不足的状况，或其中一种病因 或表现是功能异常的内皮、特别是特征为过量渗漏的内皮，或其中设及通过SlP受体的信号 传导的疾病和/或病理状况，诸如成人中的骨形成。
[0118] 根据本发明，源自内皮分化基因受体3化DG3)的第2个环的至少一种肤或肤缀合物 被用于制备用于预防或治疗其中发生血液供应不足的状况，其中一种病因或表现是功能异 常的内皮、特别是特征为过量渗漏的内皮的病理状况，或其中设及SlP的状况(诸如成人中 的骨形成）的治疗性药物，所述肤或肤缀合物包含核屯、序列RPY，其中R是精氨酸残基或修饰 的精氨酸残基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨酸残基， 其中所述肤不包含与在邸G3的所述第2个环的相同位置处存在的残基相同的另外的残基。
[0119] 根据本发明，源自内皮分化基因受体3化DG3)的第2个环的至少一种肤或肤缀合物 被用于预防或治疗其中发生血液供应不足的疾病或状况，或其中设及SlP信号传导的状况， 所述肤或肤缀合物包含核屯、序列RPY，其中R是精氨酸残基或修饰的精氨酸残基，P是脯氨酸 残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨酸残基，其中所述肤不包含与在 邸G3的所述第2个环的相同位置处存在的残基相同的另外的残基。特别地，根据本发明的肤 和肤缀合物可用于促进血管生长或内皮功能改善。
[0120] 根据特定的实施方案，疾病或状况由功能异常的内皮导致（resulted)或引起 (caused)。
[0121] 根据其他实施方案，状况包括骨质流失。根据一些特定的实施方案，状况是骨质疏 松症。
[0122] 根据一些特定的实施方案，疾病或状况选自由W下组成的组:外周血管疾病;缺血 性疾病，包括但不限于屯、肌缺血;组织移植;冠状动脉疾病；中风;延迟的伤口愈合;肺病，包 括急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和通气诱发的肺损伤(VILI);眼病，包括 年龄相关的黄斑病变(AMD); W及与严重感染相关的病理状况，诸如例如脈毒症。每个可能 性代表本发明的单独的实施方案。
[0123] 根据一些实施方案，提供了根据本发明的肤或肤缀合物用于预防或治疗脈毒性休 克（septic shock)。
[0124] 根据其他实施方案，疾病或状况的特征在于膜腺e细胞功能不足。
[0125] 根据又另一个实施方案，待预防、改善或治疗的疾病或状况是糖尿病或膜岛移植。
[0126] 根据某种具体的实施方案，本发明的药物组合物W药物洗脱支架提供，所述药物 洗脱支架用于预防或治疗屯、肌缺血或冠状动脉疾病。每个可能性代表本发明的单独的实施 方案。
[0127] 本发明还设及一种用于预防或治疗其中发生血液供应不足的状况、其中内皮功能 恶化的状况、或其中状况通过SlP受体信号传导介导的状况的方法，所述方法包括向需要其 的受试者施用治疗有效量的根据本发明的药物组合物。
[0128] 根据特定的实施方案，其中发生血液供应不足或其中内皮功能恶化的疾病或状况 选自由W下组成的组:外周血管疾病；屯、肌缺血;组织移植;冠状动脉疾病；中风;糖尿病;膜 岛移植；W及延迟的伤口愈合;肺病，包括急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和 通气诱发的肺损伤(VILI);眼病，包括年龄相关的黄斑病变(AMD); W及与严重感染相关的 病理状况，诸如例如脈毒症。每个可能性代表本发明的单独的实施方案。
[0129] 根据一些实施方案，通过SlP受体介导的状况包括骨质流失。根据一些特定的实施 方案，所述状况是骨质疏松症。
[0130] 根据一些实施方案，提供了一种预防或治疗脈毒性休克的方法，所述方法包括向 需要其的受试者施用根据本发明的药物组合物。
[0131] 根据本发明的另一方面，提供了一种包含根据本发明的药物组合物的支架。
[0132] 还提供了一种包含根据本发明的药物组合物的支架，所述支架用于预防或治疗屯、 肌缺血或冠状动脉疾病。
[0133] 本发明还包括预防或治疗屯、肌缺血或冠状动脉疾病的方法，所述方法包括向需要 其的受试者施用根据本发明的支架。
[0134] 本发明的另外的实施方案和适用的完整范围根据下文给出的详述将变得明显。但 是，应当理解的是，详述和具体的实施例尽管表明本发明的优选的实施方案，但仅W示例性 的方式给出，因为在本发明的精神和范围内的多种变化和修改根据该详述对本领域技术人 员将变得明显。
[0135] 附图简述
[0136] 图1A-1C显示了如由主动脉环毛细管长度确定的，在主动脉环测定中毛细管形成 被沈Q ID N0:13(图1A)、14(图1B)和12(图1C)的肤诱发。
[0137] 图2A-2C显示了如通过主动脉环毛细管宽度确定的，在主动脉环测定中毛细管形 成被沈Q ID N0:13(图1A)、14(图1B)和12(图1C)的肤诱发。
[0138] 图3显示了在小鼠中的缺血腿模型中，SEQ ID NO: 9的化合物与SEQ ID NO: 1的化 合物对灌注(LDI)的影响。
[0139] 图4展示了在主动脉环测定中，SEQ ID NO: 13和14的肤与VEGF的协同作用。
[0140] 图5示出了表明在脈毒性休克模型中肤SEQ ID NO: 12(GPS-725.017)挽救小鼠免 于死亡的能力的体内结果。用媒介物或2〇111旨/蛇的6?5-725.017(56〇10^:12)-天一次对 C57化小鼠（每组15只）皮下(S.C.)注射，持续5天。
[0141] 发明详述
[0142] 由于在有机化学和分子生物学上的重大进展，现在能够W足够用于药物和临床使 用的量制备许多生物活性肤。因此在最近几年，已经建立了用于治疗和诊断疾患的新方法， 其中已设及肤。但是，将肤用作治疗剂和诊断剂被W下因素限制:a)组织渗透;b)在胃肠道 中W及在血清中趋向蛋白质水解的低的代谢稳定性;C) 口服摄取后差的吸收，特别是由于 其相对高的分子量或缺少特定的转运系统或二者;d)通过肝脏和肾脏的快速排泄；W及e) 在非祀器官系统中的不期望的副作用，因为肤受体可在生物体中广泛分布。本发明提供了 运样的生物活性肤:a)由于其小的尺寸和任选的渗透性部分而具有改进的组织渗透性;b) 由于封闭的末端并且并入非天然的氨基酸而具有改进的代谢稳定性;C)由于其低的分子量 和任选的渗透性部分而具有改进的吸收;d)由于其低的分子量和短的序列而较容易且较便 宜地被生产；并且e)预期对它们所源自的抓G3受体是选择性的，并且因此预期具有较少的 副作用。
[0143] 如在表1中呈现的，之前公开的源自抓G3的肤长度为至少6个氨基酸并且包含与天 然邸G3序列相同或同源的至少5个残基。已知最短的肤是肤R002L106(725-106，SEQ ID NO: 2)，它包含在其6个位置中的4个中的与天然序列的那些残基相同的残基，W及为存在于天 然序列中的残基的保守取代的残基(天冬酷胺代替天冬氨酸）。本发明的一些源自抓G3的序 列长度为仅4个氨基酸，并且包含在不超过=个位置处与天然序列相同或同源的残基。出乎 意料的是运些短了至少30%的序列比较长的序列更具活性，所述较长的序列与其源自的天 然序列具有更高的同源性。
[0144] 表1.
[0145]
[C
[0147] Nle是正亮氨酸残基，hArg表示高精氨酸残基，4HyP表示4-径基脯氨酸残基，且 35(HTyr表示3，5-二舰酪氨酸残基。
[0148] 根据本发明的特定的实施方案，在表1的B部分中展示的新序列作为本申请中公开 的新型分子的基础，所述新型分子还包含通过任选的间隔物与肤、优选地与肤的N末端偶联 的细胞渗透性部分。
[0149] 不希望被束缚于理论，本发明的肤通过引发Gi-依赖性信号转导同时抑制G12/13 信号传导来模拟S1P3化DG3)的天然配体1-憐酸銷氨醇（SlP)的作用，所述肤包含与抓G3受 体共有仅3个氨基酸的序列同源性的序列。猜测G-蛋白抑制物百日咳毒素抑制由本发明的 肤诱发的血管发生。
[0150] 现在通过离体(从包埋在胶原基质中的小鼠主动脉环中使血管出芽)和体内实验 (小鼠缺血后肢测定）显示，根据本发明的肤诱发多层和成熟的血管(multi-layered and mature vessel)的形成。该结果表明，与在相同的条件下单独测试的VEGF相比，运些肤与内 源蛋白血管发生因子(如VEGF)协同作用并且刺激成熟且稳定的血管的形成。由于在缺血区 域蛋白血管发生因子如VEGF的水平增加，施用本发明的肤作为单一疗法将通过与局部分泌 的内源因子协同作用而在原位产生期望的血管发生效应。
[0151] 另外，现在显示根据本发明的肤在体内预防血管渗漏。结果表明，运些肤增强血管 完整性并且抑制大分子逃逸到间质液。
[0152] 优选地，使用本领域已知的常规合成技术，例如通过化学合成技术包括拟肤方法 学合成本发明的肤。运些方法包括专用固相合成、部分固相合成方法、片段缩合、经典溶液 合成（classical solution synthesis)。固相肤合成程序是本领域中众所周知的，并由 John Morrow Stewart和Janis Dillaha Young,Solid Phase Peptide Syntheses(第2片反， Pierce化emical Company ,1984)进一步描述。本领域技术人员可通过使用自动化肤合成 仪利用标准化学法例如t-Boc化学法或Fmoc化学法合成本发明的任何肤。合成的肤可通过 制备型高效液相色谱法（Creighton T.1983P;roteins，structures and molecular principles.WH Freeman and Co.N.Y.)来纯化，并且其组成可经由氨基酸测序来确认。本 发明的一些肤(其仅包含天然的、即遗传编码的氨基酸)还可利用本领域已知的重组DNA技 术来制备。肤和渗透性部分的缀合可利用本领域已知的任何方法，通过固相化学法或液相 化学法来进行。本发明的一些优选的化合物可利用液相合成方法来方便地制备。本领域已 知的用于制备化合物如本发明的那些化合物的其他方法可被使用并且被包括在本发明的 范围内。
[0153] 本文公开的肤的环状形式也在本发明的范围内。肤的环化可通过本领域已知的任 何方法进行，例如通过存在于肤序列中的游离氨基和簇基，或者通过添加的用于环化的氨 基酸或部分进行。环化类型的非限制性实例是:侧链与侧链环化、C与N末端环化、侧链与末 端环化、W及如在例如WO 95/33765中描述的并入至少一个护-O-取代的氨基酸残基的任 何类型的主链环化。
[0154] 本发明的缀合物的渗透性增强部分可与肤部分中的任何位置直接地或通过间隔 物连接。根据特定的实施方案，细胞渗透性部分被连接到肤部分的氨基末端。任选的连接间 隔物可具有不同的长度和构象，包括任何合适的化学成分，包括但不限于胺、酷胺、氨基甲 酸醋、硫酸、氧酸、横酷胺键等。此类间隔物的非限制性实例包括氨基酸、讽酷胺衍生物、氨 基硫醇衍生物和氨基醇衍生物。
[01巧]定义
[0156] 为了方便和清晰，本说明书、实施例和权利要求中采用的某些术语在本文中被描 述。
[0157] 如本文所用的术语"肤"意指包含天然的（遗传编码的）、非天然的和/或化学修饰 的氨基酸残基，每个残基的特征为具有通过肤键或非肤键彼此连接的氨基末端和簇基末 端。如本领域通常已知的，贯穿本说明书和权利要求书中的氨基酸W-个或=个字母代码 来表示。尽管将领会到在其中环化不严重干扰肤特征的情况中，肤的环状形式也可被使用， 本发明的肤优选地W线状形式被使用。
[0158] 本发明中使用的氨基酸是市售可得的或通过常规合成方法可得的那些氨基酸。某 些残基可能需要特定的方法用于并入肤中，且肤序列的连续、发散(divergent)或收敛式 (convergent)合成方法可用于本发明中。天然编码的氨基酸和其衍生物根据IUPAC惯例由 =字母代码表示。在没有说明时，可使用L异构体或D异构体。
[0159] 如本领域技术人员已知的氨基酸的保守取代在本发明的范围内。保守的氨基酸取 代包括将一个氨基酸替换为另一个具有相同类型的官能团或侧链例如脂肪族、芳香族、带 正电荷、带负电荷的氨基酸。运些取代可增强口服生物利用度、对祀蛋白的亲和力、代谢稳 定性、渗透到中枢神经系统、祀向特定细胞群体等。技术人员将认识到，对肤、多肤或蛋白序 列的改变、添加或缺失编码的序列中的单个氨基酸或小百分比的氨基酸的各个取代、缺失 或添加是"保守地修饰的变体"，其中改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸取代。提供功 能上相似的氨基酸的保守取代表是本领域熟知的。
[0160] W下六组的每组包含是彼此的保守取代的氨基酸：
[0161] 1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T);
[0162] 2)天冬氨酸(D)、谷氨酸化）；
[0163] 3)天冬酷胺(N)、谷氨酷胺(Q);
[0164] 4)精氨酸(R)、赖氨酸化）；
[0165] 5)异亮氨酸(I)、亮氨酸化)、甲硫氨酸(M)、鄉氨酸(V);和
[0166] 6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
[0167] 本发明的肤的盐、肤的类似物和化学衍生物也被包括在本发明的范围内。
[0168] 如本文所用的术语"盐"指肤分子的簇基的盐W及氨基或脈基的酸加成盐。簇基的 盐可通过本领域已知的方法形成，且包括:无机盐，例如钢盐、巧盐、锭盐、铁盐或锋盐等;和 与有机碱形成的盐，诸如，例如与胺诸如=乙醇胺、赃晚、普鲁卡因等形成的盐。酸加成盐包 括例如与矿物酸形成的盐，所述矿物酸诸如例如乙酸或草酸。本文描述的盐还包括添加到 肤溶液W增强水凝胶形成和/或巧矿物质的矿化的离子组分。
[0169] 本文所用的"化学衍生物"指包含通常不是肤分子的一部分的一个或更多个化学 部分的肤，所述化学部分诸如游离簇基的醋和酷胺、游离氨基的酷基和烷基衍生物、游离径 基的憐酸醋和酸。此类修饰可通过使祀向的肤的氨基酸残基与能够与选择的侧链或末端残 基反应的有机衍生剂反应而被引入到分子中。优选的化学衍生物包括已被憐酸化、C-末端 酷胺化或N-末端乙酷化的肤。
[0170] 如本文中所用的本发明的肤的"功能衍生物"涵盖了可通过本领域已知的方法从 在残基上作为侧链存在的官能团或者N-或C-末端基团制备的的衍生物，并且只要所述衍生 物保持药学上可接受的，即，它们不会破坏肤的活性、不赋予包含它的组合物毒性特性且不 会不利地影响其抗原特性，则它们被包括在本发明中。例如，运些衍生物可包括簇基的脂肪 族醋、通过与锭或与伯胺或仲胺反应产生的簇基的酷胺、通过与酷基部分（例如，烧酷基 (a化anoyl)或碳环芳酷基)反应形成的氨基酸残基的游离氨基的N-酷基衍生物或通过与酷 基部分反应形成的游离径基(例如丝氨酷或苏氨酷残基的径基)的0-酷基衍生物。
[0171] 术语"肤类似物"表示除了一个或更多个氨基酸改变或酷胺键的一个或更多个修 饰/替换之外具有根据本发明的氨基酸序列的分子。肤类似物包括天然或非天然氨基酸残 基的氨基酸取代和/或添加，W及在自然界中不存在的化学修饰。肤类似物包括肤模拟物。 肤模拟物或"拟肤"意指根据本发明的肤W其包含至少一个非编码残基或非肤键的方式被 修饰。此类修饰包括:例如，一个或更多个残基的烷基化和更具体的甲基化，使非天然氨基 酸插入或替换天然氨基酸，用其他共价键替换酷胺键。根据本发明的拟肤可任选地包含为 酷胺替换键的至少一个键，所述酷胺替换键诸如脈键、氨基甲酸醋键、横酷胺键、阱键或任 何其他共价键。合适的"类似物"的设计可由计算机辅助。根据本发明的另外的肤类似物包 含呈相反顺序的特定肤或肤类似物序列，即，氨基酸在肤序列中W与在天然蛋白中或在被 鉴定为有活性的特定的肤或类似物中呈现的氨基酸顺序相反的顺序偶联。不论是完全或部 分非肤，根据本发明的拟肤提供与所述拟肤基于的肤中的基团的=维布置十分相似的化学 部分的空间布置。由于该相似的活性位点结构，拟肤对生物系统具有与肤的生物活性相似 的作用。
[0172] 修饰的氨基酸残基是其中任何基团或键通过缺失、添加或用不同的基团或键替换 而被修饰的氨基酸残基，只要氨基酸残基的功能被保留，或如果功能改变(例如用取代的苯 丙氨酸替换酪氨酸），只要该修饰不损害包含该修饰的残基的肤的活性即可。
[0173] 根据本发明的"肤缀合物"表示包含肤或非肤的另一个部分与其直接地或经由接 头共价键合的血管促进肤的序列的分子。
[0174] 术语"接头"表示其目的是共价地连接细胞渗透性部分和肤或拟肤的化学部分，任 何类型的直接的化学键或间隔物。间隔物可被用于允许渗透性增强部分和肤之间的距离。
[0175] "渗透性"指剂或物质渗透、弥散或扩散通过障碍物、膜、或皮层的能力。"细胞渗透 性"或"细胞渗透"部分指在本领域中已知的能够促进或增强分子渗透通过膜的任何分子。 非限制性实例包括:疏水性部分，诸如脂质、脂肪酸、类固醇和大的芳香族或脂肪族化合物； 可具有细胞膜受体或载体的部分，诸如类固醇、维生素和糖类、天然的和非天然的氨基酸、 转运体肤、纳米颗粒W及脂质体。
[0176] 根据本发明的疏水性部分可优选地包括脂质部分或氨基酸部分。根据特定的实施 方案，疏水性部分选自由W下组成的组:憐脂、类固醇、銷氨醇、神经酷胺、辛基-甘氨酸、2-环己基丙氨酸、苯甲酯苯丙氨酸、丙酷基(C3)、下酷基(C4)、戊酷基(C5)、己酷基(C6)、庚酷基 化7)、辛酷基化8)、壬酷基化9)、癸酷基((：1〇)、^^一酷基(Cn)、月桂酷基(Ci2)、十S酷基(Ci3)、 豆違酷基(Ci4)、十五酷基(Ci5)、栋桐酷基(Ci6)、地化noyl((C曲)4)、十屯酷基(Ci7)、硬脂酷 基（〔18)、十九酷基（〔19)、花生酷基（日^证1(1〇71)(〔2日）、116]116(303日]1〇71(〔21)、二十二酷基 (C22) Urucisanoyl(C23)、和二十四酷基（lignoce;r〇5d)(C24);其中所述疏水性部分通过酷 胺键、琉基、胺、醇、酪基或碳-碳键附接到所述嵌合多肤。
[0177] 根据本发明可使用的脂质部分的其他实例：Lipof ectamine、Transf ectace、 Transfectam、Cytofectin、DMRIE、DLRIE、GAP-DLRIE、DOTAP、DOPE、DMEAP、DODMP、DOPC、 DDAB、DOSPA、抓LPC、抓 MPC、DPH、TMADPH、CTAB、赖氨酷-PE、DC-Cho、-丙氨酷胆固醇；DCGS、 DPPE S、DCPE、DMAP、DMPE、DOGS、DOHME、DPEPC、普朗尼克（P1 ur on i C )、Twe en、服IJ、缩醒憐脂、 憐脂酷乙醇胺、憐脂酷胆碱、甘油-3-乙基憐脂酷胆碱、二甲基锭丙烷、=甲基锭丙烷、二乙 基锭丙烷、=乙基锭丙烷、二甲基双十八烷基漠化锭、銷脂、銷憐脂、溶血脂质（lysolipid)、 糖脂、硫巧脂、銷糖脂、胆固醇、胆固醇醋、胆固醇盐、油、N-班巧酷二油酷憐脂酷乙醇胺、1， 2-二油酷-Sn-甘油、1，3-二栋桐酷-2-班巧酷甘油、1，2-二栋桐酷-sn-3-班巧酷甘油、1-十 六烷基-2-栋桐酷甘油憐脂酷乙醇胺、栋桐酷高半脫氨酸、N，N'-双(十二烷基氨基幾基亚甲 基)-N，N'-双（（-N，N，N-ミ甲基锭乙基-氨基幾基亚甲基）乙二胺四舰化物、N，N"-双(十六烧 基氨基幾基亚甲基)-N，N'，N"-S((-N，N，N-S甲基锭-乙基氨基幾基亚甲基二乙締 S胺六 舰化物;N，N'-双什二烷基氨基幾基亚甲基)-N，N"-双（（-N，N，N-S甲基锭乙基氨基幾基亚 甲基)亚环己基-1,4-二胺四舰化物；1，7,7-四-((-N，N，N，N-四甲基锭乙基氨基-幾基亚甲 基)-3-十六烷基氨基幾基-亚甲基-1，3，7-S氮杂庚烧屯舰化物;N，N，N'，N'-四（（-N，N，N-S甲基锭-乙基氨基幾基亚甲基)-N'-(l，2-二油酷基丙S基-3-憐酸乙醇氨基幾基亚甲基） 二乙締基=胺四舰化物;二油酷基憐脂酷乙醇胺、脂肪酸、溶血脂质、憐脂酷胆碱、憐脂酷乙 醇胺、憐脂酷丝氨酸、憐脂酷甘油、憐脂酷肌醇、銷脂、糖脂（glycol ip id)、糖脂 (glucolipid)、硫巧脂、銷糖脂、憐脂酸、栋桐酸、硬脂酸、花生四締酸、油酸、具有聚合物的 脂质、具有横化的糖类的脂质、胆固醇、生育酪半班巧酸醋、具有酸连接的脂肪酸的脂质、具 有醋连接的脂肪酸的脂质、聚合的脂质、二乙酷基憐酸醋、硬脂胺、屯、憐脂、具有长度为6-8 个碳原子的脂肪酸的憐脂、具有不对称酷基链的憐脂、6-(5-胆酱締-3b-基氧基)-1-硫代-b-D-化喃半乳糖巧、双半乳糖基二甘油醋、6-(5-胆酱締-3b-基氧基）己基-6-氨基-6-脱氧- 1- 硫代-b-D-化喃半乳糖巧、6-(5-胆酱締-3b-基氧基）己基-6-氨基-6-脱氧-1-硫代-a-D-化喃甘露糖巧、12-(( (7'-二乙基氨基-香豆素-3-基）幾基）甲基氨基）-十八烧酸;N-[12-(((7'-二乙基氨基香豆素-3-基)幾基）甲基-氨基）十八酷基]-2-氨基栋桐酸;胆酱醇基） 4'-;甲基-锭基灯酸醋;N-班巧酷基二油酷基-憐脂酷乙醇胺；1,2-二油酷基-Sn-甘油；1， 2- 二栋桐酷基-sn-3-班巧酷基-甘油；1,3-二栋桐酷基-2-班巧酷基甘油、1-十六烷基-2-栋 桐酷基丙=基-憐酸乙醇胺、和栋桐酷高半脫氨酸。
[017引术语"血管生长"指"血管发生"的过程和"动脉发生(aderiogenesis)"的过程二 者。
[0179] 术语"血管发生"（有时也被称为"新血管形成"）是用来表示在正常和病理状况两 者中新血管的生长的一般术语。
[0180] 术语"生理上可接受的载体"或"稀释剂"或"赋形剂"指良好地适用于药物制品的 水性或非水性流体。此外，术语"药学上可接受的载体或赋形剂"指至少一种载体或赋形剂 并且包括载体和或赋形剂的混合物。术语"治疗剂(therapeutic)"指可被用于治疗(包括预 防、诊断、缓解或治愈)患者中的病症(malady)、疾苦(affliction)、疾病或损伤的任何药物 (pharmaceutical)、药物(化Ug)或预防剂。
[0181] 药理学
[0182] 除了其他考虑之外，本发明的新型活性成分是肤、肤类似物或拟肤的事实表明制 剂适合用于递送运些类型的化合物。虽然由于易被胃酸或肠道酶消化，通常肤较不适合用 于口服施用，正在利用新的方法W设计并提供代谢上稳定且口服生物可利用的拟肤类似 物。
[0183] 本发明的药物组合物可通过任何适合的方式施用，诸如口服、局部、鼻内、皮下、肌 肉内、静脉内、动脉内、关节内、病灶内、通过吸入或肠胃外，并且被具体地配制用于施用途 径。通常地，肠胃外施用或通过吸入施用将是优选的，并且组合物将被相应地配制。
[0184] 本发明的药物组合物可通过本领域熟知的方法来制备，例如通过常规的混合、溶 解、制粒、研磨、粉碎、制成糖衣丸、研细、乳化、包封、包埋或冻干过程来制备。
[0185] 因此，根据本发明用于使用的药物组合物可使用一种或更多种生理上可接受的载 体包括赋形剂和助剂W常规的方式配制，所述生理上可接受的载体包括赋形剂和助剂促进 将活性化合物加工到制品中，所述制品可在药学上使用。适当的制剂取决于所选的施用途 径。
[0186] 可口服使用的药物组合物包括由明胶制成的推入配合式(push-fit)胶囊W及由 明胶和塑化剂诸如甘油或山梨醇制成的软、密封的胶囊。推入配合式胶囊可包含活性成分， 所述活性成分与填充物诸如乳糖、粘合剂诸如淀粉、润滑剂诸如滑石或硬脂酸儀、W及任选 地稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物可被溶解或悬浮在合适的液体中，诸如脂肪油、液 体石蜡或液态聚乙二醇。另外，可添加稳定剂。
[0187] 对于注射，可将本发明的化合物配制在水性溶液中、优选地在生理上相容的缓冲 液中，所述生理上相容的缓冲液诸如化nk'S溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。对于经粘 膜施用，在制剂中使用适合于待被渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂例如聚乙二醇在本领 域中是普遍已知的。
[0188] 提供了具有合适的包衣的糖衣丸核屯、。为了运个目的，可使用浓缩的糖溶液，所述 浓缩的糖溶液可任选地包含阿拉伯树胶、滑石、聚乙締化咯烧酬、卡波姆凝胶、聚乙二醇、二 氧化铁、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将着色剂或色素添加到片剂或糖衣丸 包衣，用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。
[0189] 对于含服施用，组合物可采取W常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
[0190] 对于通过吸入施用，根据本发明的用于使用的变体通过使用合适的推进剂W气溶 胶喷雾外观的形式从加压的包或喷雾器被方便地递送，所述推进剂例如二氯二氣甲烧、= 氯氣甲烧、二氯-四氣乙烧或二氧化碳。在加压的气溶胶的情况中，可通过提供阀W递送计 量的量来确定剂量单位。例如，用于在吸入器或吹入器中使用的明胶的胶囊和套筒 (cartridges)可被配制为包含肤和合适的粉末基质诸如乳糖或淀粉的粉末混合物。
[0191] 用于肠胃外施用的药物组合物包括水溶性形式的活性成分的水性溶液。另外，活 性化合物的悬液可被制备作为适当的油性注射悬液。合适的天然或合成的载体在本领域是 众所周知的（PiIlai等Curr .Opin.Chem.Biol .5,447,2001)。任选地，悬液还可包含合适的 稳定剂或增加化合物的溶解度的剂，W允许制备高度浓缩的溶液。可选地，活性成分可W为 用于在使用前用合适的媒介物例如无菌、无热原的水重构的粉末形式。
[0192] 本发明的化合物还可使用例如常规栓剂基质诸如可可油或其他甘油醋被配制成 直肠用组合物，诸如栓剂或保留灌肠剂(retention enemas)。
[0193] 在屯、肌缺血和冠状动脉疾病的情况中，用于预防和/或治疗此类状况的优选的方 法将是将治疗性肤并入到药物洗脱支架中。支架正被广泛地用于治疗此类状况，并且具有 可容纳药物的聚合物的支架的包衣是本领域熟练的人员熟知的。根据本发明的治疗性肤经 由药物洗脱支架的局部释放可W是有优势的，因为在屯、肌的期望位点处获得高的浓度同时 全身性浓度可变得可忽略。
[0194] 适用于本发明的上下文的药物组合物包括其中W有效获得预期目的的量包含活 性成分的组合物。更具体地，治疗有效量意指有效预防、缓解或改善待治疗的受试者的疾病 的症状的化合物的量。治疗有效量的确定良好地在本领域技术人员的能力内。
[0195] 本文描述的肤的毒性和治疗效果能够通过在细胞培养物或实验动物中的标准药 物学程序来确定，例如通过确定主题化合物的IC50(提供50%抑制的浓度）和LD50(导致 50%的测试动物死亡的致死剂量)来确定。从运些细胞培养物测定和动物研究获得的数据 可被用于配制用于在人类中使用的剂量范围。剂量可根据采用的剂型和使用的施用途径而 变化。准确的制剂、施用途径和剂量可由个体医师根据患者的情况选择（例如Fingl,等， 1975,于叮he Pharmacological Basis of Therapeutics"，第I章第顶）。
[0196] 用于施用此类药物组合物的优选的剂量的范围为从约O.liig/kg到约20mg/kg体 重。优选地，活性成分的量的范围为从约IOygAg到5000]ig/kg。
[0197] 根据待被治疗的状况的严重度和反应性，给药也可W是单次施用缓释组合物，具 有从若干天持续到若干周或直到达到治愈或实现疾病状态的减少的疗程。待施用的组合物 的量将当然地取决于待被治疗的受试者、疾苦的严重度、施用方式、处方医师的判断W及所 有其他相关因素。
[0198] 在某些实施方案中，可通过使用保护性赋形剂来增强肤的递送。运通常通过将肤 与使其耐受酸水解和酶促水解的成分复合或通过将多肤包装在适当的耐受性载体诸如脂 质体中来完成。保护用于口服递送的多肤的方法是本领域熟知的（参见例如美国专利号5， 391，377，描述了用于口服递送治疗剂的脂质成分）。
[0199] 可通过使用持续释放的蛋白"包装"系统来维持升高的血清半衰期。此类持续释放 系统是本领域技术人员熟知的。在一个优选的实施方案中，用于蛋白和肤的ProLease可生 物降解的微球递送系统（Tra巧，1998,Biotechnol .Prog. 14,108; Johnson等 1996,化ture Med. 2,795; He;rbe;rt等1998, Pharmaceut. Res. 15,357)是包括可生物降解的聚合物微球的 干燥粉末，所述可生物降解的聚合物微球在聚合物基质中包含蛋白质，所述干燥粉末可被 复合成干燥制剂、具有或不具有其他剂。
[0200] 在某些实施方案中，本发明的组合物的剂型包括但不限于可生物降解的可注射的 药性持久(depot)的系统，诸如基于PLGA的可注射的药性持久的系统、非基于PLGA的可注射 的药性持久的系统和可注射的可生物降解的凝胶或分散体。每个可能性代表本发明的单独 的实施方案。如本文所用的术语"可生物降解的"指至少部分地由于与在周围组织液中发现 的物质接触，或通过细胞活动，而随时间推移在其表面侵蚀或降解的组分。特别地，可生物 降解的组分是聚合物，诸如但不限于:基于乳酸的聚合物，诸如聚丙交醋，例如聚化，k丙交 醋）即PLA;基于乙醇酸的聚合物，诸如聚乙交醋（PGA)，例如来自DureCt的Lactel液;柴（D， レ丙交醋-共-乙交醋）即化GA,(来自Boehringer的Resomei-⑩RG-504、Resomer饭RG-502、Resomer液RG-504H、Resomer衝RG-502H、Resomer?l;G-5〇4S、Resomer?饭 RG-502S;来自Durect的Lactel愈）；聚己内醋，诸如聚（e-己内醋）即PCL (来自Durect的Lact站愈 );聚酸酢;聚(癸二酸)SA;聚（藍麻油酸)RA;聚（富马酸），FA;聚(脂肪酸二聚体），FAD;聚(对 苯二甲酸），TA;聚（间苯二甲酸），IPA;聚(P-徽基苯氧基}甲烧），CPM;聚(P-徽基苯氧基} 丙烷），CPP;聚(p-{簇基苯氧基}己烧），CPH;聚胺、聚氨醋、聚酷胺醋、聚原酸醋{CHDM:顺式/ 反式-环己基二甲醇，皿：1，6-己二醇.061'011:(3,9-二亚乙基-2,4,8，10-四氧杂螺^^一 烧）};聚二氧环己酬；聚径基下酸醋；聚亚控基草酸醋；聚酷胺;聚酷胺醋；聚氨醋；聚缩醒； 聚缩酬;聚碳酸醋;聚原碳酸醋;聚硅氧烷;聚憐腊;班巧酸盐/醋;透明质酸;聚(苹果酸）；聚 (氨基酸）；聚径基戊酸盐/醋;聚亚控基班巧酸盐/醋;聚乙締化咯烧酬;聚苯乙締;合成的纤 维素醋；聚丙締酸；聚下酸；S嵌段共聚物（PLGA-PEG-化GA)、S嵌段共聚物（PEG-PLGA-阳G)、聚(N-异丙基丙締酷胺KPNIPAAm)、聚(环氧乙烧)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烧)S嵌 段共聚物(PEO-PPO-PEO)、聚戊酸;聚乙二醇;聚径基烷基纤维素;几下质;壳聚糖;聚原酸醋 和共聚物、=元共聚物;脂质，诸如胆固醇、卵憐脂;聚(谷氨酸-共-谷氨酸乙醋)等，或其混 合物。
[0201] 在一些实施方案中，本发明的组合物包含选自但不限于W下的可生物降解的聚合 物:PLGA、PLA、PGA、聚己内醋、聚径基下酸盐/醋、聚原酸醋、聚烧控酸酢、明胶、胶原、氧化的 纤维素、聚憐腊等。每个可能性代表单独的实施方案。
[0202] 药性持久的系统
[0203] 通过静脉内（IV)、肌肉内（IM)、或皮下（SC)注射的肠胃外途径是小分子量和大分 子量药物的最常用且有效的递送形式。但是，由于针刺造成的疼痛、不适和不便使该药物递 送模式成为最不被患者优选的。因此，能够最低限度地减少注射的总次数的任何药物递送 技术是优选的。在实践中药物给药的频率的此类减少可通过使用能够W缓慢但可预测的方 式释放药物并且因此提高依从性的可注射的药性持久的制剂来实现。对于大多数药物，根 据剂量将注射频率从每日一次减少到每月一次或两次或甚至更久(6个月）是可能的。除了 提高患者的舒适度之外，呈药性持久的制剂的形式的药物的较少频率的注射通过消除峰和 谷使血浆浓度-时间曲线平滑。使血浆曲线的此平滑不仅具有在大多数病例中增加治疗益 处的潜能，还具有减少任何不希望的事件诸如免疫原性的潜能。
[0204] 微粒、植入物和凝胶是在实践中使用用于延长药物在身体中的释放的可生物降解 聚合物装置的最常见形式。将微粒在临注射之前悬浮在水性介质中，并且技术人员可在悬 液中装载多达40%的固体。借助于特殊的针将植入物/棒状制剂W干燥状态递送到SCVIM组 织，而不需要水性介质。棒/植入物的该特征允许较高的质量的制剂和药物含量被递送。此 夕h在棒/植入物中，由于与微粒相比植入物中的小得多的面积(area),初始的爆发问题被 最小化。除了可生物降解的系统之外，存在能够在身体外部使用的非可生物降解的植入物 和输注累。非可生物降解的植入物需要医生访问，不仅为了将装置植入到SC/IM组织，也为 了在药物释放时期之后将它们移除。
[0205] 包含微粒制品的可注射组合物特别容易出现问题。与其他类型的可注射悬液中的 0.5-5 %的固体相比，微粒悬液可包含多达40 %的固体。另外，与推荐用于IM或SC施用的小 于扣m的颗粒尺寸相比，在可注射的药性持久的产品中使用的微粒的尺寸范围多达约250WI1 (平均60-100皿)。较高的固体浓度和较大的固体颗粒尺寸需要较大尺寸的针(约18-21标准 规格(gauge))用于注射。总而言之，虽然不频繁地使用较大且不舒适的针，患者仍偏爱较少 频率地施用的剂型超过用较小的针的每天药物注射。
[0206] 可生物降解的聚(乳酸KPLA)的聚醋W及被称为聚(丙交醋-共-乙交醋）的丙交醋 和乙交醋的共聚物(PLGA)是用于可生物降解的剂型的最常见聚合物。PLA是疏水性分子，并 且化GA由于存在较多的亲水性乙交醋基团而比化A降解的快。运些生物相容性聚合物经历 醋键的随机、非酶促、水解裂解W形成乳酸和乙醇酸，乳酸和乙醇酸是身体内的正常代谢化 合物。可吸收的缝合线、夹子（cl ip)和植入物是运些聚合物的最早的应用。Southern Research Institute在1970年开发出了第一种合成的、可吸收的缝合线（Dexoil⑧)。在 1973年出现了描述PLGA聚合物在持续释放剂型中的使用的第一个专利化S 3,773,919)。
[0207] 现今，PLGA聚合物从多个供应商Alke;rmes(Mediso;rb polymers) ,Absorbable Polymers International [先前的Birmingham Polymers(Durect的部口）]、Purac和 Boehringer Ingelheim市售可得。除了PLGA和PLA之外，天然的纤维素类聚合物诸如淀粉、 淀粉衍生物、右旋糖酢和非-PLGA合成聚合物也正在被探索作为此类系统中的可生物降解 的聚合物。
[020引治疗用途
[0209]根据本发明的原理，本发明的肤可用于其中发生血液供应不足、足够的血管生长 和循环未适宜地被恢复W及由于血液流动不足而存在组织死亡的风险的适应症，或内皮功 能异常的病例。通常，运些状况是例如外周血管疾病;屯、肌缺血;组织移植疾病;冠状动脉疾 病；中风;和延迟的伤口愈合(例如在溃瘍性病变中）；肺病，包括急性肺损伤(ALI )、急性呼 吸窘迫综合征(ARDS)、和通气诱发的肺损伤(VILI);眼病，包括年龄相关的黄斑病变(AMD); W及与严重感染相关的病理状况，诸如例如脈毒症。
[0210] 本发明的肤还可用于治疗糖尿病和设及膜腺e细胞的损伤或需要运些细胞再生的 另外的疾病状态。已经显示膜岛脉管系统是膜腺e细胞的再生能力的关键决定因素。除了其 他W外，Brissova等(Diabetes 55:2974-2985,2006)证实了血管发生因子和其受体在成人 膜腺中差异表达，并且减少的由膜腺P细胞的VEGF-A表达导致异常的膜岛血管形成和糖尿 病前期的表型，导致减少的输出到血管系统中的膜岛素。血管发生因子如VEGF是膜岛血管 形成和功能的主要调节物，并且还是移植的膜岛的血管再形成所需的。因此，本发明的肤可 用于一般性地治疗糖尿病、或特别地用于膜岛移植。
[0211] 虽然已经为了阐述本发明而就本发明的多个特定的实施方案描述了本发明，但此 类具体地公开的实施方案不应该被认为是限制性的。基于
【申请人】在本文的公开内容，本领 域技术人员将想到许多其他的特定的实施方案，并且
【申请人】提出仅被如在所附的权利要求 书中所定义的其发明的精神和范围所限制。 实施例
[0212] W下的实施例表明了本发明的肤离体和在体内刺激血管发生的活性。
[0213] 实施例1:肤合成
[0214] 通过常规的固相合成方法利用巧OC或Fmoc化学法合成肤。
[0215] 实施例2:离体主动脉环测定
[0216] 从7至8周龄雄性SABRA小鼠解剖胸主动脉。将主动脉立即转移至恰有BIO-MPM-I的 皮氏（Petri)培养皿。在解剖显微镜下将主动脉周围的动脉外膜和小血管小屯、地移除，并且 制成0.75mm的横切片。将得到的主动脉环彻底冲洗并且在含有青霉素-链霉素的BIO-MPM-I 中培养过夜。随后，将环包埋在96孔板(Nunc ,Rochester, NY)中的SOiil胶原混合物（7份胶 原、1份IOX伊格尔氏最低必须培养基MEM、和2份0.15M碳酸氨钢）中。胶原溶液的凝固通过 将抑升高至中性并将溫度升高至37°C来实现。将15化1的含有青霉素-链霉素和测试的因子 或肤）的BIO-MPM-I添加到包埋的环，并将板在37°C在加湿的10%C02气氛中解育。在第4天 和第8天更新含有因子和/或肤的培养基。2周后，用4%甲醒固定环持续24小时，随后用溶解 在乙醇中的结晶紫(0.02%)染色并且彻底洗涂W移除过量染料。W4个孔(小鼠主动脉环的 4个环)/测定检查因子和肤的效应。使用数码相机(WkonJokyo Japan)获取代表性环的显 微照片。根据Nissanov等化ab Invest. 1995;73:734-739)使用Image-Pro 4.5软件（Media 切bernetics, Si Iver Spring ,MD)手动地进行出芽的形态分析。未染色的环经受石蜡切片 W及苏木精和伊红化&E)染色。
[0217] 表2归纳了在若干主动脉环测定中测试的若干化合物的结果。如也在图1A-1C和图 2A-2C中表明的，在该测定中肤AB-017(SEQ ID N0:12)、AB-033(SEQ ID N0:13WPAB-034 (SEQ ID NO:)引发大量的毛细管形成。图lA-lC展示了主动脉环毛细管长度并且图2A-2C展 示了主动脉环毛细管宽度。在表中：K-Flu是与巧光素部分偶联的赖氨酸残基，4化化e是4-漠-苯丙氨酸，Dod是十二烧酷基，Dec表示癸酷基，Oct是辛酷基，并且化X是己酷基。
[021 引
[0219] 实施例3:效力研究-小鼠后肢缺血/血管发生模型
[0220] 本研究的目标是确定施用测试物品肤AB-017(SEQ ID NO: 12)和725-106(阳性对 照，SEQ ID N0:2)是否能够增强后肢缺血模型中的血管发生、随后引起临床的和运动功能 的改善。该测试的原理基于施用该测试化合物后灌注率、临床迹象和组织学参数(坏死）的 改变。
[0221] 小鼠是用于研究的选择的物种，并且后肢缺血模型在历史上已在测试的化合物的 潜在促血管发生特性的评估和评价中被使用。小鼠后肢缺血模型是提供关于该策略的效力 的早期信息的初始步骤。
[0222] 各个测试组包括4-7只小鼠/组。在该模型中腹膜内（i.p)注射是施用测试物品的 优选途径，并且DMS0/PEG被用作媒介物W制备测试物品溶液。
[0223] 将测试的肤溶解在100 %DMSO中。其后，向溶液添加聚乙二醇(PEG)400。使用无菌 水W稀释至0.5%DMS0/10%阳G 400/出0的终浓度，W得到2mg/ml。制备溶液并且分成标记 的等分并储存在-70°C。
[0224] 物种/品系:小鼠 /Ba化/c雄性~8周
[0225] 来源:化rlan实验室，W色列
[02%]初始体重:在研究初始约25g。组的最小和最大重量在组平均重量的±20%的范围 内。
[0227] 根据美国国立卫生研究院(化tional Institute Of Health,NIH)和国际实验动 物护理评估和认可委员会（Association for Assessment and Accreditation of Laboratoiy Animal姑re,AAALAC)的指导进行动物处理。
[0228] 在标准实验室条件、空气调节并过滤的化EPA F6/6)、具有足够的新鲜空气供应 (31次空气交换/小时)条件下收容动物。在气候控制的环境中保持动物。溫度范围在20-24 °(：之间并且RH在30-70%之间，具有12小时光照和12小时黑暗的周期。在测量为35 X 30 X 15cm、具有便于颗粒食物和塑料瓶中的饮用水的不诱钢顶部格栅的聚乙締笼中收容动物(7 只/笼）；垫料:蒸汽灭菌的干净的稻壳。垫料至少一周两次连同笼一起更换。
[02巧]饮食：用市售的晒齿动物饮食（Teklad Certified Global 18%Protein Diet目 录号：106S8216)任意饲喂动物。动物可自由接近从市政供应获得的引用水。
[0Z30] 外科手术程序:
[0231] 麻醉:〇2/化0的混合物中的1.5-3%的异氣烧，在自然呼吸下。用带子捆住动物的所 有四肢，W便于动物用于外科手术。将动物的两条后腿剌毛并消毒。在所有动物中的进行手 术的腿(右腿)上，从腹股沟区到接近膝盖处做出切口。暴露出股静脉/动脉/神经。将动脉与 静脉、神经和周围的筋膜剖离开。在动脉与股深动脉的分叉点的远端，使用6-0丝缝合线将 动脉结扎两次，并且其后在运两点之间横切(参见prox-A-组模型附录I)。用6-0丝闭合手术 伤口，并且使小鼠返回至其笼。在所有动物中，左腿是未经处理的对照。
[0232] 排除标准：只有外科手术后平均流出测量值(mean flux measurement) < 10%且 <外科手术前的测量值的50%的小鼠被并入该研究。外科手术后平均流出测量值超过该范 围的小鼠被从该研究排除。
[023；3]计算:平均流出=(外科手术前(处理的)-0.5) / (外科手术前(对照)-0.5)
[0234] (外科手术后(处理的）-0.5)/(外科手丕后(对照）-0.5)
[0235] 药物施用:通过IP施用WlOml/kg的剂量体积向所有动物给药。
[0236] 表3.治疗方案：
[02371
[0淵]测试和评价:
[0239] 体重:在外科手术前、每次给药前、W及尸体解剖前测量体重。
[0240] 血液流动测量：使用Laser Doppler装置（Perimed 化riScan PIM II System,技 术手册随测试设备可得)在W下时间点测量当腿在其自然休息位置时的血液流动(进行手 术的腿&对照腿）：外科手术前(剌毛后)&外科手术后(第0天）；第1天;第8天;第15天;第22天 和第29天。每只小鼠的每个时间点由3次测量组成。
[0241] 另外，在外科手术前剌毛前在最初的10只动物中测量血液流动。
[0242] 缺血严重度的宏观评价:在手术后两周W及在研究结束时，通过利用坏死区域的5 点分级形态学量表对缺血肢体宏观评价;根据Tokai . J.等化邱.Cl in. Med .，31，3，128-132 页，2006),0级:无变化；1级：（限于)足尖坏死;2级：足部坏死(扩展到足背）；3级：膝盖坏死 (扩展到膝盖）；4级:全部坏死(整个后肢丧失）。
[0243] 肢体运动功能损伤的评价:在手术后两周和在研究结束时，利用W下4点量表进行 肢体运动功能的评价:〇级：弯曲足尖W抵抗尾己的溫和牵引；1级：巧屈；2级:无拖动但无巧 屈；3级：拖动足部（Rutherford等J. Vas州Iar Surge巧；1997，26，517-538)。最终肌肉重量& 组织固定:在研究的终止(第29天），将动物处死。将W下肌肉与腿剖离、称重并在福尔马林 中固定直到被发起人收回：腔前肌、脾肠肌和比目鱼肌。
[0244] 结果
[0245] ^汇编:数据W图的形式归纳，显示进行手术的腿的持续4周的灌注（图3,数值 结果作为平均值和标准误差给出），W及W表的形式归纳(表4)，显示每组的动物的数目、腿 功能的评分和在第15天腿的缺血状况的评分。只有在手术后其腿灌注减少巧0%的动物被 包括在该分析中。
[0246] 缺血评分
[0247] 4:扩展到股的坏死(整个后肢丧失）
[0248] 3:扩展到小腿的坏死(膝盖丧失）
[0249] 2:扩展到足背的坏死(足丧失）
[0250] 1:限于足尖的坏死(足尖丧失）
[0巧1] 0:坏死不存在
[0252] 功能评分
[0253] 3:拖动足部
[0254] 2:无拖动但无巧屈
[0巧5] 1:巧屈
[0256] 0:弯曲足尖W抵抗尾己的溫和牵引（Rutherford等，1997)。
[0257]图3和表4归纳了在体内后肢缺血模型中，与媒介物对照相比，用化合物AB-017 (SEQ ID NO: 12)和725-106(阳性对照，SEQ ID N0:2)处理的结果。如可W看到的，在灌注 (图3)、腿功能和腿坏死(表4)的所有参数方面，用AB-017处理与媒介物对照和较长的肤 725-106二者相比导致缺血腿的显著改进。
[0巧引表4.
[0 巧9]
[0260] 实施例4:体内效力-小鼠中的血管发生模型
[0261] 本研究的目的是在小鼠屯、肌梗死模型中测试肤的促血管发生活性，并确定在该模 型中施用肤是否能够诱导血管生长，并可证明是否由此改善缺血屯、脏的临床功能。测试的 原理基于在施用测试肤之后，灌注率、临床迹象和组织学参数的改变。研究的终点包括测量 ECG和测量屯、肌损伤。
[0262] 小鼠是用于研究的选择的物种，并且在历史上已在测试的化合物的潜在促血管发 生特性的评估和评价中被用于屯、肌梗死研究。小鼠屯、肌梗死缺血模型通常是提供关于该策 略的效力的早期信息的初始步骤。
[0263] 总共使用30只小鼠。每个测试组包括10只小鼠。在该模型中，腹膜内（i.p)注射是 施用测试的化合物的优选途径，并且DMS0/PEG被用作媒介物来制备测试物品溶液。
[0264] 材料和方法
[0265] 将测试肤溶解在100%DMS0中。其后，向溶液添加聚乙二醇(阳G)400。使用无菌水 W稀释至0.5 %DMSO/10 %阳G 400/H20的终浓度，W得到2mg/ml。制备溶液并分成标记的等 分，并储存在-7〇°C。 惦66]物种/品系：小鼠/Fl杂交CB6F1 (C57BL/6J X BALBc)
[0267] 性另Ij/数目/年龄:雄性/30( 3组)/8周 [0%引来源:化rlan实验室，W色列
[0269] 体重:在研究初始约25g。组的最小和最大重量将不超过组平均重量的±20%。
[0270] 适应时期:最少5天。
[0271 ] 标识:通过小鼠登记号、刻耳号和笼卡。
[0272] 动物处理根据美国国立卫生研究院(NIH)和国际实验动物护理评估和认可委员会 (AAALAC)。
[0273] 在测量为35 X 30 X 15cm、具有不诱钢顶部格栅、具有用于颗粒食物的设施和在玻 璃瓶中的饮用水的聚乙締笼中收容动物（4只/笼）；在标准实验室条件、空气调节并过滤 化EPA F6/6)、具有足够的新鲜空气供应(31次空气交换/小时)条件下收容动物。在气候控 制的环境中保持动物。溫度范围在20-24°C之间并且畑在30-70 %之间，具有12小时光照和 12小时黑暗周期。使用蒸汽灭菌的干净稻壳化arlan，Sani-cMp目录号：2018SC+F)，并且垫 料至少一周两次连同笼一起更换。动物被任意"自由饲喂"饲喂市售的晒齿动物饮食 (Teklad Certified Global 18%P;rotein Diet 目录号：106S8216)。动物可自由汲取饮用 水。食物和水供应中的合理预期的污染物应不具有影响该测试的结果的潜能。使用计算机 生成的随机化程序"ReSearch Randomi Zer"将动物随机化，并分成3个10只动物的组。 脚4] 实验设计和条件
[0275]用戊己比妥钢(70mg/kg)麻醉动物。切口的位置是左蔽窝。皮下注射0.1ml的0.1% 的利多卡因溶液。在距胸骨左缘2mm处朝向左蔽窝（其下l-2mm)做出8mm的斜切口。操作者尽 力使在皮肤下延伸的胸部浅静脉在切口的侧角可视化。两层胸肌均被切开，小屯、避开静脉； 透过薄且半透明的胸壁，可观察到肋骨和充气的肺。第4肋间隙代表那些肋骨之间观察到肺 的最低部分的区域。然后打开胸腔，小屯、不要损伤肺。插入胸牵开器并溫和打开W使伤口张 开8-lOmm的宽度。然后使被肺部分地覆盖的屯、脏可视化。将屯、包用曲直错溫和地夹起、撕 开、并放置在牵开器的臂后。该手法将肺轻微地向上推、使其移动并且提供较好的屯、脏暴 露。然后，使冠状动脉左前降支(LAD)作为搏动的鲜红穗状物(spike)可视化，在屯、脏壁的中 央从左屯、房的下方向尖端延伸。如果无法可视化LAD动脉，可抬高左屯、房，W使得源自主动 脉的LAD动脉的源头被定位。于在其正常位置的左屯、耳的尖部W下l-2mm处将LAD动脉结扎， 运引起左屯、室(LV)大约40-50%的缺血。在结扎的位点已被确定后，在略低于随后的结扎处 使用曲错溫和地压在动脉上（运增强动脉的观察并稳定屯、脏）。通过LV的前壁的颜色变化 (变苍白）确定闭塞。移出牵开器，并且通过关闭通气机外流使肺再充气。通过使用一条或两 条6-0尼龙缝合线将第4和第5肋骨拼合，来使胸腔闭合(对胸壁施加压力W减少自由空气的 体积）。分别用6-0可吸收缝合线和尼龙缝合线逐层闭合肌肉和皮肤。整个程序的持续时间 花费大约12-15分钟。 脚引药物施用:
[0277] 在诱发屯、肌梗死之后约45-120分钟，仅对恢复的动物、自主呼吸的动物通过IP施 用lOml/kg溶液中的20mg/kg的测试化合物进行第一次给药，并且其后每周两次。
[0278] 表5:组分配
[0279]
[0280] 测试和评价:
[0281 ]体重:在每一个给药日的给药前的研究当日测量体重。
[0282] ECG测量:在LAD动脉闭塞之后（之前和闭塞后立即），通过ECG ST段抬高确认屯、肌 梗死的诱发。其后，在屯、肌梗死之后每周一次通过BIOPAC系统进行ECG测量。
[0283] LDH测量:在24小时结束时，从每只小鼠收集血液(150iil )，并在室溫储存持续1至2 个小时。通过在2，00化pm离屯、持续10分钟来获得血清，并在-70°C储存。用标准Elisa试剂盒 测量LDH。
[0284] 终止:在手术后4周研究终止时，处死动物并进行肉眼病理检查。将屯、脏切离，并用 23-规格针插管通过升主动脉，用于随后的用2mL至3mL37°C0.9%氯化钢和用3mL至4mL 37 。(:憐酸盐缓冲液（pH 7.4)中的1.0 % TTC灌注。然后用2mL至3ml的10 %献青蓝（PhthalO Blue,Heubach Ltd)灌注屯、脏W勾绘非缺血屯、肌。将屯、脏称重，并用数码相机从两侧拍照。 使用Image J来对整个屯、脏的边界、非缺血区域和每个切片的两侧上的梗死区域进行数字 地求积。非缺血区域和缺血区域(有风险的区域）的尺寸被计算为按mm 2的尺寸或被计算为 总区域的百分比乘W屯、脏的总重量。
[0285] 实施例5:主动脉环的整装制片(whole-mount)免疫染色
[0286] 将在胶原中包埋并生长的环（如在"主动脉环测定"中描述的）在室溫用PBS中的 1 %多聚甲醒固定，持续30分钟，并在PBS中留置过夜。通过用含有1 % BSA和0.01 %化i ton-X 100的PBS在4 °C解育持续8小时来实现固定的环的封闭和透化。将环用含有1 % BSA的PBS中 的FITC缀合的抗a平滑肌肌动蛋白抗体(ab8211，1:200稀释的；Abeam,Cambridge,England) 解育，持续8小时。通过在接下来的8至10个小时期间用PBS的若干次洗涂，去除过量的未结 合的抗体之后，使用巧光显微镜(Axiove;rt200M;Zeiss)使样品可视化。
[0287] 实施例6:体内角膜囊袋测定
[0288] 角膜囊袋测定测试血管形成，所述血管形成从小鼠眼的边缘朝向插入到眼角膜的 包含测试材料的丸粒。
[0289] 如由Kenyon等（Invest 0曲thalmol Vis Sci . 1996;37:1625-1632)描述的检查血 管发生反应。简而言之，通过将硫糖侣（500mg/mL)溶解在20mM巧樣酸钢、ImM抓TA和9%薦 糖溶液中，并将的该溶液添加到5mg的测试肤、或者40iig的FGF、VEGF或CSF中来制备丸 粒。单个丸粒包含运些量的约1:450。在添加20化乙醇中的Hy化on聚合物（120mg/mL)之后， 将混合物应用到15 X 15-mm2的合成网格片（Sefar AmericaJansas City,MO)并且用 Hy化on包衣。允许丸粒空气干燥，并撕除网格的纤维。在经麻醉的巧7BL/6小鼠（8-10周龄） 的两只眼中产生角膜微囊袋。在局部施用利多卡因之后，使用Von-Graefe白内障刀做出切 口。在距血管化的边缘Imm至2mm距离处，将丸粒(0.2 X 0.2 X 0.3mm)浸溃到角膜微囊袋内。 在肤和蛋白组合的情况中，将2个丸粒插入同一切口。将多黏菌素-B-新霉素-杆菌肤 (Bamyxin)眼用软膏应用到眼W预防感染。8天后，利用体视镜术记录反应并进行拍照。每周 两次监测血管发展直到充满显微镜，并制作0.5mm的横切片。得到的主动脉血管发生消退 (regression)。在4只动物(4-6只眼）中检查在该测定中测试的每种肤和因子。
[0290]实施例6:协同作用
[0巧1] 在10咖浓度的肤48-033(569 10^:13)和48-034(569 10^:14)与促血管发生 蛋白VEGF-起的存在下，重复主动脉环测定。表6和图4中显示的结果表明用肤与VEGF-起 处理的协同作用。
[0巧2] 表6.
[0293]
[0294]
[02M]实施例7:另外的肤
[0296] 表7列出了为W上公开的肤的肤类似物的另外的肤。运些肤被合成并被测试对血 管发生的刺激。
[0297] 表7.
[029引
[0巧9] Myr是丑違酷基、化O是胆酱醇基、X是2-氨基-3-脈基丙酸、hArg是局精氨酸、Cit是 瓜氨酸、R是低级烷基、Zl是(S)-嚷挫烧-2-簇酸、Z2是(2S，3aS，7aS)八氨-IH-吗I噪-2-簇酸、 NMeA巧是N-甲基精氨酸、MfeNle是N-甲基正亮氨酸、4HyP是(4-径基)脯氨酸、3HyP是（3-径 基)脯氨酸、4^是(4-畑2)苯丙氨酸且35(11￥是(3,5-二舰)酪氨酸。
[0300] 实施例8:血管渗漏的抑制
[0301] W20mg/Kg或40mg/Kg的量将沈Q ID N0:12(Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-Tyr-NH2)的肤 或媒介物（10 % PEG-400、90 % DDW) i . P.注射至小鼠。5分钟、10分钟、1小时或4小时后，W 0.2ml/25g小鼠（40mg/Kg)i.p.注射双蒸水(DDW)中的5mg/ml伊文氏蓝化vans-Blue)溶液。 30分钟后终止实验，并打开烦骨W观察脑表面（"神经外科"），并且评价从血管渗漏的伊文 氏蓝的量。
[0302] 外周血管染色的原理:伊文氏蓝；其是具有960道尔顿的分子量的聚阴离子化合 物，其与白蛋白紧密结合并且被用于追踪血管渗透性。在血管渗漏的情况中，伊文氏蓝-白 蛋白复合物从血液流逃逸到周围的间质液，结果导致肢体着蓝色W及脑表面的浅蓝色外 观。
[0303] 在特定的实验中，在颜料注射前5分钟，i.p.注射40mg/kg的SEQ ID NO: 12的肤或 媒介物，每种注射至2只小鼠。然后W40mg/kg i.p.注射伊文氏蓝，并且30分钟后进行"神经 外科"，并监测从血液流逃逸出的颜料，如通过脑周围组织的浅蓝色外观显示的。结果清楚 地表明，虽然如通过脑的浅蓝色显示的，伊文氏蓝从对照(注射媒介物的）小鼠的血管渗漏， 但没有颜料从用肤SEQ ID NO: 12预处理的动物的血管渗漏。
[0304] 在另外的实验中，在颜料注射(伊文氏蓝，40mg/kg i . P.持续30分钟前10分钟，将 20mg/kg的沈Q ID NO: 12的肤或媒介物（10 %阳G-400、90 %DDW) i . P.注射到2只小鼠中。该 结果清楚地表明，虽然如通过脑的浅蓝色和爪的浅蓝色显示的，伊文氏蓝从对照(注射媒介 物的）小鼠的血管渗漏，但没有颜料从用肤SEQ ID N0:12预处理的动物的血管渗漏，在脑部 和外周均没有。
[0305] 在另一个实验中，在颜料注射(伊文氏蓝，40mg/kg i.p.持续30分钟）之前1或4小 时，将40mg/kg的SEQ ID NO: 12的肤i .P.注射到小鼠。对照小鼠在颜料注射之前1小时接受 媒介物（10 %PEG-4i . P. 00、90 %DDW)的i . P.注射。结果清楚地表明虽然如通过脑的浅蓝色 显示的，伊文氏蓝从对照(注射媒介物的）小鼠的血管渗漏，但没有颜料从在伊文氏蓝注射 之前1小时用肤SEQ ID NO: 12预处理的动物的血管渗漏，尽管在伊文氏蓝之前4小时注射肤 4给予仅部分的保护，即微弱的浅蓝色外观。
[0306] 实施例9:体内脈毒性休克模型
[0307] 利用盲肠结扎穿孔术(CLP)方法在野生型(WT化57MyJ、鼠中诱发严重脈毒症的多 种微生物的脈毒症小鼠模型（Belikoff等!"he Journal of Immunology,2011,186:2444-2453)。简言之，将小鼠麻醉，在腹部的右下象限做出1.5-cm的纵切口，并使盲肠暴露。用4-0 丝缝合线对盲肠的远端2/3结扎，并用18-规格针双倍地刺破。然后将盲肠放回腹膜腔，并用 外科手术钉闭合切口。之后，用皮下注射的无菌盐水使小鼠复苏，并允许苏醒后自由地接近 食物和水。
[030引该步骤后，然后用媒介物或用20111旨/蛇的6?5-725.017(沈010^:12)每日一次皮 下(S.C.)注射小鼠，持续5天。
[0309] 在图5中示出的结果表明肤SEQ ID NO: 12(在图中被标为GPS-725.017)在建立的 体内脈毒性休克模型中挽救小鼠免于死亡的能力。
[0310] W上特定实施方案的描述将如此充分地掲示本发明的一般性质，使得其他人可通 过应用现有的知识容易地改动和/或调整此类特定的实施方案用于多种应用，而无需过多 实验，且不背离一般概念，并且因此此类调整和改动应该并预期被包括在所公开的实施方 案的等价物的含义和范围内。应理解，本文中采用的措辞或术语是用于描述的目的而不是 用于限制的目的。用于进行多种公开的功能的方法、材料和步骤可采取多种替代形式而不 背离本发明。
【主权项】
1. 一种3-10个氨基酸的肽，所述肽包含核心序列RPY，其中R是精氨酸残基(Arg)或修饰 的精氨酸残基，P是脯氨酸残基(Pro)或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基(Tyr)或修饰的 酪氨酸残基，其中所述肽共有与具有序列M et-Arg-PrO-Tyr-ASp(SEQIDN0:4)的内皮分化 基因受体3(EDG3)的相应残基143-147的那些氨基酸相同的不超过3个氨基酸。2. 根据权利要求1所述的肽，所述肽由3-9个氨基酸残基组成。3. 根据权利要求1所述的肽，所述肽由4-8个氨基酸残基组成。4. 根据权利要求1所述的肽，其中至少一个残基是非天然编码的氨基酸残基。5. 根据权利要求4所述的肽，其中所述核心序列RPY的至少一个残基是非天然编码的氨 基酸残基或修饰的残基。6. 根据权利要求4所述的肽，其中所述非天然编码的氨基酸残基或修饰的残基选自由 以下组成的组:正亮氨酸(N1 e )、修饰的Arg、修饰的Pro和修饰的Tyr。7. 根据权利要求1所述的肽，所述肽能够促进血管的生长或改善内皮功能。8. 根据权利要求1所述的肽，所述肽能够刺激血管发生或减少功能异常的内皮的渗漏。9. 根据权利要求1所述的肽，所述肽还包含经由直接的键或经由接头与所述肽共价地 连接的渗透性增强部分。10. 根据权利要求9所述的肽，其中所述接头由1-5个氨基酸残基组成。11. 根据权利要求9所述的肽，其中所述渗透性增强部分被连接到所述肽的N末端。12. 根据权利要求9所述的肽，其中所述渗透性增强部分通过包含至少1个氨基酸残基 的接头被连接。13. 根据权利要求9所述的肽，其中所述接头是甘氨酸(Gly)残基。14. 根据权利要求9-13中任一项所述的肽，其中所述渗透性增强部分是脂肪酸残基。15. 根据权利要求1-14中任一项所述的肽，其中所述羧基末端被酰化、酰胺化、还原或 酯化。16. 根据权利要求1所述的肽，所述肽还包含三肽天冬氨酸-精氨酸-酪氨酸(Asp-Arg-Tyr)或其类似物。17. 根据权利要求1所述的肽，其中所述肽是环状的。18. 根据权利要求1所述的肽，其中所述序列RPY选自由以下组成的组： i. Arg-Pr〇-Tyr； ii. Arg-Pr〇-35dITyr； iii. hArg-Pr〇-Tyr； iv·hArg-Pro_35dITyr;和 v.hArg-4Hyp-Tyr 其中hArg是高精氨酸;35dITyr是3，5-二碘酪氨酸并且4Hyp是4-羟基脯氨酸。19. 一种肽缀合物，所述肽缀合物包含根据权利要求1所述的肽和能够增加渗透性的部 分，其中所述肽缀合物按照式I: i.Z-X-R-P-Y-B (式I) 其中Z表示经由直接的键或经由接头共价地连接的能够增加渗透性的部分，X表示除了 甲硫氨酸之外的天然的或合成的氨基酸残基，或X可不存在，R是精氨酸残基或修饰的R残 基，P是脯氨酸残基或修饰的脯氨酸残基，Y是酪氨酸残基或修饰的酪氨酸残基，并且B表示 末端羧酸基、酰胺基、酯基或醇基。20. 根据权利要求19所述的肽缀合物，其中X是正亮氨酸(Nor)残基。21. 根据权利要求19所述的肽缀合物，其中R选自由精氨酸残基、高精氨酸残基(hArg)、 N-甲基精氨酸残基(匪eArg)、瓜氨酸残基和2-氨基-3-胍基丙酸残基组成的组;P选自由脯 氨酸残基、羟基脯氨酸残基和噻唑烷-羧酸酯残基组成的组，且Y选自由酪氨酸残基、3,5二 碘酪氨酸残基(35dITyr)、3,5二溴酪氨酸残基(35dBTyr)和高酪氨酸残基组成的组。22. 根据权利要求19所述的肽缀合物，其中Z表示豆蔻酰-甘氨酸(Myr-Gly)，X是正亮氨 酸(Nle)残基，R是精氨酸残基或高精氨酸残基(hArg)，P是脯氨酸残基或4-羟基-脯氨酸残 基(4HyP)，Y是酪氨酸残基或(3,5-二碘)酪氨酸(35(111 7〇残基，并且8是末端，表示末端羧 酸基、酰胺基、酯基或醇基。23. 根据权利要求19所述的肽缀合物，所述肽缀合物包含至少一个非天然的渗透性增 强部分。24. 根据权利要求19所述的肽缀合物，所述肽缀合物包含选自由以下组成的组的肽： Gly-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:5)； Gly-Nle-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID N0:6)； Gly-Nle-Arg-Pr〇-35dITyr-NH2(SEQ ID N0:7)； Gly-Nle-hArg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID N0:8)； Gly-Nle-hArg-Pr〇-35dITyr-NH2(SEQIDN0:9)jP Gly-Nle-hArg-4HyP-Tyr(SEQ ID N0:10)。25. 根据权利要求19所述的肽缀合物，所述肽缀合物选自由以下组成的组： Myr-Gly-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:11)； Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:12)； Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-35dITyr-NH2(SEQ ID NO:13)； Myr-Gly-Nle-hArg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:14)； Myr-Gly-Nle-hArg-Pr〇-35dITyr-NH2(SEQIDN0:15)4P Myr-Gly-Nle-hArg-4HyP-Tyr(SEQ ID N0:16)。26. -种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的根据权利要求1至18中任一 项所述的肽和药学上可接受的载体。27. -种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的根据权利要求19-25中任一 项所述的肽缀合物和药学上可接受的载体。28. 根据权利要求27所述的药物组合物，其中所述肽缀合物选自由以下组成的组： Myr-Gly-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:11)； Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:12)； Myr-Gly-Nle-Arg-Pr〇-35dITyr-NH2(SEQ ID NO:13)； Myr-Gly-Nle-hArg-Pr〇-Tyr-NH2(SEQ ID NO:14)； Myr-Gly-Nle-hArg-Pr〇-35dITyr-NH2(SEQIDN0:15)jP Myr-Gly-Nle-hArg-4HyP-Tyr(SEQ ID N0:16)。29. 根据权利要求26至28中任一项所述的药物组合物，用于预防或治疗其中发生血液 供应不足或与内皮功能异常相关的状况或通过S1P受体介导的状况。30. 根据权利要求29所述的药物组合物，其中所述状况选自由以下组成的组:外周血管 疾病、心肌缺血、组织移植、冠状动脉疾病、中风、和延迟的伤口愈合、肺病、眼病、骨质流失 和与严重感染相关的病理状况。31. 根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述肺病选自由以下组成的组:急性肺损 伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和通气诱发的肺损伤(VILI)。32. 根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述眼病是年龄相关的黄斑病变(AMD)。33. 根据权利要求30所述的药物组合物，其中所述与严重感染相关的病理状况是脓毒 症。34. 根据权利要求29所述的药物组合物，其中所述状况的特征为胰腺细胞功能不足。35. 根据权利要求29所述的药物组合物，其中所述状况是糖尿病或胰岛移植。36. 根据权利要求26-28中任一项所述的药物组合物，其中所述载体适合于通过吸入施 用。37. 根据权利要求26-28中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物为调节释放的组 合物的形式。38. 根据权利要求36所述的调节释放的药物组合物，其中所述组合物为选自由以下组 成的组的形式:可生物降解的微球、非可生物降解的微球、植入物、可植入的棒、可植入的胶 囊、可植入的环、延长释放的凝胶或易受侵蚀的基质。39. 根据权利要求29所述的药物组合物，所述药物组合物用于与另一种刺激血管发生 的剂一起施用。40. 根据权利要求39所述的药物组合物，其中所述刺激血管发生的剂选自由以下组成 的组:血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和干细胞因子(SCF)。41. 根据权利要求1至18中任一项所述的促血管发生的肽用于制备用于预防或治疗其 中发生血液供应不足或与内皮功能异常相关的状况的药物中的用途。42. -种预防或治疗其中发生血液供应不足的状况、与内皮功能异常相关的状况、或通 过S1P受体介导的状况的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用根据权利要求26-28中 任一项所述的药物组合物。43. 根据权利要求42所述的方法，其中所述状况选自由以下组成的组：外周血管疾病、 心肌缺血、组织移植、冠状动脉疾病、中风、糖尿病、胰岛移植、和延迟的伤口愈合、肺病、目艮 病和与严重感染相关的病理状况。44. 根据权利要求43所述的方法，其中所述肺病选自由以下组成的组：急性肺损伤 (ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和通气诱发的肺损伤(VILI)。45. 根据权利要求43所述的方法，其中所述眼病是年龄相关的黄斑病变(AMD)。46. 根据权利要求43所述的方法，其中所述与严重感染相关的病理状况是脓毒症。47. 根据权利要求42所述的方法，其中所述状况的特征为胰腺细胞功能不足。48. 根据权利要求47所述的方法，其中所述状况是骨质疏松症。49. 一种支架，所述支架包含至少一种根据权利要求1-25中任一项所述的肽或肽缀合 物。50. -种预防或治疗心肌感染或冠状动脉疾病的方法，所述方法包括向需要其的受试 者施用根据权利要求49所述的支架。
【文档编号】A61P11/00GK105873944SQ201480069919
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2014年12月17日
【发明人】施姆尔·本－赛森, 哈达斯·路维尼
【申请人】耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司