专利名称：：一株特效氨化菌及其处理废水的方法一^K特效氨化菌及其处理废水的方法
技术领域：
：本发明涉及生物
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，尤其是关于一抹特效氨化菌及其处理废水的方法。背景纟支术水体中的氮主要以有机氮和无机氮两种形式存在。前者有蛋白质、多肽、氨基酸和尿素等，它们来源于工业废水(如屠宰加工、印染、制革等)、生活废水和农业废弃物(植物秸秆、牲畜粪便等)等。氮素污染不仅可引起水体富营养化，造成水生植物和藻类过度生长，使水质迅速恶化，而且会降低水体观赏价值，危害水生生物的生存。
发明内容本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种成本低、去除氨氮效率稳定、无二次污染的特效氨化菌及其处理废水的方法。。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一林特效氨化菌，该菌林为HJA07,氨化菌菌林，保藏号为CGMCCW2162，保藏日期为2007年09月13日。所述的氨化菌菌林从淤泥中分离得到，该氨化菌在25。C35。C,pH值为6.5-8.0，富集培养基中培养，分离培养基中分离。所述的氨化菌菌林从河底淤泥中分离得到，该氨化菌菌抹适宜在温度为28。C,pH值为7.27.4，富集培养基中培养，分离培养基中分离。所述的富集培养基成分为蛋白胨10g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾lg、氯化钠0.5g、硫酸亚铁O.Olg、微量元素液l.Oml,蒸馏水1000ml，用10%碳酸钠调pH值为7.2~7.4。所述的分离培养基成分为牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸二氢钾15mg、蒸馏水至1000ml、pH值为7.27.4。所述的氨化菌菌林从河底淤泥中分离得到，该氨化菌菌株适宜在温度为28。C，150r/min的摇床上振荡培养2天；在所述的富集培养基中培养；再在温度为28。C时，在所述的分离培养基中分离。所述的微量元素液为硼酸0.5g、钼酸钠0.5g溶于100ml蒸馏水中。所述的氨化菌菌抹属于微球菌属(Mirococcus)，是藤黄微球菌(Micrococcusluteus)，主要特征为菌落形态为圓形、黄色、光滑、低凸起、不透明、直径2.5mm;菌林个体呈球状，直径为0.9~1.8pm。所述的氨化菌菌林的生理生化特征表现为革兰氏染色阳性，罕见运动，不生芽孢，接触霉、氧化酶阳性，可在5。/。的NaCl中生长，DNA的G+Cmol。/。为64%75%，将有机氮转化为氨氮。一种利用所述的一抹特效氨化菌处理含有机氮污水的方法，包括如下步骤a)氨化菌菌林的培养；b)氨化菌菌林的分离；c)氨化菌菌抹与污水反应除有机氮；d)回收氨化菌菌林，循环使用。本发明的有益效果是，通过氨化菌处理废水，成本低、效率稳定、无二次污染，从而有效地处理了含有机氮废水，保护环境。图1是不同温度对HJA07菌株的影响曲线图；图2是不同pH对HJA07菌抹的影响曲线图；图3是HJA07菌林氨化作用能力测定结果柱状图；图4是HJA07菌河道污水氨化速率图曲线图。具体实施方式本发明一种特效氨化细菌，属于微球菌属(Mirococcus)，是藤黄微球菌(Micrococcusluteus)，命名为HJA07。已于2007年09月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCCWe2162。本发明一种特效氨化细菌，HJA07菌4朱取自深圳市布吉河底淤泥，经4次富集培养、3次分离纯化得到一抹氨化能力强的菌林。其菌落特征为菌落形态为圆形、黄色、光滑、低凸起、不透明、直径2.5mm;菌抹个体呈球状，直径为0.91.8nm。主要微生物学特征表现为革兰氏染色阳性，罕见运动，不生芽孢，接触霉、氧化酶阳性，可在5%的NaCl中生长，DNA的G+Cmol。/。为64%~75%。从图1、图2可看出HJA07氨化菌最适生长条件为pH6.58.0,温度2535。C。本发明一种特效氨化细菌，HJA07可在兼氧条件下进行氨化反应，能有效地将有机氮转化为氨氮，将在水污生物脱氮实践中发挥重要作用。本发明一种特效氨化细菌，生物脱氮中氮的去除包括氨化、硝化和反硝化等过程氨化作用是利用氨化细菌把有机氮转化为氨态氮的过程，硝化作用由亚硝酸盐细菌和硝酸盐细菌将氨化合物氧化为亚硝酸盐和硝酸盐；反硝化作用也称脱氮作用，由反硝化细菌在厌氧或微厌氧条件下将硝酸盐还原成氧化亚氮或氮气。氨化作用是生物脱氮环节中的起始环节，直接关系到后续的脱氮过程，因此，如何提高氨化细菌的作用能力以强化氨化作用是保证生物脱氮重要因素。氨化作用的核心是氨化细菌，是自然界氮素循环中重要的一类功能菌群，水体中氨化菌的数量和活性直接影响着水质状况。不同的氨化细菌其氨化作用的能力也有差异，其生长条件也不同，从自然环境中的篩选分离出高效的菌林应用于强化污水生物处理是提高污水处理效能的重要手段。河道、湖泊等水生态系统中存在着多样性的微生物菌群，对氮素的循环、迁移、转化及滞留，起着重要的作用。因此，对河道底淤泥中的氨化细菌进行筛选、分离和纯化有望得到高效的氨化菌株，对于提高污水生物脱氮效率有重要的意义。实施例l:氨化细菌HJA07的分离、纯化及生理生化特性的测定(1)采集样品现场采集深圳市布吉河底淤泥样品于500ml无菌的三角瓶，加蒸馏水后用玻璃抹振荡打碎。(2)菌抹富集、分离取样品溶液10ml至装有150ml富集培养基(已灭菌)的三角瓶中，于28°C、150r/min的摇床上振荡培养2天。富集培养基成分蛋白胨10g、MgSO40.5g、K2HP04lg、NaC10.5g、FeSO40.01g、微量元素液1.0ml(微量元素液硼酸0.5g,钼酸钠0.5g溶于100ml蒸馏水中)，蒸馏水1000ml,用10。/。碳酸钠调节pH值为7.2~7.4。培养基变混浊后，再转移5ml至新的富集培养基(150ml)中，同样条件下振荡培养23天，如此再重复3次，每次的转移量分别为3ml、lml、0.5ml。取lml的菌悬液稀释至10000倍后，取稀释菌液0.5ml平板涂布，于28。C培养23天，即有菌落出现。选择那些形态不一样的菌落按照微生物纯种分离的常规方法平板划线分离，重复3次以上分离得到多抹纯菌抹。分离培养基成分为牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaC15g、KH2P0415mg、蒸馏水至1000ml,pH^直为7.27.4。其菌落特征为呈淡黄色，固体培养基上的菌苔为圆形,菌落较小，呈乳突状,边缘清晰，呈淡黄色，光泽度较小,较干不粘稠,不透明。直径2.5mm,菌抹个体呈球状，直径为0.91.8jLim。(3)氨化细菌HJA07菌抹生理生化特性的测定对分离、纯化后的HJA07菌林，利用SMF(A)微量生化板进行相关生化分析。分析指标主要包和括碳水化合物产酸实验、水解实验、革兰氏染色实验、厌氧生长实验、接触酶实验、接触酶实验、氧化酶实验、酯酶(Tween80)实验、VP实验、利用柠檬酸盐实验、7.5。/。NaCl生长实验、甘露醇实验、水解明胶实验、MR试验、和硝酸盐还原实验(方法见《常见细菌系统鉴定手册》)，结果见表l。_表1.HJA07的生理生化特征_实验项目_^_实验项目_结果碳水化合物产酸革兰氏染色阳性葡萄糖-厌氧生长—甘露醇—接触酶+甘油+氧化酶+乳糖—水解七叶灵—水解+水解明胶+七叶灵—酯酶(Tween80)—明胶+VP试验—海藻糖+pH>7.0—乙酸盐—pH<6.0+甘露醇+MR试验+木糖+硝酸盐还原—甘露糖+利用柠檬酸盐—-蔗糖+pH5.7生长+丙酸盐—7.5。/。NaCl生长+山梨醇+37t生长+乳糖+半乳糖+麦芽糖+实施例2:HJA07菌林氨化能力的测定将纯化后的HJA07菌林，接入150ml富集培养液中，28°C、150r/min下振荡培养48h。取上述HJA07的菌悬液按2°/。的接种量接种到12个200ml新的富集培养基中，另设一瓶对照，避光、振荡、28。C培养，然后分别在6、12、18、24各取出三个样品，经5000r/min离心30min，取上清液用纳氏试剂比色法测定氨氮，并与未接菌的培养液的氨氮值对照，计算氨化速率。氨化速率^A『BN)/t;其中AN:接菌的富集培养液的氨氮(mg/L),BN:未接菌的富集培养液处理后的氨氮(mg/L)，培养时间(h)。测定不同时间的氨化作用能力。如图3,HJA07菌抹18h的氨化速率为18.79mg/(L七)，氨氮含量为398.3mg/L，在24小时有机氮基本转化为氨氮。实施例3:HJA07菌林处理河道污水试-险采集深圳市布吉河污水，经测定NH4-N含量19.7mg/L，取1000ml灭菌接种10ml的HJA07菌悬液(菌体浓度为108CFU/L)，设三个平行，另设一瓶作对照，于28。C、150r/min振荡培养。氨氮含量的变化和速率(如表2、图4)。表2HJA07菌抹处理河道污水试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属
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的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。权利要求1.一株特效氨化菌，其特征在于该菌株为HJA07，氨化菌菌株，保藏号为CGMCC№2162，保藏日期为2007年09月13日。2.根据权利要求1所述的一抹特效氨化菌，其特征在于所述的氨化菌菌抹从淤泥中分离得到，该氨化菌在25。C35。C,pH值为6.58.0，富集培养基中培养，分离培养基中分离。3.根据权利要求2所述的一抹特效氨化菌，其特征在于所述的氨化菌菌抹从河底淤泥中分离得到，该氨化菌菌抹适宜在温度为28°C,pH值为7.2~7.4,富集培养基中培养，分离培养基中分离。4.根据权利要求23中任意一项所述的一株特效氨化菌，其特征在于所述的富集培养基成分为蛋白胨10g、硫酸镁0.5g、磷酸氢二钾lg、氯化钠0.5g、硫酸亚铁O.Olg、微量元素液l.Oml，蒸馏水1000ml,用10%石灰酸钠调pH值为7.27.4。5.根据权利要求23中任意一项所述的一抹特效氨化菌，其特征在于所述的分离培养基成分为牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸二氲钾15mg、蒸馏水至1000ml、pH值为7.2~7.4。6.根据权利要求2~3中任意一项所述的一林特效氨化菌，其特征在于所述的氨化菌菌抹从河底淤泥中分离得到，该氨化菌菌林适宜在温度为28。C,150r/min的摇床上振荡培养2天；在所述的富集培养基中培养；再在温度为28。C时，在所述的分离培养基中分离。7.根据权利要求4所述的一抹特效氨化菌，其特征在于所述的微量元素液为硼酸0.5g、钼酸钠0.5g溶于100ml蒸馏水中。8.根据权利要求1所述的一株特效氨化菌，其特征在于所述的氨化菌菌抹属于属于微球菌属(Mirococcus),是藤黄孩i球菌(Micrococcusluteus),主要特征为菌落形态为圓形、黄色、光滑、低凸起、不透明、直径2.5mm;菌林个体呈球状，直径为0.91.8pm。9.根据权利要求8所述的一抹特效氨化菌，其特征在于所述的氨化菌菌抹的生理生化特征表现为革兰氏染色阳性，罕见运动，不生芽孢，接触霉、氧化酶阳性，可在5°/。的NaCl中生长，DNA的G+Cmol。/o为64%~75%,将有机氮转化为氨氮。10.—种利用权利要求1所述的一抹特效氨化菌处理含有机氮污水的方法，其特征在于包括如下步骤a)氨化菌菌株的培养；b)氨化菌菌株的分离；c)氨化菌菌抹与污水反应除有机氮;d)回收氨化菌菌抹，循环使用。全文摘要本发明公开了一株特效氨化菌，该菌株为HJA07，氨化菌菌株，保藏号为CGMCC№2162，保藏日期为2007年09月13日；所述的氨化菌菌株从淤泥中分离得到，该氨化菌在25℃～35℃，pH值为6.5～8.0，富集培养基中培养，分离培养基中分离。通过氨化菌处理废水，成本低、效率稳定、无二次污染，从而有效地处理了含有机氮废水，保护环境。文档编号C02F3/34GK101386821SQ200710076959公开日2009年3月18日申请日期2007年9月14日优先权日2007年9月14日发明者赵勇娇,金文标,韫闫,陈亚松申请人:哈尔滨工业大学深圳研究生院