[0077]6)将所述第二上清液于超滤离心管中，所述超滤离心管分子截留量为6kDa，用3000xg离心力离心30min，将所述第二上清液浓缩后冻干，得水和酸兼溶性有机基质。
[0078]实施例5
[0079]—种禽类蛋壳中有机基质的提取方法，该方法包括以下步骤:
[0080]1)采用质量浓度为8% EDTA浸泡所述蛋壳20min后，洗去所述蛋壳外表面的有机物质和内表面的壳膜，烘干后，将蛋壳粉碎成末。
[0081]2)配置体积浓度为15%的乙酸水溶液；往10g的蛋壳粉末中，加入60g (约60ml)的配置好的乙酸水溶液，于18°C搅拌脱矿10小时；重复脱矿三次，使矿物质充分溶解。所述脱矿处理的搅拌速度为800转/分钟。
[0082]3)在16°C下，以25000xg离心力离心20min，分离出第一上清液和第一沉淀物，将第一沉淀物用ddH20(重蒸水)洗涤，以20000xg离心力再次离心15min，将第一沉淀物冻干得酸不溶性有机基质。
[0083]4)用去离子水对所述第一上清液进行透析脱盐脱酸，所述透析袋分子截留量为12kDa，透析时间为4小时，所述第一上清液与所述去离子水的体积比为1:26 ;用去离子水重复透析脱盐脱酸三次后，用ddH20(重蒸水)透析脱盐脱酸15小时。
[0084]5)在16°C下，以3000xg离心力离心40min，将透析脱盐后的溶液离心分离出第二上清液和第二沉淀物，将第二沉淀物洗涤3次，以5000xg离心力离心15min后，将第二沉淀物冻干，获得水不溶性有机基质。
[0085]6)将所述第二上清液于超滤离心管中，超滤离心管分子截留量为6kDa，用2500xg离心力离心20min，将所述第二上清液浓缩后冻干，得水和酸兼溶性有机基质。
[0086]实施例6
[0087]—种禽类蛋壳中有机基质的提取方法，该方法包括以下步骤:
[0088]1)采用质量浓度为6% EDTA浸泡所述蛋壳25min后，洗去所述蛋壳外表面的有机物质和内表面的壳膜，烘干后，将蛋壳粉碎成末。
[0089]2)配置体积浓度为12%的乙酸水溶液；往10g的蛋壳粉末中，加入80g (约80ml)的配置好的乙酸水溶液，于0°c搅拌脱矿8小时；重复脱矿三次，使矿物质充分溶解。所述脱矿处理的搅拌速度为900转/分钟。
[0090]3)在5°C下，以25000xg离心力离心20min，分离出第一上清液和第一沉淀物，将第一沉淀物用ddH20(重蒸水)洗涤，以20000xg离心力再次离心15min，将第一沉淀物冻干得酸不溶性有机基质。
[0091]4)用去离子水对所述第一上清液进行透析脱盐脱酸，透析袋分子截留量为3kDa，透析时间为6小时，所述第一上清液与所述去离子水的体积比为1:22 ;用去离子水重复透析脱盐脱酸三次后，用ddH20(重蒸水)透析脱盐脱酸12小时。
[0092]5)在5°C下，以4500xg离心力离心30min，将透析脱盐后的溶液离心分离出第二上清液和第二沉淀物，将第二沉淀物洗涤3次，以6000xg离心力离心15min后，将第二沉淀物冻干，获得水不溶性有机基质。
[0093]6)将所述第二上清液于超滤离心管中，超滤离心管分子截留量为12kDa，用5000xg离心力离心40min，将所述第二上清液浓缩后冻干，得水和酸兼溶性有机基质。
[0094]本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变形属于本发明的权利要求或等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形。
【主权项】
1.一种禽类蛋壳中有机基质的提取方法，其特征在于，所述方法包括: 采用m)TA去除蛋壳外表面有机物质及内表面壳膜，并粉碎成末； 往粉碎后的蛋壳粉末中加入体积浓度2-23%的乙酸水溶液，对所述蛋壳进行脱矿处理； 在16°C以下，将脱矿处理后的溶液经离心分离出第一上清液和第一沉淀物，所述第一沉淀物即为酸不溶性有机基质。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述采用m)TA去除蛋壳外表面有机物质及内表面壳膜，并粉碎成末具体包括: 采用重量浓度为2-10% EDTA浸泡所述蛋壳10-40min后，洗去所述蛋壳外表面的有机物质和内表面的壳膜，晾干/烘干后，将蛋壳粉碎成末。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述往粉碎后的蛋壳粉末中加入体积浓度2-23%的乙酸水溶液，对所述蛋壳进行脱矿处理具体包括: 配置体积浓度为2-23%的乙酸水溶液； 往100重量份的蛋壳粉末中，加入500-1000重量份的配置好的乙酸水溶液，于20°C以下搅拌脱矿4-12小时；按照相同处理先后共3次加入配置好的乙酸水溶液，以使矿物质充分溶解。4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述脱矿处理的搅拌速度为500-1200 转 / 分钟。5.根据权利要求1-4任一项所述的提取方法，其特征在于，所述在16°C以下，将脱矿处理后的溶液经离心分离出第一上清液和第一沉淀物，具体包括: 在16°C以下，以20000-40000xg离心力离心10_30min，分离出第一上清液和第一沉淀物，将第一沉淀物用ddH20洗涤，以20000-40000xg离心力离心两次，将第一沉淀物冻干得酸不溶性有机基质。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述方法还包括: 将所述第一上清液用透析袋进行透析脱盐脱酸； 在16°C以下，将透析脱盐脱酸后的溶液进行离心分离出第二上清液和第二沉淀物，所述第二沉淀物即为水不溶性有机基质。7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述将所述第一上清液用透析袋进行透析脱盐脱酸，具体包括:用去离子水对所述第一上清液进行透析脱盐脱酸，所述透析袋分子截留量为2-15kDa，透析时间为4-12小时，所述第一上清液与所述去离子水的体积比为1: (20-30);用去离子水重复透析脱盐脱酸三次后，用ddH20透析脱盐脱酸4-20小时。8.根据权利要求6或7所述的提取方法，其特征在于，所述在16°C以下，将透析脱盐脱酸后的溶液进行离心分离出第二上清液和第二沉淀物，所述第二沉淀物即为水不溶性有机基质，具体包括: 在16°C以下，以2000-6000xg离心力离心10_60min，将透析脱盐脱酸后的溶液离心分离出第二上清液和第二沉淀物，将第二沉淀物洗涤1次以上，以2000-6000xg离心力离心10-60min后，将第二沉淀物冻干，获得水不溶性有机基质。9.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述方法还包括: 将第二上清液用超滤离心管进行浓缩，获得水和酸兼溶性有机基质。10.根据权利要求9所述的提取方法，其特征在于，所述将第二上清液用超滤离心管进行浓缩，获得水和酸兼溶性有机基质，具体包括:将所述第二上清液于超滤离心管中，所述超滤离心管分子截留量为2-15kDa，用2000-6000xg离心力离心5_60min，将所述第二上清液浓缩后冻干，得水和酸兼溶性有机基质。
【专利摘要】本发明提供一种禽类蛋壳中有机基质的提取方法，所述方法包括：采用EDTA去除蛋壳外表面有机物质及内表面壳膜，并粉碎成末；往粉碎后的蛋壳粉末中加入体积浓度2-23％的乙酸水溶液，对所述蛋壳进行脱矿处理；在16℃以下，将脱矿处理后的溶液经离心分离出第一上清液和第一沉淀物，第一沉淀物即为酸不溶性有机基质。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：采用低浓度的乙酸进行脱矿，低浓度乙酸的酸性较弱，有利于保护禽类蛋壳中的有机基质，使其不被破坏。同时，乙酸分阶段逐步加入，可以进一步保护有机基质不被破坏，还可以更有效地实现脱矿效果。且乙酸极易溶于水，有利于后续过程中乙酸的去除。
【IPC分类】B09B5/00, B09B3/00
【公开号】CN105396861
【申请号】CN201510710364
【发明人】刘长国
【申请人】浙江农林大学
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年10月28日