专利名称：替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料及其制备方法
技术领域：
本发明是涉及一种替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料及其制备方法，属于分析化学领域。
背景技术：
手性是人类赖以生存的自然界的本质属性之一，生物大分子如蛋白质、多糖、核酸等全具有手性。具有光学活性的手性物质广泛存在于动植物体内，这种生物立体选择性和旋光物质的立体合成，是生物系统特有的本能。互为对映异构体的两个手性化合物，在生物活性、药理动力学、药物潜在的毒副作用等方面往往有较大的差别，目前市场上出售的西药有半数左右含手性中心，这其中又有大约一半是以外消旋体的形式出售，为此美国、欧共体及日本、加拿大等国卫生管理部门对新的外消旋药提出了极为严格的要求，要求对其对映体的代谢和药动力学有明确的说明，规定今后凡是发展具有不对称中心的药物，必须给出手性拆分结果。
用液相色谱解决立体化学问题，分离光学异构体，由于具有快速、简单、高效的优点而受到广泛重视。具有不对称手性中心或手性识别能力的手性固定相(CSP)的研制，是手性色谱发展的前沿领域，也是手性色谱发展的关键和核心。CSP的研制始于七十年代后期，发展异常迅速。大量各种类型的CSP(如Pirkle型CSP，蛋白质型CSP，环糊精型CSP，纤维素和多糖型CSP，手性冠醚及电荷转移型CSP等)相继研制成功，部分类型的CSP已作为商品出售。
自1994年Armstrong等首次将糖肽类抗生素作为手性选择剂应用于高效液相色谱手性固定相以来，由于这类抗生素的对映体选择性高，具有较广泛的手性识别能力，被称之为新一代的手性选择剂，成为目前最具发展潜力的一类新型手性固定相。
替考拉宁是由Actinoplanes teichomyceticus菌产生的大环糖肽类抗生素，它被用来治疗由格兰氏阳性菌引起的严重感染。现在已经证实，替考拉宁中的五个主要的成分，他们彼此的区别就在于N-葡萄糖胺上连着的烷基链的长度不同[Ilaria D’Acquarica，Francesco Gasparrini，Domenico Misiti，Claudio Villani，Angelo Carotti，Saverio Cellamare，Sandra Muck.Direct chromatographicresolution of carnitine and O-acylcarnitine enantiomers on a teicoplanin-bondedchiral stationary phase.Journal of Chromatography A，857(1999)145-155]。替考拉宁手性固定相的对氯苯基异氰酸酯衍生物作为手性选择剂用于色谱分离，目前国内外尚无报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料及其制备方法。
它是将糖肽类大环抗生素化学键合到硅胶载体上，再与对氯苯基异氰酸酯进行衍生化反应制成的手性色谱固定相填料。
所述糖肽类大环抗生素为替考拉宁、以及替考拉宁的对氯苯基异氰酸酯衍生物。硅胶为色谱用球形硅胶或色谱用无定形硅胶。
化学键合所用的间隔臂是指3-氨丙基三乙氧基硅烷，1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯化学键合用的硅烷化试剂，方法的步骤如下1、载体硅胶的硅烷化硅胶载体用3～5mol L-1盐酸回流4～6小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8～10小时，冷却至室温过滤，依次用甲苯、甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2、键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯，在冰浴及氮气保护下滴加2～4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯，混合物加热至65-75℃反应2～3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯，加入100ml含1g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下65～75℃搅拌反应10～12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与对氯苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中110～120℃反应2～3小时，过滤后，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
所述糖肽类大环抗生素为替考拉宁、以及替考拉宁的对氯苯基异氰酸酯衍生物。硅胶为色谱用球形硅胶或色谱用无定形硅胶。
本发明通过化学键合的方法制备的替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相，在反相体系中分离了谷氨酸，在极性流动相中分离了沙丁胺醇等药物。
该手性固定相制备方法简单，并可在正相、反相和极性有机相等色谱模式下使用，而色谱柱的手性识别能力不受影响。在反相体系中分离了谷氨酸，在极性流动相中分离了沙丁胺醇，能满足日常药物分析和生产质量控制的需要。
图1是谷氨酸(Glutamic acid)在替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相上的拆分色谱图；流动相乙醇/水＝60/40(v/v)；流速为0.5ml/min；柱温25℃；检测波长207nm。
图2是沙丁胺醇(Salbutamol)β-受体阻滞剂在替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相上的拆分色谱图；流动相甲醇/冰醋酸/三乙胺＝100/0.1/0.1(v/v/v)；流速为1.0ml/min；柱温25℃；检测波长225nm。
具体实施例方式
替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料，可对多种结构类型的手性药物或者氨基酸进行分离。同时，所制得的固定相具有很好的稳定性能，适合用作高效液相色谱填料。
替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料是将糖肽类大环抗生素-替考拉宁化学键合到硅胶载体上，再与对氯苯基异氰酸酯进行衍生化反应制成。
下面通过实例对本发明进行具体阐述，但并不局限于此。
本发明以糖肽类大环抗生素-替考拉宁为原料，通过间隔臂化学键合至用3-(氨丙基)-三乙氧基硅烷进行硅烷化的硅胶载体上，再与苯异氰酸酯进行衍生化反应制成。
1、载体硅胶的硅烷化硅胶载体用3～5mol L-1盐酸回流4～6小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8～10小时，冷却至室温过滤，依次用甲苯、甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2、键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯，在冰浴及氮气保护下滴加2～4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯，混合物加热至65-75℃反应2～3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯，加入100ml含1g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下65～75℃搅拌反应10～12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与对氯苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中110～120℃反应2～3小时，过滤后，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
3、谷氨酸对映体在反相体系中的分离流动相组成为乙醇/水＝60/40(v/v)，手性分离因子α＝1.69，分离度Rs＝1.59，色谱图见图1。
4、沙丁胺醇对映体在极性有机相中的分离流动相组成为甲醇/冰醋酸/三乙胺(100/0.1/0.1，v/v/v)，手性分离因子α＝1.24，分离度Rs＝1.87，此条件下的分离色谱图见图2。
实施例11)载体硅胶的硅烷化称取10克Kromasil球形硅胶载体(粒径5μm，孔径10nm)用3mol L-1盐酸回流4小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入10ml的3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8小时，冷却至室温过滤，用甲苯和甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2)键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯中，在冰浴及氮气保护下滴加2ml的1，6-二异氰酸酯正己烷，混合物加热至65℃反应2小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷，加入100ml含1g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下65℃搅拌反应10小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中110℃反应2小时，过滤后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
实施例21)载体硅胶的硅烷化称取10克Lichrosorb无定形硅胶载体(粒径5μm，孔径10nm)用5mol L-1盐酸回流6小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应10小时，冷却至室温过滤，用甲苯和甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2)键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯中，在冰浴及氮气保护下滴加3ml的1，6-二异氰酸酯正己烷，混合物加热至70℃反应3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下70℃搅拌反应10小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中110℃反应3小时，过滤后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
实施例31)载体硅胶的硅烷化称取10克Lichrospher球形硅胶载体(粒径5μm，孔径10nm)用5mol L-1盐酸回流4小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8小时，冷却至室温过滤，用甲苯和甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2)键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯中，在冰浴及氮气保护下滴加4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷，混合物加热至75℃反应3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下75℃搅拌反应12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中120℃反应3小时，过滤后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
实施例41)载体硅胶的硅烷化称取10克Kromasil球形硅胶载体(粒径5μm，孔径20nm)用5mol L-1盐酸回流4小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8小时，冷却至室温过滤，用甲苯和甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2)键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯中，在冰浴及氮气保护下滴加4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷，混合物加热至75℃反应3小时，冷却至室温后除溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下 75℃搅拌反应12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中120℃反应3小时，过滤后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
实施例5键合手性固定相的合成称取3克干燥的Kromasil-NH2球形硅胶载体(粒径5μm，孔径10nm)，加入无水甲苯中，在冰浴及氮气保护下滴加4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷，混合物加热至75℃反应3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下75℃搅拌反应12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中120℃反应3小时，过滤后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
实施例61)载体硅胶的硅烷化称取10克兰化所球形硅胶载体(粒径5μm，孔径9nm)用5mol L-1盐酸回流4小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8小时，冷却至室温过滤，用甲苯和甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2)键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯中，在冰浴及氮气保护下滴加4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷，混合物加热至75℃反应3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷，加入100ml含2g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下75℃搅拌反应12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中120℃反应3小时，过滤后，用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
权利要求
1.一种替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料，其特征在于它是将糖肽类大环抗生素化学键合到硅胶载体上，再与对氯苯基异氰酸酯进行衍生化反应制成的手性色谱固定相填料。
2.根据权利要求1所述替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料，其特征在于所述糖肽类大环抗生素为替考拉宁、以及替考拉宁的对氯苯基异氰酸酯衍生物。
3.根据权利要求1所述的替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料，其特征在于所述硅胶为色谱用球形硅胶或色谱用无定形硅胶。
4.一种替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料的制备方法，其特征在于所述化学键合所用的间隔臂是指3-氨丙基三乙氧基硅烷，1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯化学键合用的硅烷化试剂，方法的步骤如下1)载体硅胶的硅烷化硅胶载体用3～5mol L-1盐酸回流4～6小时后水洗至中性，真空干燥，以无水甲苯做溶剂，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，回流反应8～10小时，冷却至室温过滤，依次用甲苯、甲醇洗涤，真空干燥得3-氨丙基硅胶；2)键合手性固定相的合成取3克上述干燥的3-氨丙基硅胶，加入无水甲苯，在冰浴及氮气保护下滴加2～4ml的1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯，混合物加热至65-75℃反应2～3小时，冷却至室温后除去溶剂及1，6-二异氰酸酯正己烷或1，3-二异氰酸酯苯，加入100ml含1g替考拉宁无水吡啶溶液，氮气保护下65～75℃搅拌反应10～12小时，过滤，用吡啶、水、甲醇、乙腈、二氯甲烷洗涤，减压干燥后与对氯苯基异氰酸酯在无水吡啶溶液中110～120℃反应2～3小时，过滤后，依次用吡啶、水、甲醇、丙酮、二氯甲烷洗涤干燥，得替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料。
5.根据权利要求4所述替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料的制备方法，其特征在于所述糖肽类大环抗生素为替考拉宁、以及替考拉宁的对氯苯基异氰酸酯衍生物。
6.根据权利要求4所述替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料的制备方法，其特征在于所述硅胶为色谱用球形硅胶或色谱用无定形硅胶。
全文摘要
本发明公开了一种替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性固定相填料及其制备方法。采用硅胶为载体，载体与3－氨丙基三乙氧基硅烷进行硅烷化反应；硅烷化后的载体与间隔臂进行活化，活化后的硅胶载体与糖肽类大环抗生素替考拉宁键合，再与对氯苯基异氰酸酯进行衍生化反应完成。用这种方法合成的替考拉宁对氯苯基异氰酸酯手性色谱固定相填料装柱后，具有很强的手性识别能力和限好的稳定性能，可以在正相、反相及极性有机相色谱条件下使用，对多种不同类型的手性药物实现手性分离。本发明在反相流动相中分离了谷氨酸，用极性流动相分离了沙丁胺醇等对映体。
文档编号B01J20/29GK1994557SQ20061015501
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月4日 优先权日2006年12月4日
发明者沈报春, 徐秀珠 申请人:浙江大学