专利名称：确定流体凝结时间的微流体装置和方法
技术领域：
本发明涉及用于测定流体介质凝结时间、特别是用于测定血液凝结时间的芯片实验室型(lab-on-a-chip)装置和方法。它还涉及与本发明的芯片实验室联合使用的测量装置，例如凝度计。
背景技术：
健康个体中，血液粘度和稠度由称为止血的过程所调节。这种机制阻止从血管系统失血。血液凝固由终止体内发生的任何出血的复杂过程所调节。稳定的凝块通过凝血蛋白因子、血管和血小板的相互作用形成。该过程在愈合后继续，这时血液凝块被溶解。在凝块形成的第一阶段，血小板聚集，同时激活了称为血液级联的现象。这个过程中，可溶性血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性血纤维蛋白网或血凝块。这种转化由凝血酶催化，该酶通常以其非活性形式即凝血酶原存在于血液中。血液病症起因于止血失衡。这些可以是遗传来源的，例如血友病或VonWillebrand病；由其它状况如抗磷脂抗体综合征、肠易激综合征或癌症所触发；或通过外源因素获得:患者口服抗凝剂治疗或预防血栓形成病症、心脏或血管疾病。诸如华法林的口服抗凝疗法被广泛使用，并且由于其窄治疗指数而需要频繁监测。应定期调整剂量，以避免血栓形成或出血风险。对于这些以及具有诸如不活动、肥胖、干预(mediation)、或经历手术或牙科治疗的已知诱因状态的其他患者而言，使他们能在家中定期地监测血凝的可靠检测的可用性代表了对目前可利用的临床凝血检测的方便、快捷和廉价的替代手段。这类检测也可以用作止血病症诊断中的初步辅助手段。世界上最常用的凝结分析为所谓的国际标准化比率(INR)。该比率通过凝血酶原时间(PT)计算，凝血酶原时间为从凝血剂激活化到凝血开始所经过的时间。激活剂为组织因子或促凝血酶原激酶，这种机制称为“外源性”途径。由于组织因子(其为生物学上获得的产品)不同批次和制造商的差异，因而想出用INR使结果标准化。INR为以国际敏感度指数(ISI)值(针对所用的对照样品)为幂的患者凝血酶原时间与至少20健康正常人的平均凝血酶原时间(MNPT)的比率。每一制造商都给出用于任何商品化的组织因子的ISI，表明与国际标准化样品相比的具体批次组织因子情况。还有另一种但较不经常使用的分析类型，其由经由“内源性”途径的类似凝血机制构成，称为活化部分凝血酶原时间(APTT)。这两种分析在本申请中都看作是凝结时间。在欧洲，这些分析传统上在实验室内进行，其中通常在确定PT之前需要制备血液样品。最近几年，出现了护士或医师直接使用或患者自主使用Point-Qf-Care(POC)装置或也称为Nearly-Patient-Testing(NPT)的装置的趋势，并在很大程度上替代了传统方法。最初开发的且在本领域中已知的方法需要通过静脉穿刺提取大体积或精确体积的血液，随后在进行检测之前处理血液以及需要专业人员实施该方法并分析结果。相反，也称为便携凝度计的Point-of-care凝度计需要通过手指穿刺获取全血血滴，并快速提供INR结果。专利申请W092/21028描述了基于铁磁性的检测方法。该装置包括凝结室和对照室，每一个都配备了搅拌叶片，它们在振动磁场中旋转。随着凝血开始并对叶片移动施加阻力，凝血室中叶片的旋转变慢。凝血时间测定为小室中搅拌叶片的相对移动有变化的时间。其它装置，例如美国专利US5，110, 727中的那些，包含在其中分散了金属颗粒的血液样品。当施加振荡磁场时，诱导颗粒前后运动，其随着血液凝结而减慢。速度的降低与血液样品粘度的增加或凝结开始相关。专利申请W000/06761和W002/48707A2都描述了配备有与静止血液样品接触的电极的装置，并分别测量血液粘度增加时的电导率和电流变化。W02004/059316A1描述了用于确定血液凝结时间的低成本、一次性装置。该装置配备了至少部分地与流体接触的微传感器并测量血液凝结和流动停止时通道中血液的阻抗和电容。但是，与这些装置相关的高生产成本限制了它们作为一次性部件的应用。因此，仍亟需用于POC和/或NPT凝结时间确定的精确、低成本的一次性芯片和检测方法。由于材料科学以及电子和光学方法的进步，已有更小体积检测方面的进展，仅需要更少的和不可测量的全血样品(微升级别)。专利申请W02007/025559A1公开了用于确定血浆或全血样品中凝结的多层装置，其包括一个或多个检测区域，它们都具有至少一种凝结刺激试剂。专利申请US2007/0122849A1公开了微流体芯片中用于定量分析和检测分析物的
样品测定结构。EP0394070B1描述了单毛细管通道的微流体装置，其优化了对体积为40 y L且停留时间为200s的全血样品中的APTT的确定。该装置将用于活化部分凝血活酶时间测量的活化剂的混合物和磷脂混合物用作试剂。通过毛细管道采用的该检测方法为视觉的或光学的，例如LED，并在血流沿该装置停止时确定APTT。US6, 900，021描述了微流体装置，其在体外进行该反应和各种化合物对细胞的影响的研究。采用泵、压力差或电场来控制流体流动，而不是通过微流体通道中的毛细管作用。有两个相交叉并与主流路汇合的输入流路，以使得反应能发生。因此，主流路不包括含试剂的区域。另外，试剂不存在于芯片中，而是在不同点和时间加入，这使得芯片能用于具有不同试剂的不同反应测定。尽管有这些进展,但是当前使用的point of care凝度计仍具有重大缺陷:-尽管所使用的芯片或测试条的大多数为一次性的，但是它们包括几种组件，例如收集血液样品的器件、测量电导率变化的器件或测量粘度变化的器件。诸如电化学触体或检测条中振荡颗粒的有源组件的存在使得一次性芯片的生产复杂且昂贵。另外，不能在不损害检测条质量情况下减小尺寸。-尽管在检测所需的血液样品的量方面有所进展，但是最佳情况下体积仍在IOiil的范围，这对于患者仍是不方便的。相比而言这不够理想，例如与用于诸如葡萄糖测量的其它检测的量相比，葡萄糖测量可用Iyl或更少的血液样品来精确地完成。-与已知检测条或芯片一起使用的检测和测量仪器仍相当复杂。在一些情况下，它们需要其它的器件来传送或移动血液样品，例如磁场或泵。另一些情况下，该装置需要几个检测器件:需要校准芯片的测量样品中的某些性能变化的电化学或磁性器件，以及其它的检测器件来阅读其它的板上(on-board)质量控制系统。这增加了复杂性并由此增加了便携装置的成本。鉴于这些缺陷，本发明的目的是提供用于确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的微流体装置和方法，其仅涉及最少的步骤，成本低，并由此可由患者自主使用。本发明的另一目的是提供与该微流体装置一起使用的测量装置如凝度计，以便检测和监测样品的凝结时间以及存在于微流体装置中的质量控制，其易于制造、紧凑且可由患者自主使用。发明概述主题1.用于确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的微流体装置，所述装置包含:-用于引入所述流体介质样品的器件⑴；其连接到分配毛细管通道⑵；以及-与用于引入样品的所述器件(I)连接的第一区域(6a)，其用于允许所述流体介质沿所述第一区域的长度流动；-在所述第一区域开始处的第一部位(5a)，其包含能够与所述流体介质反应的试剂；所述装置的特征在于所述装置还包含:-也与用于引入样品的所述器件(I)连接的第二区域(6b)，其用于允许所述流体介质沿所述第二区域的长度流动；-其中所述第二区域(6b)不包含能够与所述流体介质反应的试剂，或-其中在所述第二区域^b)的开始处存在第二部位(5b)，所述第二部位(5b)包含能够与所述流体介质反应的试剂，所述试剂不同于所述第一部位(5a)的试剂；-以及其中以从分配通道⑵开始的顺序，所述区域(6a)和区域(6b)的每个首先包含部位(5a)和部位(5b)，以及作为扫描部位(8)的至少一个微流体通道。主题2.如主题I所述的微流体装置，其特征在于所述区域(6a、6b)的每个由至少一个微流体通道组成。主题3.如主题2所述的微流体装置，其特征在于所述微流体通道^a，6b)为毛细管通道，其中所述通道的表面为亲水性的，并且毛细管作为移动所述流体介质的唯一作用力而起作用。主题4.如主题I至3中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述区域的每个包含用于排出的器件(7)。
主题5.如主题4所述的微流体装置，所述用于排出的器件由用作停止流动阀的排出口 (7)构成。主题6.如主题I至5中任一项所述的装置，其特征在于所述第一区域的所述第一部位由含有能够引发所述流体介质凝结的试剂的反应单元(5a)构成。主题7.如主题I至6中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述第二区域的所述第二部位由含有能够抑制所述流体介质凝结的试剂的反应单元(5b)构成。主题8.如主题I至7中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述装置还包含也与用于引入样品的所述器件(1)连接的第三区域，其用于允许所述流体介质沿所述第三区域的长度流动，其中在所述第三区域的开始处存在含有能够与所述流体介质反应的试剂的第三部位，所述试剂不同于所述第一(5a)或第二(5b)部位的试剂。主题9.如主题I至8中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述用于引入样品的器件由入口(I)组成，所述入口(I)通过后接通道分叉(3)的分配通道(2)与所述第一和第二区域^a，6b)以及，如果第三区域存在的话，与第三区域连接，所述通道分叉将(4)分入所述第一、第二和任选的第三区域。主题10.如主题I至9中任一项 所述的微流体装置，其特征在于所述第一、第二和任选的第三区域(6a，6b)为弯曲形状。主题11.如主题I至10中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述第一、第二和任选的第三区域^a，6b)由具有蛇形轨迹的通道组成。主题12.如主题I至11中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述通道具有矩形横截面。主题13.如主题I至12中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述通道由不同横截面的节段的组合组成。主题14.如主题I至13中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述部位(5a)中的所述试剂为促凝血酶原激酶，且所述凝结时间表示凝血酶原时间。主题15.如主题I至14中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述第一区域用作凝结通道(6a)，且所述第二区域用作对照通道(6b)，并且所述两个区域的每个具有相同结构。主题16.如主题I至14中任一项所述的微流体装置，其特征在于所述第一区域用作凝结通道(6a)，且所述第二和第三区域用作对照通道，以及在于所述三个区域的每个具有相同结构。主题17.如主题I至16中任一项所述的微流体装置，还包含用于质量控制的光学特征。主题18.凝度计装置，包括-用于引入主题I至17所述的微流体装置的槽；-用于连续检测和/或监测所述区域的每个中所述流体介质的前缘位置和/或其速度的光学器件；以及-用于处理由所述检测和/或监测器件传输的数据以及用于确定所述流体介质的凝结时间的器件，其中所述光学器件还测量或读取所述微流体装置上的质量控制特征。主题19.如主题18所述的凝度计装置，其特征在于所述处理器件包括用于比较所述两个或三个区域的每个中的一种或多种所述性能的器件。主题20.如主题18至19中任一项所述的凝度计装置，其特征在于所述处理器件包括用于检测第一通道^a)中一种或多种所述性能与第二通道^b)和/或第三通道中的一种或多种所述性能之间的差异达到预定阈值的时间点的器件。主题21.如主题18至20中任一项所述的凝度计装置，其特征在于所述检测和/或监测器件包括用于照明所述区域的每个的器件和用于分析由所述区域的每个透射或反射的光的器件。
主题22.如主题21所述的凝度计装置，其特征在于所述照明器件至少包括LED且所述分析器件至少包括光学传感器。主题23.如主题22所述的凝度计装置，其特征在于所述分析器件至少包括透镜。主题24.确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的方法，包括以下步骤:-将所述流体介质的样品引入主题1-17所述的具有第一和第二区域(6a、6b)的微流体装置，在所述区域中，允许所述样品沿长度流动；-在所述第一区域^a)的开始处在部位(5a)中提供能够与所述流体介质反应的第一试剂(5a);以及-在所述第二区域^b)中在部位(5b)中不提供试剂或提供不同于所述第一区域(6a)中所述第一试剂(5a)的第二试剂(5b),-用光学器件连续监测所述流体介质在所述第一区域^a)和所述第二区域(6b)中的至少一种性能，-将所述流体介质在所述第一区域^a)内的至少一种性能与所述流体介质在所述第二区域^b)的至少一种相同性能或针对这种性能的理论值进行比较。主题25.如主题24所述的确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的方法，其特征在于对所述流体介质在所述第一区域中的至少一种所述性能的比较是针对所述流体介质在所述第二区域^b)中的至少一种性能进行的。主题26.如主 题24所述的确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的方法，其特征在于对所述流体介质在所述第一区域中的至少一种所述性能的比较是针对所述性能的理论值进行的。主题27.如主题24或25所述的确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的方法，其特征在于所述方法包括质量控制步骤，所述质量控制步骤包括使所述监测的性能与理论曲线相关联。主题28.制造如主题I至17中任一项所述的用于确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的微流体装置的方法，包括以下步骤:-提供第一基板；-在所述第一基板中形成对应于主题I至17中任一项所述的微流体装置的显微结构；提供第二基板；以及将所述第二基板密封在所述形成显微结构的第一基板的顶部，以使所述第二基板用作覆盖件。主题29.如主题28所述的方法，其中所述第二基板为亲水性膜。在第一方面，根据主题1，本发明提供了用于确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的低成本微流体装置。在第二方面，根据主题18，本发明提供了凝度计装置，其包括用于引入微流体装置的槽，检测和/或监测流体介质的至少一种性能的器件以及用于处理所述检测和/或监测装置传送的数据以确定所述流体的凝结时间的器件。在第三方面，根据主题24，本发明提供了用于确定流体介质中凝结时间的方法。在其它方面，根据主题28，本发明提供了制造用于确定流体介质中凝结时间的微流体装置的方法。在其他主题中定义了本发明的有利实施方案。这样，本发明提供了用于确定流体的凝结时间的低生产成本和易于使用的改进微流体无源装置(passive device)，其因此可为一次性的。另外，本发明的微流体装置(检测条)、测量装置(凝度计)和方法提供了以最少血液样品确定凝血酶原时间的精确手段，并因此可由患者容易和自主地使用，而无需静脉穿刺。本发明的这些和其它方面因下文描述的实施方案而显而易见且参照这些实施方案进行阐释。附图简述通过参照以下的附图，结合所附说明书，可更好地理解本发明，并且其多个目的和优点将对本领域技术人员而言更显而易见，其中:
图1显示本发明装置的实施方案的分解立体图，显示了分开的两层。图2显示图1实施方案的装置的俯视图(图的左边部分)和侧视图(图的右边部分)。图2A显示该微流体装置的另一实施方案的俯视图。图3显示凝结和对照通道中流动前缘位置重叠的图解表示。图4显示凝结和对照通道中流动前缘速度重叠的图解表示。图5显示图1实施方案中凝结之前的示意性流动前缘位置。图6显示图1实施方案中凝结之后的示意性流动前缘位置。图7显示血液相对波长的吸收系数。图8显示LED的发射光谱。图9显示经优化以检测绿光波长的光电二极管的响应曲线。图10显示在对凝结和对照通道的两不同尺寸芯片中检测到的相对时间的电流强度。图11显示图10的电流强度曲线的导数。图12显示图1实施方案的蛇形部分与像素尺寸19x19 ilm的CXD阵列的重叠。图13至16显示用于通过理论曲线确定凝结时间的方程式方程式的曲线图。图17显示来自实际凝结检测的步骤3的典型数据以及根据理论方法I或2确定的凝结时间。所有这些图中，相似的参照数字指代相似的元件。发明详述本发明提供了用于确定诸如血液和血浆的流体的凝结时间的芯片或一次性检测条形式的装置，与本发明的检测条一起用作便携凝度计的测量仪器，以及采用本发明的微流体装置确定凝结时间的方法。作为Point-of-care装置的便携凝度计为沿四条主线改进的技术:成本降低、血液样品减少、质量控制和增强的便携性。所有这四个方面对于经济且可靠地推广患者自测都是特别重要的。本发明相对于目前的最新便携检测条和凝度计有显著优点:-成本降低:该一次性微流体芯片为极其简单(无源)的元件,其以高容量低成本生产技术和材料制造。-血液样品减少:在必要的质量控制和准确性情况下，通过该微流体芯片技术可检测远少于5 i! L的血液样品。-质量控制:多种不同的板上质量控制可整合到本发明的一次性装置上并由单一的检测器件读取。另外，该装置允许将校准的血浆用作外部质量控制。-增强的便携性:该检测系统极其紧凑、低成本且可被植入薄便携装置上。本发明基于这样的事实，即适当的微流体通道允许诸如血液或血浆的流体样品的毛细流动，使得能用简单器件以无源方式精确监测流体前缘的位置或速度，而无需与样品流体接触。凝结级联开始后(当样品与凝结试剂接触时)样品流体的流变变化，特别是凝结终点时的表观粘度变化，对监测的动力学参数有显著影响。这些参数可用相同的简单检测器件进行监测，并与不含凝结试剂或含不同对照试剂的对照样品比较，或可选择地与预测的理论值比较。不希望被理论所束缚，我们认为本发明的微流体系统以某种方式模拟了血管的微毛细管结构和流动血液的动力学。由于血液凝结阶段(起始、扩大、播散和凝块形成)的复杂性和高灵敏性，尽可能地重现体内止血环境是非常有利的。根据来自芝加哥大学的发表文章[Kastrup, C.J.Runyon, M.K.Shen, F.1smagilov, R.F.Modular chemicalmechanism predicts spatiotemporal dynamics of initiation in the complex networkof hemostasis (模块化学机制预测止血复杂网络中起始的时空动力学)，Department ofChemistry and institute for Biophysical Dynamics, University of Chicago, Editedby George M.Whitesides, Harvard University.],体外微流体环境能够模拟人毛细血管中实际的血液凝结行为，他们证实这对于确定凝结时间是至关重要的。
另外，本发明使得能连续监测流动动力学，这样能够检测止血分子变化，提供高准确性和重复性。具体地，由于微毛细管结构的尺寸，第一不溶性血纤维蛋白的形成对流变性能有明显影响。如图1显示的，在一个实施方案中，本发明的微流体装置为两层组装件，包括下方的平面基板和覆盖层。在下方的基板上，形成了样品分布系统的图案，得到一系列的通道或导管，其通过适当的器件经由一端连接至样品引入部位。这些通道通过毛细管作用引起流动。技术人员能够调整下方基板上形成的通道的大小和形式以获得能够准确监测的流动位置或速度。为了产生流体样品的毛细流动，通道中需要亲水性表面，以便导致了足够的负压。这种亲水性表面可存在于下方基板上或覆盖层上。在一个实施方案中，该下方的基板由塑料制成。如果该塑料是疏水的，则必须通过技术人员已知的手段在通道中形成亲水性，例如化学处理、化学涂层或等离子体处理，以获得期望的表面能或接触角。在优选的实施方案中，通过覆盖层来带来亲水表面，该覆盖层密封在下层上形成的微流体通道。在该实施方案中，或者将亲水性材料选作覆盖层，或者使用经上文所述的亲水性处理的材料。可选择地，在优选的实施方案中，通过用于使形成芯片的两层结合的粘合剂赋予上层亲水性能。这种情况下，重要的是所选的粘合剂涂料不与流体样品反应或不干扰凝结反应。因此，覆盖层可以由各种类型的粘合剂聚合物膜组成，例如热封和压敏粘合剂。可采用亲水性制剂，在粘合剂中添加表面活性剂。优选硬粘合剂，以防止由于密封步骤期间的粘合剂流动或由于蠕变导致的通道堵塞。图2和2A显示了本发明微流体装置的不同实施方案的俯视图，所述装置包括下述的组件。用于引入流体 介质样品的器件(I)，主要由入口组成。该入口连接至分配毛细管通道(2)，接着是通道分叉(3)，其将分配通道(2)分成第一 ^a)和第二区域(6b)，它们允许所述流体介质沿所述区域的长度流动。任选地，该分配通道包含细胞滤器(仅在图1中绘出)。在优选的实施方案中，所述第一(6a)和第二(6b)区域具有相同结构。按从分配通道开始的顺序，所述区域(6a和6b)的每个包括最先的部位(5a，5b)和至少一个微流体通道，其在本文中称为扫描部位(8)。第一部位(5a)包含能够与所述流体介质反应的第一试剂，并使得区域(6a)中的微流体通道用作反应通道，而第二部位(5b)或者是空的，或者含有不同试剂，这样区域^b)中的微流体通道用作对照通道。优选地，所述第一试剂能够引发所述流体介质的凝结。在另一实施方案中，在芯片中存在两个以上的区域。所述区域之一用作以上解释的反应通道，其它两个或多个为对照通道。对于板上质量控制(on-board quality control),血液样品可以沿对照通道被毛细作用驱动，对照通道中反应室具有提供已知且固定(或小范围)的凝结时间的特定试剂。例如，可以引入两种类型的此类对照，标准化对照和异常对照，为凝结时间提供较低和较高参照。对照通道具有与存在于反应通道中的试剂不同的试剂组成。因此，在一个实施方案中，存在标准化的对照通道，其中存在的试剂能够是例如至少一种维生素K依赖的凝结因子。这类凝结因子可来自正常患者血浆的干燥或冻干合并池(pool)。在另一实施方案中，存在异常对照通道，其包含凝结因子抑制剂，例如肝素、柠檬酸盐、草酸盐、EDTA等。另外，它能够包含与标准化对照通道中相同的维生素K依赖的凝结因子。以下举例说明优选的实施方案，描述了区域数目和它们的功能:■ 2个区域:相对于无凝结剂或具有凝结抑制剂的对照通道，一个反应通道用于血液样品凝结时间确定。■ 2个区域:用于通过理论曲线确定血液样品凝结时间的一个反应通道，以及提供标准化凝结时间的一个对照通道。■ 3个区域:相对于无凝结剂或具有凝结抑制剂的对照通道，一个反应通道用于血液样品凝结时间确定。另外，另一对照通道提供标准化的凝结时间。■ 3个区域:一个反应通道用于通过理论曲线比较来确定血液样品凝结时间。另夕卜，一个对照通道提供标准化的凝结时间，另一对照通道提供已知的异常长的凝结时间。所有这些实施方案和其它的对技术人员显而易见的变体都包括在本发明中。
在本发明的装置中，流动仅由毛细作用力驱动，因此该芯片或检测条为无源装置，无需外力。亲水性通道表面使得湿弯月面沿通道移向毛细管负压，而去湿弯月面保持在入口处。通过产生疏水表面或通过设计适合的通道开口而让流动在停止阀处停止。在优选的实施方案中，每一区域(6a，6b)含有用于排出(venting)的器件(7)，最优选排出口，其还用作停止流动阀。尽管在图2中绘制在通道的末端，但是排出口(7)可以位于沿微流体通道的其它位置处。例如，在反应室出口处将排出口(7)与流动停止件连接使得毛细流动达到该点处的速度最大化，如图2A中所显示的。在其它实施方案中，每一通道具有一个以上的排出口(7)，这些排出口(7)使得能控制并调节流体的速度和流动性能。当流体介质经过第一(6a)、第二(6b)和任选的第三区域的扫描部位(8)时，监测流体介质的至少一种性能，优选流体前缘的位置或速度。比较所述不同区域内的所述性能使得能检测到第一区域(6a)内反应发生的时刻，并确定流体样品的凝结时间。这些区域优选为毛细管通道。由于系统尺度缩小，这种装置的工作原理依赖于微流体学，其控制原理完全不同于传统的流动理论。控制原理等截面毛细管的牛顿行为下的动态填充可通过体积流率Q来确定，其依赖于粘度n，总流阻Rfk以及湿(前)和去湿(后)弯月面之间的压差AP:
权利要求
1.确定诸如血液或血浆的流体介质中凝结时间的方法，其包括以下步骤: 提供至少包含以下的微流体装置: -用于引入流体介质样品的器件(1)， -与所述用于引入样品的器件(I)连接的区域，其允许所述流体介质沿所述区域内含有的微通道的长度流动；所述微通道至少部分地由亲水性材料覆盖，使得所述流体介质能够仅由毛细作用力驱动而流动， -在所述区域开始处的部位，其包含能够与所述流体介质反应并起始凝结级联的试剂， 将所述流体介质样品引入所述用于引入流体样品的器件(I)中， 监测流体前缘的位置作为时间的函数L(t), 提供不存在凝块时所述流体介质前缘蔓延的理论值作为时间的函数， 其中所述凝结时间CT被确定为从反应起始时的时间到监测到的凝结函数L(t)偏离所述理论值特定阈值时的耗用时间。
2.如权利要求1所述的方法，其中当1gL(t)相对于log(t)改变斜率时，认为所述监测到的凝结函数L(t)偏离所述理论值特定阈值。
3.如权利要求2所述的方法，其中函数Y=Y(u)=logL(t)由所述监测到的凝结函数L(t)构成，是变量U=1gt的变型，其中如果一阶导数dY/du偏离恒定值0.5特定阈值，则1gL(t)相对于log(t)改变了斜率。
4.如权利要求2所述的方法，其中函数Y=Y(u)=logL(t)由所述监测到的凝结函数L(t)构成，是变量U=1gt的变型，其中如果二阶导数d2Y/du2的衰减偏离0特定阈值，则1gL (t)相对于log(t)改变了斜率。
全文摘要
描述了确定诸如血液的流体介质的凝结时间的方法。该方法监测具有试剂的流体介质的蔓延并将其与理论值进行比较。当监测值偏离理论值时，确定凝结时间。
文档编号B01L3/00GK103143405SQ20131000792
公开日2013年6月12日 申请日期2008年9月22日 优先权日2007年9月20日
发明者艾纳其·萨达巴查姆皮蒂尔德瑞比斯, 胡安·安东尼奥·配昂埃奎厄恩 申请人:艾莱恩微观系统有限公司