Ab-8大孔树脂对花生壳黄酮粗提液动态吸附工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于化合物技术领域，涉及AB-8大孔树脂对花生壳黄酮粗提液动态吸附 工艺。
【背景技术】
[0002] 我国是农业大国，盛产花生，在加工的过程中产生大量的花生壳，大部分作为燃料 燃烧处理，不仅造成了资源浪费，还产生了严重的环境污染问题。现代研宄表明，花生壳中 含有木犀草素等黄酮类物质，具有多种生物活性，在体内具有改善微循环、改变体内酶活 性、降血脂、降低胆固醇含量、抗自由基、抗氧化、增强免疫功能、抗菌抗炎等药理作用。近几 年来，从花生壳中提取的黄酮类化合物应用于保健食品或药品行业，前景良好。花生壳资源 的深度开发利用，既解决了环境污染的问题，又提高了经济效益。
[0003] 花生属豆科一年生草本科植物，果实外皮粗糙，呈黄色或褐色，多数带有方格花 纹，在我国各省区均有种植，近年来总产量达到14, 500kt以上，已成为我国重要的经济作 物。花生脂肪含量在50%左右，蛋白质含量达30%左右，是我国重要的油料作物，也是重要 的植物蛋白资源，经过简单加工投入使用，在加工过程中每年产生花生壳约4, 500kt。研宄 表明，花生壳主要成分是碳水化合物和粗纤维，以及，还含有少量的黄酮类化合物，以木犀 草素含量较高，是主要有效成分。
[0004] 目前对于花生的利用还不够充分，其花生仁主要用来榨取食用油或者加工成副食 品，而花生壳的传统处理方法是少部分用制作牲畜饲料和食用菌培养基，大部分当作燃料 或者直接作为废弃物丢掉，造成了资源的闲置和浪费。随着科技的进步，花生壳的利用也进 入到一个新的阶段，有关研宄表明，花生壳具有较好的抗氧化、降血压、降低胆固醇含量等 作用，以花生壳为原料生产的纯中药制剂"脉舒胶囊"已被用于治疗高血脂症。花生壳还可 以用来提取木犀草素等黄酮类物质，作为纯天然无污染的染色剂和抗氧化剂，已被广泛用 于食品行业和保健品行业中。
[0005] 黄酮类化合物（flavonoids compound)是由植物光合作用产生的，广泛存在于然 植物的根、茎、花、果实等中，是植物次生代谢产物，泛指两个苯环通过中央三碳链相互连结 而成的一系列化合物，以黄酮（2-苯基色原酮）为母核，连有羟基、甲氧基、黄烷醇基等取代 基，常以与糖结合为苷的形式存在，有的以游离态形式存在。黄酮类化合物分子结构复杂多 样，数目种类繁多，表现出多种多样的药理活性，按结构可分为黄酮类（Flavone)、黄烷醇类 (Flavanol)、黄烧酮类（Flavanone)、花色素类（Anthocynidia)等。黄酮类化合物存在形 式多为结晶性固体，少数为无定形粉末，由于分子中存在的交叉共轭体系以及助色团类型、 数目的不同，一般呈黄色或浅黄色。多数游离苷元难溶或不溶于水，易溶于乙醇、乙酸乙酯 等有机溶剂中及碱液中，由于分子中多有酚羟基，故一般显酸性。常见的黄酮类化合物有芦 丁、儿茶素、木犀草素、白藜芦醇及其衍生物等。
[0006] 近年来随着纯化技术的发展，纯度较高的黄酮物质在医药、食品等行业中得到越 来越多的应用，开发了多种以黄酮类物质为主要成分的产品。
[0007] (1)黄酮类化合物在医药行业中的应用
[0008] 在医药方面，根据其药理作用，花生壳在民间被当作中草药煎服用于治疗哮喘、痰 多、肥胖等，其单方制剂"脉舒胶囊"用于治疗高血脂症。
[0009] (2)黄酮类化合物在食品工业中的应用
[0010] 黄酮类化合物因其天然无污染、色调鲜艳纯正等特性已广泛应用于食品行业中， 有关文献表明，黄酮类化合物是一种天然抗氧化剂，可以防止食品的氧化变质，在某些物质 体系中其抗氧化效果优于维生素 E ;同时也是一种天然色素，用作一些食品的着色剂。
[0011] (3)黄酮类化合物在化妆品行业中的应用
[0012] 黄酮类化合物具有美容、保湿、增白等功效，广泛应用于化妆品行业中，作为天然 防晒剂、增白剂、皮肤调理剂、天然无毒染发剂和发用调理剂等已投产使用。皮肤中黑色素 含量是影响肤色的重要物质，由酪氨酸酶催化产生，当黑色素含量足够高时可产生黄褐斑。 而黄酮类物质既能消除自由基又能抑制酪氨酸酶的活性，可减少黑色素的产生，使皮肤变 白。黄酮物质具有生物活性，与皮肤中物质相近，不同于化学制品，会大大减小对人体的刺 激，皮肤不易发生过敏反应。
[0013] 花生壳黄酮粗提液杂质多、成分复杂，不符合医学和食品行业标准，需要进一步精 制。目前国内外关于花生壳黄酮纯化工艺的研宄报道还相对较少，缺乏系统性。
【发明内容】
[0014] 本发明的目的在于提供AB-8大孔树脂对花生壳黄酮粗提液动态吸附工艺，解决 了现有方法纯化黄酮提取物纯化率低的问题。
[0015] 本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：
[0016] 步骤1 :将洁净干燥的花生壳利用高效粉碎机进行粉碎，称量25g花生壳粉放于三 角烧瓶内；
[0017] 步骤2 :按料液比为1 : 30加入75 %乙醇750mL，然后放置于温度为75 °C恒温振 荡器内浸取2h;
[0018] 步骤3 :振荡后将溶液进行真空抽滤，滤液放于离心机内在1500r/min的条件下离 心 30min ;
[0019] 步骤4:取出离心后的上清液于烧杯内，用保鲜膜封存，放置于冰箱内进行冷藏沉 淀 24h ;
[0020] 步骤5 :冷藏沉淀后取出再放置于离心机内在4000r/min的条件下离心30min ;
[0021] 步骤6 :离心后取出上清液于旋转蒸发仪的旋转瓶内并加入蒸馏水，进行减压加 热蒸馏，直到乙醇全部蒸馏出来，将得到的黄酮提取液稀释成上柱液所需浓度2. 0862mg/ ml ；
[0022] 步骤7 :AB-8大孔树脂使用前的预处理：
[0023] (1)活化处理：先取适量的树脂于三角烧瓶内，加入95%乙醇进行浸泡，浸泡24h 后用蒸馏水在耐酸碱漏斗内进行抽滤淋洗，并用蒸馏水进行清洗，洗至无乙醇味为止，再放 入三角烧瓶内加入5%盐酸进行浸泡，浸泡4h后再用耐酸漏斗进行抽滤清洗至中性，清洗 使用蒸馏水，酸洗后重新放入三角烧瓶内加入5%的氢氧化钠进行浸泡，浸泡4h后取出用 耐酸碱漏斗进行抽滤清洗，清洗同样用蒸馏水，清洗至至中性后便完成了树脂的活化；
[0024] (2)使用后的再生处理：将已经使用过的树脂放于在耐酸碱漏斗内进行抽滤并用 用蒸馏水进行淋洗，洗至抽滤液为无色，取出树脂至三角烧瓶内，加70 %的乙醇进行45°C 恒温振荡2h，振荡后进行过滤，将树脂重新放置三角烧瓶内重复上述步骤几次，直至树脂恢 复原来的颜色，然后进行蒸馏水淋洗，洗至无乙醇味为止，将树脂重新放入三角烧瓶内再加 5%盐酸进行浸泡4h后再用蒸馏水淋洗至中性，然后再用5%的氢氧化钠进行浸泡，浸泡4h 后取出使用蒸馏水淋洗至中性，完成树脂的再生；
[0025] (3)装柱：安装好铁架台，将层析柱竖直固定，将活化或再生后的AB-8树脂缓慢注 入层析柱内，使用少量蒸馏水通柱，然后静置一段时间使树脂晾干；
[0026] 步骤8 :AB-8大孔树脂对黄酮提取液进行吸附；吸附条件：上柱液浓度2. 0862mg/ ml，上柱液流速 100. 1907r/min，上柱液 ρΗ5· 0105。
[0027] 本发明的有益效果是提供了 ΑΒ-8大孔树脂纯化黄酮的最佳工艺，工艺吸附选择 性好、洗脱率高、纯化率高。
【附图说明】
[0028] 图1是芦丁标准曲线示意图；
[0029] 图2是Box-Behnken试验第2次结果示意图；
[0030] 图3是Box-Behnken试验第3次结果示意图；
[0031] 图4是Box-Behnken试验第4次结果示意图；
[0032] 图5是Box-Behnken试验第5次结果示意图；
[0033] 图6是Box-Behnken试验第6次结果示意图；
[0034] 图7是Box-Behnken试验第7次结果示意图；
[0035] 图8是Box-Behnken试验第8次结果示意图；
[0036] 图9是Box-Behnken试验第9次结果示意图；
[0037] 图10是Box-Behnken试验第10次结果示意图；
[0038] 图11是Box-Behnken试验第11次结果示意图；
[0039] 图12是Box-Behnken试验第12