过滤装置的制造方法

过滤装置的制造方法
【专利摘要】本发明涉及用于从血液或血液组分中移除物质的过滤装置(8)，所述过滤装置(8)包含：具有入口和出口的壳体；位于所述壳体内的与至少第一配体偶联的第一吸附剂材料；以及位于所述壳体内的与至少第二配体偶联的第二吸附剂材料；其中所述第一配体用于从由入口至出口通过过滤装置(8)的血液或血液组分中移除游离血红蛋白(fHb)，并且所述第二配体用于从其中移除微泡(MV)；其中所述第一配体和第二配体彼此不同；并且其中所述第一吸附剂材料和第二吸附剂材料彼此相同或不同。
【专利说明】
过滤装置
技术领域
[0001] 本发明设及用于从血液或血液组分中移除物质的过滤装置(8)，所述过滤装置(8) 包含:具有入口和出口的壳体化ousing);位于所述壳体内的与至少第一配体偶联的第一吸 附剂材料；W及位于所述壳体内的与至少第二配体偶联的第二吸附剂材料;其中所述第一 配体用于从由所述入口至所述出口通过所述过滤装置(8)的血液或血液组分中移除游离血 红蛋白（free hemoglobin，fHb)，并且所述第二配体用于从其中移除微泡(microvesicle， MV);其中所述第一配体和所述第二配体彼此不同；并且其中所述第一吸附剂材料和所述第 二吸附剂材料彼此相同或不同。
【背景技术】
[0002] 尽管红细胞输注可W救命，但其并非没有风险。在危重症患者中，红细胞输注与提 高的发病率和死亡率相关，其可能随着输注前红细胞储存的延长而提高。
[0003] 最近的研究逐渐认识到，溶血代表着与接受红细胞输注后与死亡率和发病率提高 相关的一种基本机理。
[0004] 运种概念由W下演变而来:临床试验观察表明接受基于血红蛋白的氧载体的创伤 患者发展成高血压和由血红蛋白-NO清除反应引起的多器官损伤，W及在患有血红蛋白病 和溶血性贫血的患者中临床观察到血管病并发症。
[0005] 溶血代表红细胞输注特别是在使用前延长储存时遇到的问题。溶血导致游离血红 蛋白（??6)的释放。是血红素的来源，运进而可W导致由活性氧类别引起的损害增加。
[0006] 需氧生物体天生具有良好的酶促氧化剂防御系统，其提供针对活性氧类别的保 护。然而，由活性氧引起的损害可W被氧化还原活性铁高度放大。潜在毒性的氧化还原活性 铁的一个丰富来源是血红素，并且外源血红素和内源血红素二者可W协同提高氧化剂介导 的细胞损害。
[0007] 血红素非常疏水，容易进入细胞膜，并且大幅提高细胞对氧化剂介导之杀伤的易 感性。血红素还充当低密度脂蛋白（LDL)氧化的催化剂，从而产生对内皮有毒的产物。
[000引血红素的毒性作用可能在许多病理状况中是重要的。运些病理状况不仅包括急性 病症如血管内溶血(其可W导致肾衰竭），而且包括更隐袭的（insidious)过程如动脉粥样 化发生，在其中已观察到铁的病灶内沉积物(或许源自红血球，已知其突入动脉粥样硬化病 灶中）。
[0009] 血浆中的游离血红蛋白在氧化时可W向内皮提供血红素，运大幅增强细胞对氧化 剂介导的细胞损伤的易感性。
[0010] 关于红细胞输注所观察到的导致不利作用的第二个因素为所谓的微泡(MV)"MV也 被描述为外体(ectosome)，是由红血球、血小板、白细胞或内皮细胞释放到血液中的Ιμπι或 更小的憐脂小泡群体。MV的产生是由包括细胞刺激和调亡在内的多种刺激触发的高度受控 过程。即使MV首先被描述为细胞尘埃(cell dust)，现在公认其与广谱生物学活性有关，例 如血栓形成和止血、炎症、血管和免疫功能、调亡或者甚至通过表面蛋白转移的细胞间通 讯。
[0011] 虽然在健康个体中也可w检测到MV，但是在伴随升高的血栓形成风险、血管受累 (vascular involvement)或转移的多种疾病中已观察到其增加。
[0012] 通常，血液制品例如血液或血液组分（如，红细胞、血小板、血浆)在将其施用至有 此需要的对象之前经历进一步处理和储存。已知血液或血液组分的品质可随储存时间增加 而降低。具体地，血液制品中和MV的浓度随储存时间增加而提高。
[0013] 特别地，在血库条件下，红细胞经历渐进性的结构和生物化学变化，通常称为"储 存损伤"。红细胞(也称作红血球）显示出从双凹盘到刚性球形棘红细胞的渐进性细胞形状 转变，伴随着MV从骨针尖端的释放及其在血液制品中的累积。此外，存在ΑΤΡ的消耗、抑酸化 和溶血，溶血导致円lb的累积。
[0014] 储存期间的红细胞膜改变由ATP消耗和氧化触发并且W带3的变化为中屯、，从而导 致了可能影响红细胞变形性、渗透阻力和输注后存活率的膜脱附和解体 (disorganization)。
[0015] 红细胞MV形成代表膜重塑的连续过程，其发生于血液储存的早期，并且防止红细 胞上的憐脂酷丝氨酸暴露。红细胞浓缩物中存在的MV通常源自红细胞并且其数量随储存时 间逐渐增加。
[0016] 然而，对血液制品的需求在不断增加，但是供体的血液供给是波动的，从而导致了 血液制品的定期短缺。因此，提高储存的血液制品的品质和安全性对解决该不断增加的需 求是重要的。
[0017] 因此，非常期望的是，在将血液制品施用至有此需要的对象之前，降低血液制品如 全血或血液组分中??6和MV的含量，特别是包含红细胞的那些血液制品中??6和MV的含量。 运将提高血液制品的安全性和品质，延长储存时间后也如此。
[0018] 已经尝试在储存后和施用前"洗涂"血液或血液组分，特别是包含红细胞的那些， W从储存的血液制品中移除细胞碎片和不期望的物质。为此，已经尝试将红细胞重悬于盐 水中，接着离屯、并从上清液中分离。然而，运种方法非常耗时且昂贵，原因是其必须在无菌 条件下进行W避免接受者的感染风险。
[0019] 另一方面，目的在于减缓储存损伤之发展的方法(例如，通过在无氧条件下储存包 含红细胞的血液制品）需要在血液采集之后并因此在储存血液制品之前处理所有血液制 品。因此，运种方法不允许仅选择性地处理那些因延长储存而需要所述处理的那些血液制 品。相反地，处理所有血液制品而不考虑储存时间。运又导致成本增加并且还可导致处理时 间延长。
[0020] 因此，需要用于在将血液制品施用至有此需要的对象之前提高储存的血液制品特 别是包含红细胞之制品的品质和安全性的方法和装置。

【发明内容】

[0021] 根据本发明的一个实施方案，提供了用于从血液或血液组分中移除物质的过滤装 置(8 )，所述过滤装置(8)包含:具有入口和出口的壳体;位于所述壳体内的与至少第一配体 偶联的第一吸附剂材料；W及位于所述壳体内的与至少第二配体偶联的第二吸附剂材料； 其中所述第一配体用于从由所述入口至所述出口通过所述过滤装置(8)的血液或血液组分 中移除游离血红蛋白（甜b)，并且所述第二配体用于从其中移除微泡(MV);其中所述第一配 体和所述第二配体彼此不同；并且其中所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料彼此相 同或不同。
[0022] 任选地，第一吸附剂材料不与第二配体偶联，并且第二吸附剂材料不与第一配体 偶联。
[0023] 第一和/或第二吸附剂材料可W包含聚合物，其中所述聚合物包含聚甲基丙締酸 醋、聚丙締酷胺、聚苯乙締-二乙締基苯、或者其组合或共聚物。优选的聚合物是包含聚甲基 丙締酸醋的聚合物。
[0024] 用于移除??6的第一配体可W包含聚丙締酸、聚丙締酸醋、或者其组合或共聚物。 [00剧用于移除MV的第二配体可W包含至少一个R-N此基团，其中R为(-C出-)η，其中η为！ 至5,优选1至3,更优选1至2。第一吸附剂材料可W通过结合反应与至少第一配体偶联，和/ 或第二吸附剂材料可W通过结合反应与至少第二配体偶联。
[0026] 第一和/或第二吸附剂材料可W选自珠和纤维。
[0027] 珠的粒径可W为约1 ΟΟμηι至约400μηι，例如约1 ΟΟμηι至约200皿。
[0028] 珠可W包含孔，所述孔的孔径为约50nm至约lOOnm。
[0029] 因此，珠的粒径可W为约lOOwn至约200μπι，和/或包含孔，所述孔的孔径为约50nm 至约lOOnm。此外，珠的粒径可W为约100μπι至约40化m，和/或包含孔，所述孔的孔径为约 50nm 至约 lOOnm。
[0030] 过滤装置(8)可W包含第一吸附剂材料，所述第一吸附剂材料是珠，所述珠的粒径 为约100μπι至约200皿并且包含孔径为约50nm至约lOOnm的孔。作为替代地或另外地，过滤装 置(8)可W包含第二吸附剂材料，所述第二吸附剂材料是珠，所述珠的粒径为约100WI1至约 400μηι并且包含孔径为约50nm至约lOOnm的孔。
[0031] 第一吸附剂材料和第二吸附剂材料可约1至约2的比（体积:体积)在壳体内提 供。
[0032] 第一吸附剂材料可W在壳体内形成至少一个层，并且第二吸附剂材料可W在壳体 内形成至少一个层。由第一和第二吸附剂材料形成的层可W是堆叠的（stacked)。
[0033] 第一吸附剂材料和第二吸附剂材料可W基本上平均地分散在壳体内。
[0034] 过滤装置(8)可W适于整合到输血系统中，和/或过滤装置(8)可W连接至包含血 液或血液组分的容器。
[0035] 过滤装置(8)的壳体可W具有长度和直径，其中长度:直径的比为约2至约4,优选 约2至约3,更优选约3,任选地其中所述壳体为柱体(column)或筒体(cartridge)。
[0036] 过滤装置(8)还可W包含位于壳体内的网（net),所述网容纳第一和/或第二吸附 剂材料，所述网适用于从壳体中截留（entrap)和/或移除所述第一和第二吸附剂材料。
[0037] 待过滤的血液组分可W包含红细胞，优选地其中所述血液组分为红细胞浓缩物 (red cell concentrate，RCC)。
[0038] 根据另一个实施方案，提供了包含至少一个根据本发明的过滤装置(8)的输血系 统。
[0039] 根据本发明的一个实施方案提供了根据本发明的过滤装置(8)用于从血液和/或 血液组分中移除物质（如円lb和MV)的用途。
[0040] 此外，根据另一个实施方案，提供了用于从血液或血液组分中离体移除物质的方 法，所述方法包括W下步骤：（a)提供根据本发明的过滤装置(8)或者根据本发明的输血系 统；W及(b)使所述血液或血液组分由入口至出口通过所述过滤装置(8)。
[0041] 经受根据本发明之方法的血液组分可W包含红细胞，优选地其中所述血液组分为 红细胞浓缩物(RCC)。
[0042] 经受根据本发明之方法的血液或血液组分可W是储存的血液或储存的血液组分。 因此，所述血液或血液组分在过滤前可W是储存的。
[0043] 根据又一个实施方案，提供了套件(kit),所述套件包含：用于从血液或血液组分 中移除物质的第一过滤装置(8)，所述第一过滤装置(8)包含具有入口和出口的壳体和位于 所述壳体内的至少第一吸附剂材料，其中所述第一吸附剂材料与至少第一配体偶联，用于 从由所述入口至所述出口通过所述第一过滤装置(8)的血液或血液组分中移除甜b;W及用 于从血液或血液组分中移除物质的第二过滤装置(8)，所述第二过滤装置(8)包含具有入口 和出口的壳体和位于所述壳体内的至少第二吸附剂材料，其中所述第二吸附剂材料与至少 第二配体偶联，用于从由所述入口至所述出口通过所述第二过滤装置(8)的血液或血液组 分中移除MV，其中所述第一配体和第二配体彼此不同，并且其中所述第一吸附剂材料和第 二吸附剂材料彼此相同或不同。任选地，所述第一吸附剂材料不与所述第二配体偶联，并且 所述第二吸附剂材料不与所述第一配体偶联。
[0044] 第一和/或第二过滤装置(8)可W适于整合到输血系统中。第一和/或第二过滤装 置(8)可W连接至包含血液或血液组分的容器。
[0045] 第一过滤装置(8)和第二过滤装置(8)可W整合到输血系统中，并且可W连接至包 含血液或血液组分的容器。
[0046] 根据本发明的过滤装置(8)可W是运样的过滤装置(8)，其中第一吸附剂材料和/ 或第二吸附剂材料包含珠或者由珠组成，此外，其中所述珠是固定的。可W通过烧结 (sinterization)或者通过团聚(agglomeration)来实现固定。固定的珠可W放置在过滤装 置(8)的壳体中。
[0047] 附图简述
[0048] 图1示出了根据本发明的输血系统的一个实例。
[0049] 定义
[0050] 本文所引用的专利和科学文献构成了本领域技术人员可W获得的知识。本文所引 用的专利和科学文献通过引用并入本文，其程度如同各自具体地且单独地被指明通过引用 并入。
[0051 ]本申请通篇所使用的章节和标题不应理解为限制。
[0052] 本文中未用数量词限定的表述是指一个/种或多于一个/种（即，至少一个/种)语 法对象。例如，除非另外说明，否则"吸附剂材料"意指一种吸附剂材料或多于一种的吸附剂 材料。
[0053] 除非另外说明，否则本文中所使用的术语"和/或"意指"和"或者"或"。
[0054] 如本文中与所列举的数值一起使用的术语"约"意指所列举的数值并且包括所列 举数值的±10%的范围。
[0055] 本说明书通篇在适当时提供了其他定义和解释。
[0化6] 发明详述
[0057]本发明设及用于从血液和/或血液组分中移除物质的过滤材料、过滤装置(8)、套 件和方法。此外，本发明设及包含至少一个根据本发明的过滤装置(8)的输血装置。
[0化引血液可W是全血。示例性血液组分为红细胞、血小板和血浆。红细胞可W W红细胞 浓缩物(RCC)的形式或者作为浓集红细胞(packed red cell，PRC)提供。优选的血液组分为 红细胞，最优选地其中所述红细胞为RCC。
[0059] 不希望被任何理论束缚，本发明人出乎意料地发现，根据本发明的材料、装置(8)、 方法、套件和输血系统允许非常有效地从血液和血液组分中移除可W导致接受输注之对象 的发病率和死亡率提高的NO-清除剂??6和MV。根据一些实施方案，可W从血液或血液组分 中移除一种或更多种另外的物质。所述一种或更多种另外的物质可W选自可溶性物质、细 胞因子、生物活性脂质或细胞碎片。
[0060] 发现在移除甜b和MV之前已经储存的血液或血液组分中的移除特别有效。因此，本 发明的过滤装置(8)、方法、套件和输血系统特别适用于从储存的血液或血液组分中移除 fHb和MV。
[0061] 本发明人出乎意料地发现，本发明的过滤材料、装置(8)、方法、套件和输血系统允 许从已经储存W下时间段的血液或血液组分中有效地移除甜b和MV:至少5天、至少10天、至 少15天、至少20天、至少30天、至少35天、至少40天、41天或长达42天。优选地，所述储存在血 库条件下进行。在某些情况下，血液或血液组分已经储存约1天至约42天，例如约5天至约35 天、约10天至约30天、约30天至约40天、或者约16天至约25天。优选地，血液或血液组分已经 储存在血库条件下。
[0062] 因此，根据本发明的材料、装置(8)、方法和其他材料可W有利地用于提高储存的 血液和血液组分的品质，W及降低由通常在储存的血液制品中观察到的巧b和MV含量提高 引起的输注接受者中的不良作用的风险。
[0063] 因此，本发明的过滤材料、装置(8)、方法、套件和输血系统在其中血液或血液组分 的品质(特别是fm和MV的含量)为关键参数的所有程序中都是非常有用的。示例性程序为 向有此需要的对象提供血液或血液组分的输血，特别是屯、脏和儿科手术中的输血，W及不 洗涂的自体血液(即，从接受输血的同一个体回收的血液)的术后输注。
[0064] 此外，根据本发明的过滤材料、装置(8)、方法、套件和输血系统可W容易且安全地 应用于储存的血液或血液组分。与现有技术的"洗涂"法相比，样品处理时间、操作和处理显 著减少。
[0065] 作为附加的一个优点，根据本发明的过滤材料、装置(8)、方法、套件和输血系统允 许过滤"所需的"储存血液或储存血液组分。因此，与目的在于通过在储存前处理血液或血 液组分来避免例如巧b形成的现有技术方法相比，本发明的装置和方法可W根据需要（例 如，按照基于血液或血液组分的储存时间和接受血液或血液组分的对象的状况的需要)选 择性地应用于储存后的血液或血液组分。
[0066] W下更详细地描述本发明的材料、装置(8)、方法、套件和输血系统。
[0067] W下章节的标题不应理解为限制本发明的公开内容。
[00側过滤装置
[0069]本发明提供了过滤装置(8)，其允许从通过所述过滤装置(8)的血液和血液组分中 有效地移除円lb和MV。
[0070]如W下关于根据本发明的过滤装置(8)的详细描述中进一步详述的，根据一些实 施方案，本发明还提供了包含吸附剂材料或者由吸附剂材料组成的过滤材料，所述吸附剂 材料与至少第一配体和/或第二配体偶联。
[0071 ] 壳体
[0072] 通常，根据本发明的过滤装置(8)包含具有入口和出口的壳体。所述壳体可W适于 允许血液和血液组分由所述入口至所述出口通过其中。
[0073] 壳体可W由本领域中已知的任何合适的材料制成。因此，壳体可W例如由软材料 (例如，聚氯乙締）、刚性材料(例如，聚碳酸醋或聚丙締酸醋）、或者其任意组合制成。
[0074] 此外，壳体可W具有长度和直径。壳体的长度和直径可W在过滤期间影响液体流 量(liquid flow),并且还可W影响从通过过滤装置(8)的血液或血液组分中移除物质的效 率。本发明人发现，壳体长度:壳体直径为约2至约4的比有利地影响液体流量(ml/分钟）。因 此，根据一个优选的实施方案，壳体长度:壳体直径的比为约2至约4。优选地，所述比为约2 至约3;更优选地，所述比为约3。发现在比为约2至约3时，可W达到血液组分特别是RCC的最 佳流量。
[0075] 为了计算所述比，用壳体的长度除W壳体的直径。长度和直径通过应用一般几何 规则来测定。例如，可W通过测定壳体上端与壳体下端之间的距离来测定壳体的长度。壳体 的上端可W是入口所处的端部，而壳体的下端可W是出口所处的端部。具有圆形截面之壳 体的直径可W通过测定通过圆屯、且其终点位于圆上的任意直线段的长度来测定。对于凸截 面形状，可W通过测定与其边界相切的两条相向平行线之间可W形成的最大距离来测定其 直径。
[0076] 过滤装置（8)可W允许血液或血液组分W如下流量从入口至出口通过过滤装置 (8)过滤:约5ml/分钟至约12ml/分钟，优选约8ml/分钟至约11ml/分钟，最优选约10ml/分钟 至约11ml/分钟。
[0077] 壳体可W是筒体或柱体。
[0078] 吸附剂材料
[0079] 至少一种吸附剂材料位于壳体内。例如，至少两种、至少Ξ种或至少四种吸附剂材 料可W位于壳体内，例如一种、两种、Ξ种或四种吸附剂材料。然而，优选的是，两种吸附剂 材料位于壳体内。有时，第一吸附剂材料位于壳体内。作为替代地或者另外地，第二吸附剂 材料可W位于壳体内。通常，除第一吸附剂材料外，第二吸附剂材料也位于壳体中。然而有 时，例如，当至少两个过滤装置(8) W套件的形式提供时，第一吸附剂材料可在第一过滤装 置(8)的第一壳体中提供，并且第二吸附剂材料可在第二过滤装置(8)的第二壳体中提供。
[0080] 如本文中所使用的"吸附剂材料"可W是允许物质吸着（即，吸附和/或吸收，吸附 是优选的）至所述材料的任何材料;适于与用于从血液或血液组分中移除和/或MV的配 体偶联的任何材料;或者两者。
[0081] "物质"可W是待从血液或血液组分中移除的物质，例如fm、MV、其他NO清除剂、可 溶性物质、细胞因子、生物活性脂质、细胞碎片、或其组合。优选的是，所述物质为巧b、MV或 两者。
[0082] 根据本发明的过滤装置(8)中使用的吸附剂材料可W适于在血液过滤应用中使 用。
[0083] 例如，本发明的过滤装置(8)中使用的吸附剂材料(例如，第一吸附剂材料和/或第 二吸附剂材料)可W包含聚合物或者基本上由聚合物组成，所述聚合物例如聚甲基丙締酸 醋、聚丙締酷胺、聚苯乙締-二乙締基苯、或者其组合或共聚物。优选的吸附剂材料包含聚甲 基丙締酸醋或者基本上由聚甲基丙締酸醋组成。包含聚甲基丙締酸醋或者基本上由聚甲基 丙締酸醋组成的吸附剂材料有时在本文中被称为"基于聚甲基丙締酸醋的"。本发明的过滤 装置(8)中使用的吸附剂材料可W包含甲基丙締酸醋或其共聚物或者基本上由甲基丙締酸 醋或其共聚物组成。
[0084] 根据一些实施方案，吸附剂材料可W用特定化学基团通过一种或更多种偶联反应 官能化（例如但不限于，如 Prog. Polym.Sci. 25(2000)711-779 或者化 em.Commun. ,1998， 2275-2286中所述的，二者均通过引用整体并入本文）。
[0085] 例如而非限制，根据一个优选的实施方案，吸附剂材料可W是甲基丙締酸醋的交 联共聚物，例如含环氧乙烷基团的甲基丙締酸醋的交联共聚物(例如Sepabeads?EC-EP 或Reli幻me? EP403;两者均可通过Resindion SI?L，Binasco(MI)，Italy商购获得）。同样 地，例如而非限制，根据一个优选的实施方案，吸附剂材料可W是甲基丙締酷胺、N，N/-亚甲 基-双（丙締酷胺）与带环氧乙烷基团之单体的共聚物，其与环氧化物-聚合物结合（例如 叔〇1口'6罐11：液；可通过5;[卵曰-41化;[油01611110 61]1地，516；[]1116；[111，601'1]1日]17商购获得）。
[0086] 位于壳体内的吸附剂材料可W是珠或纤维，珠是优选的。至少一种吸附剂材料(例 如，第一或第二吸附剂材料)可W是珠，而至少一种吸附剂材料(例如，第一或第二吸附剂材 料)可W是纤维。在一个优选的实施方案中，多于一种的吸附剂材料都包含珠或者由珠组 成。
[0087] 珠可W是固定的珠。可W通过烧结或者通过团聚来实现所述固定。固定的珠可W 放置在过滤装置(8)的壳体中。
[008引珠的粒径可W为约100皿至约400皿，例如约150皿至约350皿或者约200皿至约300 μηι。约100μηι至约200皿的粒径同样是优选的。根据一些实施方案，通过可商购的Malvern仪 器(Mastersizer2000，Malve;rn，装有Hy化0 2000MU采样单元和Mastersizer2000软件）测定 粒径。表述"粒径"和"珠尺寸"在本文中可互换使用。
[0089] 此外，珠可W包含孔。可W根据技术人员已知的标准程序测定孔径。根据一些实施 方案，使用水银孔度计（Porosimeter demo autoPore IV 9500V1.09 系列 413， Micromeritics Instrument Corporation；Penetrometer10-07185 Bulb，1.ISlStem, Powder；B.E.T.Gemini V-Windows-Micromeritics Instrument Corporation)测定孔径。 孔的孔径可W为约50皿至约100皿，例如孔径为约55皿至约100皿、约60皿至约90皿、或者约 70nm至约80nm。孔的孔径可W为约60nm至约80nm，更优选约65nm至约75nm，最优选约70nm。
[0090] 因此，在一些实施方案中，珠的粒径可W为约100μπι至约200μπι，和/或包含孔，所述 孔的孔径为约50nm至约1 OOnm。
[0091] 此外，在一些实施方案中，珠的粒径可W为约100μπι至约400μπι，和/或包含孔，所述 孔的孔径为约50nm至约1 OOnm。
[0092] 在壳体内提供至少第一吸附剂材料和第二吸附剂材料的实施方案中，第一吸附剂 材料可W是珠，而第二吸附剂材料可W是纤维。此外，第一吸附剂材料可W是纤维，而第二 吸附剂材料可w是珠。
[0093] 然而，优选的是，第一吸附剂材料和第二吸附剂材料两者均为珠。第一吸附剂材料 和第二吸附剂材料的珠彼此可W相同或者可W不同。
[0094] 例如而非限制，第一和第二吸附剂材料的珠的珠尺寸可W彼此不同。根据一个优 选的实施方案，第一吸附剂材料的珠的珠尺寸可W为约100WI1至约200μπι，第二吸附剂材料 的珠的珠尺寸可W为约100μπι至约400WI1。
[00Μ]根据一个优选的实施方案，第一吸附剂材料的珠的孔径可W为约50nm至约lOOnm， 第二吸附剂材料的珠的孔径可W为约50nm至约lOOnm。
[0096] 在壳体内提供至少第一吸附剂材料和第二吸附剂材料的实施方案中，所述第一和 第二吸附剂材料可约0.5至约2的比，例如约0.75至约1.25的比存在于所述壳体内。约1 的比是优选的。通过包含在壳体中的第一种类型的吸附剂材料的总体积除W包含在壳体中 的第二种类型的吸附剂材料的总体积来计算所述比。该计算可W基于第一和第二吸附剂材 料的湿体积。本发明人发现，处于上述比时，可W从待过滤的血液或血液组分中非常有效地 移除NO清除剂甜b和MV，从而允许显著地提高储存的血液和血液组分的品质。发现该效果在 比为约1时特别明显。
[0097] 不同的吸附剂材料(例如，第一和第二吸附剂材料)可W在过滤装置(8)的壳体外 侧组合或混合，并且随后可W将该组合或混合物填充到过滤装置(8)的壳体中。
[0098] 作为替代，可W将多于一种的吸附剂材料(例如，至少第一吸附剂材料和第二吸附 剂材料)单独地填充到壳体中，并且随后可W在已经位于壳体内时混合。
[0099] 此外，可W将多于一种的吸附剂材料(例如，至少第一吸附剂材料和第二吸附剂材 料)单独地填充到壳体中W在壳体内获得吸附剂材料的不同层。例如，如果第一吸附剂材料 和第二吸附剂材料包含在壳体内，则第一吸附剂材料可W在壳体内形成至少一个层，并且 第二吸附剂材料可W在壳体内形成至少一个层。根据一个优选的实施方案，第一和第二吸 附剂材料彼此不同。根据另一个优选的实施方案，第一吸附剂材料与至少第一配体偶联，用 于从血液或血液组分中移除甜b;第二材料与至少第二配体偶联，用于从血液或血液组分中 移除甜6。任选地，第一吸附剂材料不与第二配体偶联，和/或第二吸附剂材料不与第一配体 偶联。由第一和第二吸附剂材料形成的层可W在壳体内从入口至出口W交替的方式堆叠。 根据一个实施方案，由第一和第二吸附剂材料形成的每个层的厚度可W为约0.4cm至约 1畑1，例如约0.5畑1、约0.6畑1、约0.7畑1、约0.8畑1或约0.9畑1。堆叠在壳体内的层的总数可^为 至少2个，例如约2至约15个，例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个。
[0100] 配体
[0101] 位于根据本发明之过滤装置(8)壳体内的第一吸附剂材料与至少第一配体偶联。 因此，第一吸附剂材料可W与一种或更多种配体偶联，例如与一种、至少两种、至少Ξ种、至 少四种或至少五种配体偶联。在一些优选的实施方案中，第一吸附剂材料与一种或两种配 体偶联。
[0102] 在一些优选的实施方案中，第一吸附剂材料和与其偶联的至少一种配体形成树 脂。
[0103] 位于根据本发明之过滤装置(8)壳体内的第二吸附剂材料与至少第二配体偶联。 因此第二吸附剂材料可W与一种或更多种配体偶联，例如与一种、至少两种、至少Ξ种、至 少四种或至少五种配体偶联。在一些优选的实施方案中，第二吸附剂材料与一种或两种配 体偶联。
[0104] 在一些优选的实施方案中，第二吸附剂材料和与其偶联的至少一种配体形成树 脂。
[0105] 如本文中所使用的"配体为可W是适用于和/或适于从血液和/或血液组分中移除 物质的任何化合物(例如，分子）。可W从血液和/或血液组分中移除的示例性物质为:??6、 MV、其他NO清除剂、可溶性物质、细胞因子、生物活性脂质、细胞碎片、或其组合。优选的物质 为甜b。同样地，MV代表一种优选的物质。因此，优选的配体为用于从血液或血液组分中移除 甜b的配体。表述"第一配体"和"用于移除游离血红蛋白的配体"可W互换使用。同样优选的 是用于从血液或血液组分中移除MV的配体。配体也可W适用于和/或适于从血液或血液组 分中移除fHb和MV。此外，表述"第二配体"和"用于移除微泡的配体"可W互换使用。
[0106] 为了本发明的目的，表述"游离血红蛋白"（巧b)定义为没有包含在红血球内的血 红蛋白。换言之，该表述包括例如由于裂解或者红细胞发生的其他损害而已经从红血球中 释放的血红蛋白。
[0107] 此外，为了本发明的目的，术语"微泡"（MV)定义为运样的憐脂小泡，其尺寸《1.化 m，例如约50皿至1000皿(例如，约100皿至约900皿、约200皿至约800皿、约300皿至约700皿、 约400皿至约600皿、或约500皿），并且其由血液的细胞组分和/或血管的内皮内衬(lining) 产生。MV包含细胞来源的质膜的片段，可W暴露其膜的外小叶上的阴离子憐脂(PL)憐脂酷 丝氨酸(PS)，并且具有反映其细胞来源的表面膜抗原。MV可W是来源于红血球的MV。
[010引如本文中所使用的"与......偶联"可W意指"与......连接"、"与......组合'、 "与......相连"、"与......结合"、和/或"用......进行表面修饰"。因此，位于根据本发明 之过滤装置(8)壳体内的吸附剂材料可W通过技术人员已知的适当方法与至少一种配体偶 联、连接、组合、相连、结合、和/或用其进行表面修饰。根据一个优选的实施方案，配体与吸 附剂材料共价结合。用配体对吸附剂材料进行表面修饰也是优选的。
[0109] 例如而非限制，吸附剂材料可W包含含有环氧乙烷基团的聚甲基丙締酸醋聚合物 或者基本上由含有环氧乙烷基团的聚甲基丙締酸醋聚合物组成，并且配体可W包含聚丙締 酸或者基本上由聚丙締酸组成。包含在聚甲基丙締酸醋中的环氧乙烷基团可W与氨基化合 物反应，从而产生允许与聚丙締酸配体偶联的中间体。配体可W与吸附剂材料共价结合。吸 附剂材料可W是第一吸附剂材料。
[0110] 同样地，例如而非限制，吸附剂材料可W包含甲基丙締酸醋或其共聚物，或者基本 上由甲基丙締酸醋或其共聚物组成，并且配体可W具有R-N出结构，其中R为(-C出-)n，而且 其中η为1至5的整数。配体可W与吸附剂材料共价结合。优选地，配体为与甲基丙締酸醋或 其共聚物共价结合的乙氨基或甲氨基。此外，非常优选的是，用乙氨基或甲氨基对甲基丙締 酸醋进行表面修饰。吸附剂材料可W是第二吸附剂材料。
[0111] 在壳体内包含不只第一和第二吸附剂材料时，另外的吸附剂材料可W与第一和/ 或第二吸附剂材料偶联相同的配体或者不同的配体。
[0112] 在根据吸附剂材料(例如，第一和/或第二吸附剂材料)与多于一种配体偶联的一 些实施方案中，所述偶联是独立的。因此，根据一些实施方案，吸附剂材料与配体彼此偶联 的方式不影响所述吸附剂材料与另一种配体彼此偶联的方式;此外，吸附剂材料与配体彼 此偶联的方式不影响另一种吸附剂材料与所述配体彼此偶联的方式。
[0113] 第一吸附剂材料与至少第一配体偶联，或者与至少第一配体和第二配体偶联。第 一配体与第二配体彼此可W相同或彼此可W不同。通常，第一配体与第二配体彼此不同。例 如，第一配体与第二配体彼此在结构和/或化学性质上可W不同。
[0114] 第二吸附剂材料与至少第二配体偶联，或者与至少第二配体和第一配体偶联。第 一配体与第二配体彼此可W相同或彼此可W不同。通常，第一配体与第二配体彼此不同。例 如，第一配体与第二配体彼此在结构和/或化学性质上可W不同。
[0115] 第一吸附剂材料可W通过结合反应与至少第一配体偶联。第二吸附剂材料可W通 过结合反应与至少第二配体偶联。根据一个实施方案，所述结合反应导致共价结合。
[0116] 如本文中所使用的"第一配体"为适用于和/或适于从样品特别是血液或血液组分 中移除游离血红蛋白（??6)的配体。
[0117] 根据一些实施方案，第一配体适用于和/或适于从样品特别是血液或血液组分中 移除円lb。
[0118] 第一配体可W包含W下或者可W基本上由W下组成：聚丙締酸、聚丙締酸醋、或者 其组合或共聚物。根据一个优选的实施方案，第一配体包含聚丙締酸或者基本上由聚丙締 酸组成。
[0119] 就成本和化学稳定性而言，使用聚丙締酸、聚丙締酸醋、或者其组合或共聚物作为 用于移除甜b的配体提供了超过往往用于结合血红蛋白的其他配体(例如，腺巧衍生物(如， ATP)或2,3-二憐酸甘油醋(DPG))的显著优点。
[0120] 如本文中所使用的"第二配体"为适用于和/或适于从样品特别是血液或血液组分 中移除微泡(MV)的配体。
[0121] 根据一些实施方案，所述第二配体适用于和/或适于从样品特别是血液或血液组 分中移除MV。
[0122] 第二配体可W包含R-N出基团或者可W基本上由R-N出基团组成。已经发现，如果使 用短R-N此基团，则MV的移除最为有效。因此，第二配体可W包含R-N出基团或者可W基本上 由R-N此基团组成，其中R为(-C此-)n，其中η为1至5的整数。因此，第二配体可W包含W下或 者可W基本上由W下组成：-C此-Ν此基团、-C出-C此-Ν此基团、-C此-C此-C此-Ν此基团、-C出- CH2-CH2-CH2-N 出基团或-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-N 出基团。
[0123] 优选地，第二配体包含R-N出基团或者基本上由R-N出基团组成，其中R为(-C此-)η， 而且其中η为1至3。最优选的是η为1至2。因此，非常优选的第二配体包含-C此-Ν此基团或- CH2-CH2-N出基团，或者由-CH2-N出基团或-CH2-CH2-N出基团组成。
[0124] 本发明人出乎意料地发现，当使用包含上述R-N出基团或者基本上由上述R-N此基 团组成的第二配体时，从血液或血液组分中移除MV非常有效。当使用包含-C出-Ν此基团或- C出-C出-Ν出基团或者基本上由-C出-Ν出基团或-C出-C出-Ν出基团组成的第二配体时，该效果 特别明显。
[0125] 根据本发明的一个优选实施方案，吸附剂材料(如第二吸附剂材料)与W下配体偶 联:包含-C此-Ν此基团或者基本上由-C此-Ν此基团组成的配体;包含-C此-C此-Ν此基团或者 基本上由-CH2-C出-Ν出基团组成的配体;包含-C出-CH2-C出-Ν出基团或者基本上由-CH2-C出- CH2-N此基团组成的配体;包含-CH2-CH2-CH2-CH2-N出基团或者基本上由-CH2-CH2-CH2-CH2- N此基团组成的配体；包含-C此-C此-C此-C此-C此-N出基团或者基本上由-C此-C此-C此-C此- C出-N出基团组成的配体;或者其组合。
[0126] 根据本发明的另一个优选实施方案，吸附剂材料（如第二吸附剂材料）与包含- C此-N此基团或者基本上由-C此-N此基团组成的配体偶联，并且还与包含-C此-C此-N此基团 或者基本上由-C出-C出-N出基团组成的配体偶联。
[0127] 例如而非限制，根据一个优选的实施方案，吸附剂材料(如第二吸附剂材料)可W 为甲基丙締酸醋或其交联共聚物，并且配体可W为-C出-N出或-C此-C此-N此。所述吸附剂材 料可W用所述配体进行表面修饰。所述配体可W与所述吸附剂材料共价结合。
[0128] 根据一个实施方案，与配体偶联的吸附剂材料包含至少0.3毫当量(meq)配体/ml、 至少0.4meq配体/ml或者至少0.5meq配体/ml。吸附剂材料优选地可W包含0.3meq至0.4meq 配体/ml。
[0129] 另一些特征
[0130] 技术人员将认识到，根据本发明的过滤装置(8)可W包含另外的结构元件。
[0131] 例如，根据本发明的过滤装置(8)还可W包含位于壳体内的网。所述网容纳第一 和/或第二种吸附剂材料，并且允许从壳体中截留和/或移除所述第一和/或第二种吸附剂 材料。所述网的筛目尺寸(mesh S i Ze)可W为约15皿至约40皿，例如约20皿至约35μηι或约25 μηι 至约 30μηι。
[0132] 此外，根据本发明的过滤装置(8)可W包含预滤器(pre-filter),所述预滤器用于 从血液或血液组分中移除脂肪和/或微团聚体(例如细胞的微团聚体，特别是包含血小板的 微团聚体）。合适的预滤器在本领域中是已知的，并且目前用于标准输血程序。将预滤器用 于过滤未洗涂的自体血液是特别优选的。
[0133] 本发明的过滤装置(8)可W适于连接至包含血液或血液组分的容器(例如，袋）。例 如，本发明的过滤装置(8)可W包含用于连接至容器的连接装置，例如钉状物(spike)。
[0134] 此外，本发明的过滤装置(8)可W适于整合到输血系统中或者与输血系统连接。因 此，根据一个实施方案，过滤装置(8)包含例如W下的部件:一个或更多个管(7,9)、用于无 菌连接至输血系统的一个或更多个连接装置(2,3)，或者其组合。
[0135] 过滤装置(8)可W是一次性的。
[0136] 示例性的优选实施方案
[0137] 根据一个优选的实施方案，本发明提供了用于从血液或血液组分中移除物质的过 滤装置(8)，所述过滤装置(8)包含:具有入口和出口的壳体;位于所述壳体内的第一吸附剂 材料，其中所述第一吸附剂材料与至少第一配体偶联，用于移除及位于所述壳体内 的第二吸附剂材料，其中所述第二吸附剂材料与至少第二配体偶联，用于从由所述入口至 所述出口通过所述过滤装置(8)的血液或血液组分中移除微泡(MV)。
[0138] 还优选的是，第一吸附剂材料和第二吸附剂材料是珠，第一吸附剂材料的珠的粒 径为约lOOwn至约200μπι，并且包含孔，所述孔的孔径为约50nm至约lOOnm;第二吸附剂材料 的珠的粒径为约100皿至约400μηι，并且包含孔，所述孔的孔径为约50nm至约1 OOnm。
[0139] 甚至更优选的是，与用于移除??6的第一配体偶联的第一吸附剂材料为基于聚甲 基丙締酸醋的珠(例如，珠尺寸为约100皿至约200皿，并且孔径为约50皿至约90皿），并且与 其偶联的用于移除的第一配体包含聚丙締酸或基本上由聚丙締酸组成。
[0140] 另外，甚至更优选的是，与用于移除MV的第二配体偶联的第二吸附剂材料为基于 聚甲基丙締酸醋的珠(例如，珠尺寸为约100μL?至约400μηι，并且孔径为约55nm至约10化m)， 并且第二配体包含R-N此基团或基本上由R-N此基团组成，其中R为(-C此-)n，而且其中η为1 至5,优选1至3,更优选1至2。
[0141] 甚至更优选地，基于聚甲基丙締酸醋的珠和与其偶联的包含聚丙締酸或基本上由 聚丙締酸组成的第一配体形成树脂;并且基于聚甲基丙締酸醋的珠和与其偶联的包含R- Ν出基团或基本上由R-N出基团组成的第二配体形成树脂。最优选地，珠用所述配体进行表面 修饰。
[0142] 还优选的是，珠表面积为70mVg至lOOm^g，和/或与配体偶联的第一和/或第二吸 附剂材料包含至少0.3毫当量(meq)配体/ml,例如0.3毫当量(meq)至0.4毫当量(meq)配体/ ml。
[0143] 最优选的是，第一吸附剂材料和第二吸附剂材料W约1的比(体积:体积)存在于壳 体内。可W根据所述第一吸附剂材料和第二吸附剂材料的湿体积计算所述比。
[0144] 输血系统
[0145] 根据一个实施方案，提供了包含至少一个根据本发明的过滤装置(8)的输血系统。
[0146] 所述输血系统可W包含用于连接至包含血液或血液组分的容器的部件（2,3)(例 如，钉状物）。所述输血系统可W包含滴注室(化ipping chamber) (5)。根据一个优选的实施 方案，滴注室(5)包含用于移除脂肪和/或微团聚体的预滤器(例如，孔径为约150WI1至约200 皿的预滤器）。
[0147] 此外，输血系统可W包含导管部件(4,7,9)。输血系统可W是一次性的。
[0148] 图1中示出了根据本发明的输血系统的一个非限制性实例。
[0149] 示例性输血系统包含:盖(1);允许连接输血系统与包含血液或血液组分的容器的 部件(2)和(3);连接部件(2)和(3)与滴注室巧）（滴注室(5)任选地包含用于移除脂肪和/或 微团聚体的预滤器)的第一导管部件(4); W及第二导管部件(7)。输血系统还包含根据本发 明的过滤装置(8)，所述过滤装置(8)包含具有入口和出口的壳体。过滤装置(8)通过第二导 管部件(7)与滴注室巧)连接，并且经由第Ξ导管部件(9)与允许连接连接器(adapter)(12) 的部件（11)连接。包含在根据图1的示例性输血系统中的其他任选组件为滚轮（10)和位于 第二导管部件(6)上的夹具(6)。
[0150] 技术人员应理解，根据本发明的输血系统可W包含图1中示出且如上所述的组件， 或者基本上由图1中示出且如上所述的组件组成。然而，本发明人同样考虑了包含另外的元 件或特征的输血系统。
[0151] 特别优选的是，根据本发明的输血系统（例如，如图1中所示的系统），其中至少一 个过滤装置(8)包含位于壳体内的网，所述网容纳第一和/或第二吸附剂材料，所述网适于 从所述壳体中截留和/或移除所述第一和/或第二吸附剂材料。
[0152] 遞
[0153] 本发明还提供了用于从血液或血液组分中移除物质的方法。所述方法可W使用根 据本发明的过滤装置(8)或输血系统进行。所述方法可W离体进行。
[0154] 因此，提供了用于从血液或血液组分中移除物质的方法，所述方法包括W下步骤： (a)提供根据本发明的过滤装置(8)或者根据本发明的输血系统；W及(b)使血液或血液组 分由入口至出口通过所述过滤装置(8)。
[0K5]优选的是，待过滤的血液组分包含红细胞。甚至更优选地，所述血液组分为RCC。
[0156] 本文中所提供的方法对于从血液或血液组分中移除甜b和MV特别有用。因此，在一 个优选的实施方案中，本发明提供了用于从血液或血液分中移除甜b和MV的方法，所述方法 包括W下步骤：（a)提供根据本发明的过滤装置(8)或者根据本发明的输血系统；W及(b)使 血液或血液组分由入口至出口通过所述过滤装置(8)。
[0157] 根据另一个实施方案，根据本发明的方法被应用于已经储存的血液或血液组分。
[0158] 本发明人发现，根据本发明的方法允许从已经储存W下时间段的血液或血液组分 中有效地移除甜b和MV:至少5天、至少10天、至少15天、至少20天、至少30天、或至少35天、至 少40天、41天或长达42天。优选地，所述储存发生在血库条件下。例如，所述方法可W应用于 已经储存W下时间段的血液或血液组分:约1天至约42天，例如约5天至约35天、约10天至约 30天、约30天至约40天、或约16天至约25天，尤其是如果血液或血液组分已经储存在血库条 件下的话。
[0159] 如本文中所使用的"储存在血库条件下"意指发生在通常用于血库的条件下的储 存，例如在4°C的溫度下的储存。
[0160] 本发明之用于从血液或血液组分中移除物质的方法可W导致经历所述方法的血 液或血液组分的品质提高。特别地，可W显著提高已经储存超过15天的血液或血液组分的 品质。已经发现，在已经储存超过15天(例如，至少16天、至少20天、至少30天、至少35天、约 40天、或者约30天至约40天）的样品中，血液或血液组分(例如，RCC)中残留的甜b和MV可W 显著减少。
[0161] 例如，残留的巧b和MV可W减少至已经在同等条件下储存15天的血液或血液组分 中可检测的值。
[0162] 甜6(包括残留巧b)的浓度可W根据本领域中已知的标准程序测定。例如，如前所 述（Cardigan R.,Smith Κ.Evaluation of the HemoCue plasma Haemoglobin analyser for assessing haemolysis in red cellconcentrates during storage.Vox Sanguinis (2002) ;82,76)，可W在样品于3000RPM下离屯、5分钟后，使用化emoCue血浆低血红蛋白光度 计（化emoQie Plasma Low 化emoglobin 地otomete;r;HemoQie AB)测定甜b的浓度。
[0163] 同样地，用于测定MV(包括残留MV)的浓度的方法已经被描述并且建立完善。例如， 基于用血型糖蛋白A和膜联蛋白V双重标记的流式细胞术法已经在文献(Rubin 0，Crettaz D，Canellini G等，Microparticles in stored red blood cells：an approach using flow cytometry and proteomic tools.Vox Sanguinis .2008;95:288-297;Xiong Z， Oriss TB，Cavaretta JP，等，Red cell microparticle enumeration：validation of a flow cytometric approach.Vox Sanguinis.2012;103,42-48)中广泛报道。
[0164] 优选地，根据本发明的方法允许移除过滤前的血液或血液组分中包含的巧b的约 50 %至约80 % (例如，约55 %至约75 %、或者约60 %至约70 %，最优选地，约70%至约80 % )。 因此，给定单位的经历所述方法的血液或血液组分中甜b的起始浓度可W显著降低，并且所 产生的纯化的血液或血液组分中巧b的浓度可W为起始浓度的约50 %至约20 %。如前所述 (Cardigan R.,Smith Κ.Evaluation of the HemoCue plasma Haemoglobin analyser for assessing haemolysis in red cell concentratesduring storage.Vox Sanguinis (2002); 82，76)，在样品于3000RPM下离屯、5分钟后，可W使用化emoCue血浆低血红蛋白光度 计化emo化e AB)来测定过滤之前和之后的??6浓度。
[0165] 此外，优选地，根据本发明的方法允许移除过滤前的血液或血液组分中包含的MV 的约50%至约70% (例如，约55%至约65%、或者约60%，最优选约60%至约70%)。因此，给 定单位的经历所述方法的血液或血液组分中的MV的起始浓度可W显著降低，并且所产生的 纯化的血液或血液组分中MV的浓度可W为起始浓度的约50%至约30%。可W按照用于FACS 分析的标准实验程序使用FACSAria III流式细胞仪(Becton-Dickinson)，使用用阳标记的 抗人血型糖蛋白A抗体(BD Bioscience)和膜联蛋白V-APC(BD Bioscience)双重标记来测 定过滤之前和之后的MV浓度。
[0166]
[0167] 本发明还提供了用于从血液或血液组分(如RCC)中移除物质（如甜b和MV)的套件。
[0168] 根据本发明的套件包含至少一个根据本发明的过滤装置(8)和/或至少一个根据 本发明的输血系统。
[0169] 因此，提供了运样的套件，其包含至少一个、至少两个、至少Ξ个、至少四个、至少 五个或至少十个根据发明的过滤装置(8)。所述过滤装置(8)彼此可W相同或者可W不同。
[0170] 优选地，套件包含至少两个根据本发明的过滤装置(8)，其中所述过滤装置(8)彼 此相同或不同。更优选的是，套件包含至少两个根据本发明的过滤装置(8)，其中所述过滤 装置(8)彼此不同。
[0171] 套件可W包含至少两个过滤装置(8)，其中第一过滤装置(8)适于从血液或血液组 分中移除??6,并且第二过滤装置(8)适于从血液或血液组分中移除MV。
[0172] 包含在根据本发明之套件中的过滤装置(8)可W适于整合到输血系统中，可W连 接至包含血液或血液组分的容器，或者两者兼具。
[0173] 此外，包含在根据本发明之套件中的过滤装置(8)可W整合到输血系统中，并且可 W连接至包含血液或血液组分的容器。
[0174] 根据一个实施方案，提供了套件，所述套件包含用于从血液或血液组分中移除物 质的第一过滤装置(8)，所述第一过滤装置(8)包含具有入口和出口的壳体W及位于所述壳 体内的至少第一吸附剂材料，其中所述第一吸附剂材料与至少第一配体偶联，用于从由所 述入口至所述出口通过所述第一过滤装置(8)的血液或血液组分中移除??6。
[0175] 根据该实施方案的套件还可W优选地包含根据本发明之用于从血液或血液组分 中移除物质的第二过滤装置(8)，所述第二过滤装置(8)包含具有入口和出口的壳体W及位 于所述壳体内的至少第二吸附剂材料，其中所述第二吸附剂材料与至少第二配体偶联，用 于从由所述入口至所述出口通过所述第二过滤装置(8)的血液或血液组分中移除MV。
[0176] 根据该实施方案，所述第一吸附剂材料和第二吸附剂材料彼此可W相同或者可W 不同。
[0177] 此外，第一配体和第二配体彼此可W相同或者可W不同。优选的是，第一配体和第 二配体彼此不同。更优选地，第一吸附剂材料和第二吸附剂材料彼此不同，并且第一配体和 第二配体彼此不同。
[0178] 任选地，第一吸附剂材料不与第二配体偶联，并且第二吸附剂材料不与第一配体 偶联。
[0179] 此外，位于第一过滤装置(8)的壳体中的第一吸附剂材料与位于第二过滤装置(8) 的壳体中的第二吸附剂材料可约1至约2的比（体积:体积)包含在套件中。可W根据第 一和第二吸附剂材料的湿体积计算所述比。
[0180] 根据一个非常优选的实施方案，所述套件包含第一过滤装置(8)，所述第一过滤装 置(8)包含:具有入口和出口的壳体;位于所述壳体内的第一吸附剂材料，其中所述第一吸 附剂材料与至少第一配体偶联，用于从由所述入口至所述出口通过所述过滤装置(8)的血 液或血液组分中移除巧b。所述套件还包含第二过滤装置(8)，所述第二过滤装置(8)包含： 具有入口和出口的壳体;位于所述壳体内的第二吸附剂材料，其中所述第二吸附剂材料与 至少第二配体偶联，用于从由所述入口至所述出口通过所述过滤装置(8)的血液或血液组 分中移除微泡(MV)。
[0181] 还优选的是，第一和第二吸附剂材料是珠，第一吸附剂材料的珠的粒径为约100μπι 至约200皿，并且包含孔，所述孔的孔径为约50皿至约100皿;第二吸附剂材料的珠的粒径为 约1 ΟΟμηι至约400μηι，并且包含孔，所述孔的孔径为约50nm至约1 OOnm。
[0182] 甚至更优选的是，与用于移除??6的第一配体偶联的第一吸附剂材料是基于聚甲 基丙締酸醋的珠(例如，珠尺寸为约100皿至约200皿，并且孔径为约50皿至约90皿），并且与 其偶联的用于移除的第一配体包含聚丙締酸或基本上由聚丙締酸组成。
[0183] 另外，甚至更优选的是，与用于移除MV的第二配体偶联的第二吸附剂材料是基于 聚甲基丙締酸醋的珠(例如，珠尺寸为约100μπι至约400μηι，并且孔径为约55nm至约10化m)， 并且第二配体包含R-N此基团或基本上由R-N此基团组成，其中R为(-C此-)n，而且其中η为1 至5,优选1至3,更优选1至2。
[0184] 甚至更优选地，基于聚甲基丙締酸醋的珠和与其偶联的包含聚丙締酸或基本上由 聚丙締酸组成的第一配体形成树脂;并且基于聚甲基丙締酸醋的珠和与其偶联的包含R- Ν出基团或基本上由R-N出基团组成的第二配体形成树脂。最优选地，珠用所述配体进行表面 修饰。
[0185] 还优选的是，珠表面积为70mVg至lOOm^g，和/或与配体偶联的第一和/或第二吸 附剂材料包含至少0.3毫当量(meq)配体/ml,例如0.3毫当量(meq)至0.4毫当量(meq)配体/ ml。
[0186] 最优选的是，第一和第二吸附剂材料W约1的比（体积:体积)存在于套件内。可W 根据所述第一和第二吸附剂材料的湿体积计算所述比。 实施例
[0187] 通过W下实施例进一步说明本发明，其不应理解为限制。仅使用常规实验方法，本 领域内技术人员将认识到或者能够确定本文中描述的具体物质和程序的许多等同物。运些 等同物旨在包括在W下实施例之后的权利要求的范围内。
[01则 实施例1
[0189] 在受控条件下用已知起始浓度的游离血红蛋白（甜b)和微泡(MV)测试根据本发明 的过滤装置(8)和输血系统从储存的红细胞浓缩物(RCC)中移除础3和MV的能力。
[0190] 所使用的过滤装置(8)包含具有W下尺寸的壳体:长度8cm并且直径2.6cm(长度： 直径比为约3)。与聚丙締酸偶联的基于聚甲基丙締酸醋的珠(珠尺寸1(Κ)μπι至200皿，孔径 50nm至Wnm)位于壳体内，用于从储存的RCC中移除础3。此外，具有与通式R-N出(其中R为(- C此-)n，且n=l至2)的短链氨基偶联的基于甲基丙締酸醋之表面的珠(珠尺寸100皿至40化 m;孔径55nm至lOOnm;表面积:70m2/g至lOOmVg; 0.3meq/ml至0.4meq/ml)位于壳体内并且用 于从储存的RCC中移除MV。
[0191] 在实验的准备中，将溶解在生理盐水溶液中的22ml与聚丙締酸偶联之基于聚甲基 丙締酸醋的珠与22ml具有与短链氨基偶联的基于甲基丙締酸醋之表面的珠混合在一起，然 后填充到过滤装置(8)的壳体中。
[0192] 然后将过滤装置（8)连接至输血装置。适当时，输血装置还包含用于连接至包含 RCC之容器的钉状物;包含用于微团聚体的150WI1至200WI1预滤器的滴注室（5);W及导管部 件(4,7,9)。参见图1。
[0193] 用250ml生理盐水溶液进行装填(prime )W移除空气。
[0194]使在标准血库条件下（在4 °C下）储存30天至40天的RCC白细胞耗尽 (leukodepleted)，并且测定样品中ffib和MV的初始浓度。在样品于3000RPM巧分钟下离屯、 后，通过化emoCue血浆低血红蛋白光度计化emo化e AB)测量游离血红蛋白；通过基于用血 型糖蛋白A、膜联蛋白V双重标记的流式细胞术法测量MV。用人甜b标定样品W获得具有已知 精确甜b起始浓度的样品：450mg/dl、460mg/dl或1020mg/dl。过滤前测定的样品中MV的起始 浓度为 60.0 OOMV/μΙ 至 80.0 OOMV/μΙ。
[0195] 每次测试所使用的RCC体积为240ml至260ml，并且血细胞比容为55%至60%。
[0196] 对于每次测试，将具有储存的RCC的容器连接至系统并开始过滤。在整个过滤期间 倒置过滤装置(8)，并且使用滚轮控制流量W达到10ml/分钟的流量值。首先，将用于装填该 系统的生理盐水溶液洗脱并排出。然后，收集并分析纯化的RCC。
[0197] 在过滤后测定??6和MV的浓度。
[019引结果在表1中示出。
[0199]
[0200] 表1中描述的结果明确示出，本发明的过滤装置(8)和输血系统在从储存的血液组 分中移除??6和MV方面非常有效，同时允许适于典型临床输血时间的优异流量。
[0201] 实施例2
[0202] 如W上关于实施例1所描述地进行实验，但是开始没有用生理盐水溶液装填系统。 替代地，用RCC填充位于过滤装置(8)上游（即，在过滤装置(8)与用于连接至具有RCC的容器 的钉状物之间）的导管部件(4,7)W移除空气，然后将所述导管部件(4,7)连接至过滤装置 (8)。如实施例1那样进行过滤。结果在表2中示出。
[0203]
[0204] 因此，即使没有使用生理盐水溶液来装填系统，fHb和MV也被有效地移除。
[02化]实施例3
[0206] 评估了与连接物（linker)偶联的不同吸附剂材料对从储存的血液组分(RCC)中移 除MV的作用。
[0207] 所测试的与连接物偶联的吸附剂材料为基于甲基丙締酸醋的珠的交联共聚物，其 通过与具有不同链长度的氨基偶联来进行表面修饰。
[0208] 与吸附剂材料偶联的氨基具有通式R-N也，并且R=(-C也-)n。对于通式R-N也的氨 基，当R= (-C也-)n且n = 1或2时，R称为"短'；而对于通式R-N也的氨基，当R= (-C也-)n且n = 3至即寸，R称为"中"。对于通式R-N也的氨基，当R=(-C也-)n且n>5时，R称为。长"。
[0209] 珠尺寸为100μL?至400皿。离子交换容量（Ion Exchange Capacity, IEC)为0.3meq/ g至0.9meq/g。
[0210] 进行按比例缩小的实验W使用具有已知量的起始MV的一个RCC单元(对应于250ml 至320ml的体积，取决于捐献体积和程序）。
[0211] 所测试的与连接物偶联的吸附剂材料为基于甲基丙締酸醋的珠的交联共聚物，其 通过与短(测试5)、中（测试6)或长(测试7)氨基偶联进行表面修饰。
[0212] 将在标准血库条件下（在4°C下)储存41天的白细胞减少的RCC单元等分成Ξ个样 品。每份的RCC体积为80ml并且血细胞比容为58%。
[0213] 使用基于流式细胞仪的方法测量微泡。使用不同的特定标志物如PE抗人血型糖蛋 白A抗体(BD Bioscience)和膜联蛋白V-APC(BDBioscience)进行MV检测和鉴定。使用包含 标准化数量巧光珠的化U Count管(BD Bioscience)进行绝对计数。
[0214] 计算填充到各过滤装置(8)中的与连接物偶联的吸附剂材料的体积，W向测试5至 7提供可比较的离子交换容量。用于过滤装置(8)的体积为6ml至9ml。
[0215] 对于每次测试，将过滤装置（8)(长度:直径比为约3)连接至系统并且用150ml的 0.9 % NaCl (生理盐水溶液)装填。
[0216] 然后从系统中移除盐水，移除盐水袋并替换为RCC袋。用RCC填充上游管W移除空 气，然后将管连接至过滤装置(8)。然后，开始过滤。使该筒体在整个过滤期间保持倒置，并 且只通过珠的尺寸来控制流量。
[0217] 在过滤之前和之后测量MV。表3示出与不同链长度的氨基酸基团偶联的上述珠所 实现的MV移除（％)。
[021 引
[0219] 表3中描述的结果明确示出，氨基的链长度影响MV从血液或血液组分(例如RCC)中 的移除。对于短链长度，移除是优异的。对于中链长度，移除减少。对于长链长度，未观察到 MV从测试样品中的移除。
[0220] 测试5中使用的与连接物偶联的吸附剂材料表现出移除MV的优异能力，并且已经 与用于移除的树脂一起用于按比例扩大的实验(也参见实施例1)。
【主权项】
1. 用于从血液或血液组分中移除物质的过滤装置(8)，所述过滤装置(8)包含： 具有入口和出口的壳体； 位于所述壳体内的与至少第一配体偶联的第一吸附剂材料；以及 位于所述壳体内的与至少第二配体偶联的第二吸附剂材料； 其中所述第一配体用于从由所述入口至所述出口通过所述过滤装置(8)的血液或血液 组分中移除游离血红蛋白（fHb)，并且所述第二配体用于从其中移除微泡(MV); 其中所述第一配体和所述第二配体彼此不同；并且 其中所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料彼此相同或不同。2. 根据权利要求1所述的过滤装置(8)，其中所述第一吸附剂材料不与所述第二配体偶 联，并且所述第二吸附剂材料不与所述第一配体偶联。3. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述第一吸附剂材料和/或所述第二吸附剂材料包含聚合物，所述聚合物包含聚 甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯-二乙烯基苯、或者其组合或共聚物，优选地其中所述 聚合物包含聚甲基丙烯酸酯。4. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中用于移除fHb的所述第一配体包含聚丙烯酸、聚丙烯酸酯、或者其组合或共聚物。5. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中用于移除MV的所述第二配体包含至少一个R-NH2基团， 其中R为(_CH2_)n，其中η为1至5,优选1至3,更优选1至2。6. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述第一吸附剂材料通过结合反应与所述至少第一配体偶联，和/或其中所述第 二吸附剂材料通过结合反应与所述至少第二配体偶联。7. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述第一吸附剂材料和/或所述第二吸附剂材料选自珠和纤维。8. 根据权利要求7所述的过滤装置(8): 其中所述珠的粒径为约1 〇〇Μ?至约400μηι;和/或 其中所述珠包含孔，所述孔的孔径为约50nm至约lOOnm，或者孔径为约50nm至约lOOnm。9. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 所述过滤装置(8)包含第一吸附剂材料，所述第一吸附剂材料是珠，所述珠的粒径为约 100μπι至约200μπι并且包含孔径为约50nm至约lOOnm的孔，和/或 所述过滤装置(8)包含第二吸附剂材料，所述第二吸附剂材料是珠，所述珠的粒径为约 100μπι至约400μηι并且包含孔径为约50nm至约lOOnm的孔。10. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料以约0.5至约2,优选约1的比（体积： 体积)在所述壳体内提供。11. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述第一吸附剂材料在所述壳体内形成至少一个层，所述第二吸附剂材料在所述 壳体内形成至少一个层，并且其中由所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料形成的所 述层是堆叠的;或者 其中所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料基本上平均地分散在所述壳体内。12. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述过滤装置(8)适于整合到输血系统中，和/或 其中所述过滤装置(8)可连接至包含血液或血液组分的容器。13. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)，其中所述壳体具有长度和直径， 其中所述长度:直径的比为约2至约4,优选约2至约3,更优选约3,任选地其中所述壳体为柱 体或筒体。14. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)，其还包含位于所述壳体内的网， 所述网容纳所述第一吸附剂材料和/或所述第二吸附剂材料，所述网适于从所述壳体中截 留和/或移除所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料。15. 根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)， 其中所述血液组分包含红细胞，优选地其中所述血液组分为红细胞浓缩物(RCC)。16. 输血系统，其包含至少一个根据前述权利要求中任一项所述的过滤装置(8)。17. 用于从血液或血液分中离体移除物质的方法，所述方法包括以下步骤： (a) 提供根据权利要求1至15中任一项所述的过滤装置(8)或者根据权利要求16所述的 输血系统；以及 (b) 使所述血液或血液组分由入口至出口通过所述过滤装置(8)。18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述血液组分包含红细胞，优选地其中所述血液 组分为红细胞浓缩物(RCC)。19. 根据权利要求17至18中任一项所述的方法，其中所述血液或血液组分在过滤前已 经储存。20. 套件，其包含： 用于从血液或血液组分中移除物质的第一过滤装置(8)，所述第一过滤装置(8)包含具 有入口和出口的壳体以及位于所述壳体内的至少第一吸附剂材料， 其中所述第一吸附剂材料与至少第一配体偶联，用于从由所述入口至所述出口通过所 述第一过滤装置(8)的血液或血液组分中移除fHb;以及 用于从血液或血液组分中移除物质的第二过滤装置(8)，所述第二过滤装置(8)包含具 有入口和出口的壳体以及位于所述壳体内的至少第二吸附剂材料， 其中所述第二吸附剂材料与至少第二配体偶联，用于从由所述入口至所述出口通过所 述第二过滤装置(8)的血液或血液组分中移除MV， 其中所述第一配体和所述第二配体彼此不同，并且 其中所述第一吸附剂材料和所述第二吸附剂材料彼此相同或不同， 任选地，其中所述第一吸附剂材料不与所述第二配体偶联，并且所述第二吸附剂材料 不与所述第一配体偶联。21. 根据权利要求19所述的套件， 其中所述第一过滤装置(8)和/或所述第二过滤装置(8)适于整合到输血系统中，和/或 其中所述第一过滤装置(8)和/或所述第二过滤装置(8)可连接至包含血液或血液组分 的容器。22. 根据权利要求20所述的套件，其中所述第一过滤装置(8)和所述第二过滤装置(8) 被整合到输血系统中并且可连接至包含血液或血液组分的容器。23.根据权利要求1至15中任一项所述的过滤装置(8)，其中所述第一吸附剂材料和/或 所述第二吸附剂材料是珠，其中还通过烧结或者通过团聚固定所述珠。
【文档编号】A61M1/36GK105939782SQ201480074581
【公开日】2016年9月14日
【申请日】2014年12月17日
【发明人】乔治·马里, 塞雷娜·博尔吉, 埃莱娜·菲内蒂
【申请人】意大利费森尤斯血液技术有限公司