专利名称：一种用于核酸纯化的离心柱的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种用于核酸纯化的离心柱，属于核酸纯化的离心管技术领域。
背景技术：
原有的核酸纯化是将细胞进行裂解产生裂解液，然后按照传统的纯化方法添加溶剂进行沉淀得出，该种方法步骤繁琐，提取的核酸的纯度低，同时工作效率也不高。随着分子生物学实验技术的发展，采用旋转离心柱的方法纯化核酸已经为实验室的常规方法。主要步骤是将标本通过蛋白酶K、表面活性剂等处理后使其中的核酸分子游离于溶液，这一溶液中还存在能够促进核酸与硅胶固相或者其他可以与核酸特异结合的固相材料的特殊离子或者分子。然后将溶液移入置放有可以和核酸特异结合的上述固相材料的离心柱中进行离心，或者真空抽滤。此时核酸被吸附在离心柱本体内部的硅胶或者其它固相材料上，然后采用缓冲液洗涤除去残留杂质后用纯水或者TE溶液洗脱就得到被纯化的核酸标本。上述的核酸可以是DNA分子也可以是RNA分子。上述方法中一个重要的实验器材为离心柱，现有的离心柱洗脱体积至少50-100微升，洗脱体积越小，洗脱效率越低，当洗脱体积为50微升时，洗脱效率只有50-60%。而大部分分子生物学实验的体积都只有几十微升。因此提取核酸的时候，浓度会太稀。无法满足需要。
发明内容本实用新型提供一种用于核酸纯化的离心柱，可以进行超小体积的离心纯化，产品浓度高、纯度高，同时纯化效率也极高。本实用新型是通过以下的技术方案实现的:一种用于核酸纯化的离心柱，包括离心柱本体,所述离心柱本体底部为锥形，所述锥形的端头具有一段直径不变的延伸段，所述延伸段的底部截面上具有固相核酸吸附材料限位装置，延伸段顶部具有一个凸起。其功能是固定吸附核酸的固相材料。所述固相核酸吸附材料限位装置是以所述延伸段底部截面的圆心为中心起点，将所述截面周长进行三等分的连接杆。所述固相核酸吸附材料限位装置是以所述延伸段底部截面的圆心为中心，互相垂直交叉的连接杆。上述两种限位装置，第一种情况是将所述延伸段底部截面周长分成了三等分弧，第二种情况是将所述延伸段底部截面周长分成了四等分弧，两种结构均为几何稳定结构，可以起到兜住离心柱本体内部的固相核酸吸附材料的作用，是一种良好的固相核酸吸附材料限位装置。该限位装置配合延伸段顶部的凸起，凸起的作用是防止固相核酸吸附材料的弹出，双重进行硅胶模的限位，使完成纯化的标本具有高纯度、高得率。本实用新型的有益效果为:[0013]1.本离心柱进行超小体积的核酸纯化，可以制备成最大装膜量为9mg的标本纯化离心柱；2.为了配合超小体积，本实用新型设置了固相核酸吸附材料限位装置和凸起防膜弹出，保证了固相核酸吸附材料的稳定性，从而保证了样品的纯度；3.本实用新型的最大吸附量可以达到20-25微克DNA，40-50微克RNA ；4.本实用新型的最小洗脱体积可以达到5ul ;5.本实用新型提取得到的核酸浓度可以达到10ug/ul。
图1是本实用新型的主视图图2是本实用新型的一种实施方式的俯视图
具体实施方式
以下结合附图，对本实用新型做进一步说明。如图1，是本实用新型的主视图，是一种用于核酸纯化的离心柱，包括离心柱本体1，所述离心柱本体底部为锥形101，所述锥形的端头具有一段直径不变的延伸段102，所述延伸段102的底部截面上具有固相核酸吸附材料限位装置，延伸段顶部具有一个凸起2。如图2，是本实用新型的一种实施方式的俯视图，硅胶模限位装置是以所述延伸段底部截面的圆心为中心起点，将所述截面周长进行三等分的连接杆3。另外，本实用新型还有另外一种实施方式，即将延伸段底部截面周长进行四等分，该实施方式未显示在附图中。具体为，硅胶模限位装置是以所述延伸段底部截面的圆心为中心，互相垂直交叉的连接杆。以下为本实用新型的一种实施方式:微型离心柱实施例:分别用常规离心柱内径约7mm,容积约0.8ml,和上述micro离心柱按如下操作步骤提取血清中乙肝病毒DNA(以下所有试剂除特别注明来源的外，都来自重鼎生物技术有限公司商品试剂盒):一、常规离心柱提取1、取血清100微升，加入5微升蛋白酶K溶液(10mg/ml)，加入裂解液GL100微升，漩涡混合10秒钟，37度保温10分钟。2、加无水乙醇200ul，充分混匀，将溶液移入带有收集管的离心柱，15000rpm离心2分钟，小心拿出离心柱(勿让离心柱碰到溶液)，弃去离心管中溶液(DNA吸附在柱上)，再将离心柱放回收集管。3、加600μ1 Buffer Wl于离心柱，15000rpm离心2分钟(DNA吸附在柱上)。弃去离心管中溶液。4、加600 μ I Buffer W2于离心柱，15000rpm离心30秒(DNA吸附在柱上)。弃去离心管中溶液。再将离心柱放回收集管，15000rpm离心2分钟(DNA吸附在柱上)。5、小心取出离心柱置于另一洁净1.5ml离心管，加入Buffer TE溶液100 μ I (预热至70°C )，放置3分钟，15000rpm离心2分钟，DNA即被洗脱。[0033]6、采用深圳匹基生物技术有限公司HBV实时荧光定量PCR试剂盒检测含量。二、微型离心柱提取1、取血清100微升，加入5微升蛋白酶K溶液(10mg/ml )，加入裂解液GLlOO微升。漩涡混合10秒钟。37度保温10分钟。2、加无水乙醇200ul，充分混匀，将溶液移入带有收集管的离心柱，15000rpm离心2分钟，小心拿出离心柱(勿让离心柱碰到溶液)，弃去离心管中溶液(DNA吸附在柱上)，再将离心柱放回收集管。3、加500 μ I的Buffer Wl于离心柱，15000rpm离心2分钟(DNA吸附在柱上)，弃去离心管中溶液。4、加500 μ I的Buffer W2于离心柱，15000rpm离心30秒(DNA吸附在柱上)，弃去离心管中溶液，再将离心柱放回收集管，15000rpm离心2分钟(DNA吸附在柱上)。5、小心取出离心柱置于另一洁净1.5ml离心管，加入Buffer TE溶液10 μ I (预热至70°C )，放置3分钟，15000rpm离心2分钟，DNA即被洗脱。6、采用深圳匹基生物技术有限公司HBV实时荧光定量PCR试剂盒检测含量，仪器为 ROCHE, Lightcycler2000o三、实时荧光定量PCR检测结果乙肝病毒DNA含量荧光定量PCR检测结果
权利要求1.一种用于核酸纯化的离心柱，包括离心柱本体,所述离心柱本体底部为锥形,其特征在于所述锥形的端头具有一段直径不变的延伸段，所述延伸段的底部截面上具有固相核酸吸附材料限位装置，延伸段顶部具有一个凸起。
2.如权利要求1所述的一种用于核酸纯化的离心柱，其特征在于所述固相核酸吸附材料限位装置是以所述延伸段底部截面的圆心为中心起点，将所述截面周长进行三等分的连接杆。
3.如权利要求1所述的一种用于核酸纯化的离心柱，其特征在于所述固相核酸吸附材料限位装置是以所述延伸段底部截面的圆心为中心，互相垂直交叉的连接杆。
专利摘要本实用新型公开了一种用于核酸纯化的离心柱，包括离心柱本体，所述离心柱本体底部为锥形，所述锥形的端头具有一段直径不变的延伸段，所述延伸段的底部截面上具有固相核酸吸附材料限位装置，顶部具有一个凸起；本实用新型可以应用于微量的核酸纯化，装膜量为5-9mg，同时保证高洗脱效率，高浓度微量纯化。
文档编号B04B7/00GK203044181SQ20132002584
公开日2013年7月10日 申请日期2013年1月17日 优先权日2013年1月17日
发明者陈辉 申请人:宁波市重鼎生物技术有限公司