专利名称：乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及用于检测乳粉中蛋白质含量的试剂盒。具体涉及基于双缩脲法，利用比色卡测定乳粉中蛋白质含量的试剂盒及其制造方法和蛋白质含量的检测方法。
背景技术：
乳粉是消费者，尤其是婴幼儿的一种重要食物来源。其蛋白质含量的高低是乳粉质量优劣的重要指标。现行乳粉中蛋白质含量的测定方法采用GB/T5413.1-1997《婴幼儿配方食品和乳粉蛋白质的测定》中规定的凯氏定氮法。该方法是将乳粉样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出反应溶液，而样品中的有机氮转化为氨，并与硫酸结合成硫酸铵；然后加入碱进行蒸馏，使氨逸出溶液，并用硼酸溶液吸收逸出的氨；最后以标准盐酸溶液滴定吸收了氨的硼酸溶液。根据标准硼酸铵溶液所消耗的盐酸量计算乳粉样品中的蛋白质含量。该方法的优点是检测精度高。但是其检测步骤繁琐，所需的测定时间较长。另外，需要配备多种的仪器设备；所用的一些试剂，比如浓硫酸等，具有较高的危险性；样品消化过程中还会产生有毒有害气体。因而对实验条件和操作人员的实验技能要求较高，检测成本也较高。可见，该方法只能在具备必要设备和条件的实验室中进行，而难以在乳粉的存放或销售等流通环节中对其蛋白质含量进行现场的快速测定。这给乳粉产品的质量监测工作造成了极大的制约和不便，不利于对劣质乳粉的查剿。
另一种常用的蛋白质含量的测定方法是双缩脲法。众所周知，双缩脲与碱及少量硫酸铜溶液作用生成紫红色的配合物，此反应称为双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有肽键(-CO-NH-)，与双缩脲结构相似，故也能呈现此反应而生成紫红色配合物。并且在一定范围内其颜色深浅与蛋白质含量成正比。据此可用吸收光度法来测定蛋白质含量。或者可以制作系列比色管，以比色法来测定蛋白质含量。但常规的双缩脲法需要在每次测定前预先配制标准蛋白质含量比色管系列或用分光光度计测定一系列标准蛋白质溶液的吸光度值绘制“蛋白质浓度-吸光度”的标准曲线。并且在测定乳粉样品中的蛋白质含量时步骤也较为繁琐首先需要精确称取一定的乳粉样品、定容、取一定量溶液加入双缩脲试剂、混匀；然后离心取上清液与标准比色管系列进行比色，或者用分光光度计测定吸光度值后，对照标准曲线得到对应的蛋白质含量。可见，常规双缩脲法同样存在操作繁琐、所需仪器设备多、耗时的缺点。因此该方法也不适合对乳粉产品中的蛋白质含量进行现场快速检测。
目前，乳粉产品种类繁多，产品质量也鱼龙混杂。特别在一些小城镇和乡村，由于缺乏简便、有效的检测手段，一些劣质乳粉已经危害到人们，特别是婴幼儿的身体健康，有的还造成了严重的后果。因此，有必要开发一种适于现场快速检测乳粉蛋白质含量的检测试剂盒。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒，该试剂盒包括乳粉蛋白质含量标准比色卡、取样器、透明刻度容器和双缩脲显色液。
在该试剂盒中，所述乳粉蛋白质含量标准比色卡是一系列含有乳粉的标准蛋白质溶液与双缩脲试剂混合后溶液颜色的色带。
并且该试剂盒中，所述混合后的溶液中蛋白质的浓度在0-2mg/ml的范围内。
该试剂盒中的乳粉蛋白质含量标准比色卡具有至少2条以上的色带，优选具有3-6条色带。
该试剂盒中的取样器具有容纳固定量的乳粉的部件，该部件具有的内容积在可容纳10-400mg乳粉的范围内变化，优选可容纳30-80mg乳粉的范围内变化。
本发明的试剂盒可进一步包括一种或多种选自如下组中的物品试管架、试管和滴管。
本发明的另一个目的在于提供一种制造上述乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒的方法，该方法包括一个制造乳粉蛋白质含量标准比色卡的步骤，其中包括以下步骤用已知蛋白质含量的乳粉和标准蛋白质试剂配制含有乳粉的标准蛋白质溶液系列；按照一定比例混合上述标准蛋白质溶液和双缩脲试剂以获得混合溶液；对混合溶液拍照；和用图像处理软件处理所得的照片，得到色带并输出。
该方法中所述混合溶液中的蛋白质浓度在0-2mg/ml的范围内。
本发明的乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒是一种半定量检测试剂盒。该试剂盒装备简单，便于携带。而且检测中不需其它辅助仪器和设备，对检测环境也没有特殊要求，检测成本低，检测时间短。特别是采用该试剂盒检测乳粉中蛋白质含量的方法操作简便，对检测人员没有特殊要求。采用该试剂盒可以当场了解被检产品的蛋白质含量是否与标称含量相符，特别是是否符合国家乳粉制品标准中规定的蛋白质含量。这就为商品检验人员对乳粉市场进行广泛、经常的监测和进行现场执法提供了可能。
具体实施例方式
本发明提供了一种乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒，该试剂盒包括乳粉蛋白质含量标准比色卡、取样器、透明刻度容器和双缩脲显色液。
本发明的试剂盒是基于双缩脲法检测蛋白质含量的原理，并结合乳粉产品的特点而设计的。
乳粉中除了含有蛋白质外，还含有脂类、糖类、维生素、矿物质等多种成分。其水溶液为乳浊液，无法直接测定吸光度或进行比色。因此，采用双缩脲法时，需要向含有乳粉样品的双缩脲溶液中加入四氯化碳，振荡后静置一段时间，然后取上清液进行离心。再用离心后的上清液进行检测。这样不仅步骤繁琐、耗时，而且还需要用到四氯化碳、离心机等试剂和设备。
为避免常规双缩脲法检测中存在的这些繁琐步骤，以及试剂、设备，本发明采用已知蛋白质含量的乳粉来配制标准蛋白质溶液，并制作比色卡。这样比色卡中就掺入了乳粉的乳浊液的白色色调，从而使本发明的比色卡与实际乳粉样品溶液的背景色泽、色调一致，利于检测者用肉眼直接比色判断，大大简化了检测中为获得蛋白质上清液而进行的繁琐步骤。
根据国家标准GB 5410-1999《全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉》中的规定，全脂乳粉中的蛋白质的含量应大于或等于乳粉中非脂乳固体的34wt％，脱脂乳粉中的蛋白质的含量应大于或等于乳粉中非脂乳固体的34wt％，全脂加糖乳粉中的蛋白质的含量应大于或等于乳粉的18.5wt％，全脂调味乳粉中的蛋白质的含量应大于或等于乳粉的16.5wt％，脱脂调味乳粉的蛋白质的含量应大于或等于乳粉的22.0wt％。在国家标准GB10765-1997《婴儿配方乳粉I》和GB 10765-1997《婴儿配方乳粉II、III》中规定，蛋白质含量分别为≥18.0wt％和12.0wt％-18.0wt％。
据此，以待测乳粉样品的总重量为100wt％计，本发明的乳粉蛋白质含量标准比色卡所表示的蛋白质含量范围设定为0-35wt％。根据现行的国家标准，各种乳粉中的蛋白质含量均在12wt％以上，低含量出现的可能性较小，而多数乳粉产品的蛋白质含量在20wt％左右。因此，优选的检测范围为5-25wt％。也可以将检测范围设定为10-20wt％，因为在该范围内，根据本发明的方法，颜色的变化对于肉眼来说最容易分辨。
此外，在常规的双缩脲法中，通常将含有蛋白质的样品溶液与双缩脲试剂按照一定比例，例如以1∶4的比例进行混合。混合后的溶液中蛋白质的浓度在0-约2mg/ml的范围内，这时混合溶液的颜色变化与蛋白质浓度呈线性关系。因此本发明的标准比色卡中每条色带所对应的蛋白质的实际浓度也在0-2mg/ml的范围内。
本发明的比色卡的色带数目至少为2条，最多可直至形成连续的色带。从降低制造成本和实际使用效果的角度考虑，优选的色带数目为3-6条。
同时，为了进一步简化检测步骤，降低检测成本，简化试剂盒的装备，根据一定体积乳粉的重量是一定的原理，本发明的试剂盒中设置了取样器以代替天平等称量设备。该取样器具有可容纳固定量乳粉的部件，其所具有的内容积可盛取与预先设计的取样量相一致乳粉样品。
如上所述，在样品与双缩脲试剂的混合溶液中，蛋白质的浓度应在0-2mg/ml范围内。因此，样品的取样量应与混合溶液的体积相适应，使其中的蛋白质含量落在0-2mg/ml的范围内。如果混合溶液的体积为4-50ml时，乳粉样品的取样量相应地在约10-400mg的范围内变化。优选为30-80mg。如果取样量低于10mg，将会增大检测误差。如果取样量超过400mg，则还需要相应地增大反应体系以保证体系中的蛋白质浓度落在线性范围内。但是对于大的反应体系必须配备较大的反应容器，这将使本发明的试剂盒具有较大的体积而不方便携带。因此，虽然可以采用更大的取样量，但不是本发明的试剂盒所优选的。
根据上述的取样原则，本发明的取样器的可容纳固定量乳粉的部件所具有的内容积也相应的可容纳10-400mg，优选30-80mg的乳粉。该取样器通常为勺形，还可以为任何合适的形状，比如带有手柄的中空半球体、圆柱体、圆锥体、棱柱体等。取样器可用任何合适的材料制成，比如塑料、金属、玻璃等。
本发明的试剂盒还包括用于进行显色反应的带有刻度的透明容器，用于量取双缩脲显色液，同时也作为反应容器，使双缩脲显色液与乳粉样品进行显色反应。该容器的容积应便于操作和携带，其刻度应与取样量相适应。当然，带有刻度的容器也可以用量筒和不带有刻度的容器，如试管等的组合来代替。所述容器可以为任何合适的材料制成，比如玻璃、透明塑料等。从耐用性方面考虑，优选采用透明塑料容器。
另外，本发明的试剂盒还包括双缩脲显色液。该显色液可按照常规双缩脲法中的方法进行配制，然后适当稀释即可直接用于检测。
为了进一步方便操作，本发明的试剂盒可进一步包括试管架、滴管等辅助器材。此外，该试剂盒还可配备使用说明书，以指导操作人员正确操作和作出准确判断。
本发明的乳粉蛋白质快速检测试剂盒的制造方法包括制造标准比色卡的步骤，其中包括以下步骤用已知蛋白质含量的乳粉和蛋白质试剂配制含有乳粉的标准蛋白质溶液系列；按照一定比例混合上述标准蛋白质溶液和双缩脲试剂以获得混合溶液；对混合溶液拍照；和用图像处理软件处理所得的照片，得到色带并输出。
为了得到具有真实乳粉溶液背景的比色卡，需要采用已知蛋白质含量的乳粉来配制标准溶液。用凯氏定氮法精确测得某乳粉中的蛋白质含量。然后，用该乳粉和标准蛋白质试剂配合使用，配成含有乳粉的标准蛋白质溶液系列。例如使该系列标准溶液中的蛋白质浓度在0-10mg/ml的范围内分布。
双缩脲试剂是预先制备好的，可采用常规的方法制备。然后，分别将一定量的双缩脲试剂与以上配制的标准蛋白质溶液混合，例如以标准蛋白质溶液与双缩脲试剂以1∶3或1∶4倍的比例混合。选取适当的混合比例，使混合溶液中的蛋白质含量在0-2mg/ml的范围内。混匀后静置2-10分钟。然后，用相机照相，并将图片输入计算机。方便起见可用数码相机拍照。然后对照混合溶液的颜色，用photoshop、fireworks等图像处理软件对各照片进行处理，得到色带。为方便读取测得的乳粉中蛋白质含量，还可将每条色带所代表的实际蛋白质浓度折算为对应的乳粉样品中的蛋白质含量，并标在色带下面。最后，彩色打印输出所得色带，即得到本发明试剂盒的标准比色卡。为防止使用中色带被污染或损坏，可对比色卡进行塑封。
制备标准比色卡所用的乳粉种类对比色卡的色调影响不大，肉眼难以分辨由乳粉种类不同带来的变化。
将制得的乳粉蛋白质含量标准比色卡、双缩脲显色液、取样器、透明刻度容器以及可选配的其它物品，例如说明书、量筒、试管架、试管、滴管等装在一个盒子里就组成了本发明的乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒。
采用本发明的乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒，可在任何环境下快速测定乳粉样品中蛋白质含量。
具体的做法是用取样器取预定量的乳粉样品于透明容器中，向该容器中加入预定量的双缩脲显色液并混匀，然后将所得溶液与标准比色卡对照，即可读取比色卡上对应颜色的蛋白质含量。
当乳粉产品的标称蛋白质含量高于比色卡的检测范围时，可采用2倍稀释法测得1/2的蛋白质含量，再乘以2即可。具体做法是取2倍预定量的双缩脲显色液，用取样器量取乳粉样品并加入显色液中，充分混匀，静置几分钟，然后与标准比色卡对照，将读数乘以2即得到乳粉样品中的蛋白质含量。或者取1份预定量的双缩脲显色液，用取样器量取乳粉样品并加入显色液中，充分混匀，然后用量筒量取适量的溶液，再加入同等体积的显色液混合，与标准比色卡对照，将读数乘以2即得到乳粉样品中的蛋白质含量。
通常，乳粉产品中的蛋白质含量应大于10wt％，低于35wt％。对于检测值低于10wt％的产品，可以暂列为不达标的可疑劣质产品，先期采取必要的措施后，再用国标中规定的凯氏定氮法进行进一步精确测定。这样就可以防止检测期间劣质产品的进一步流通，或不法分子逃逸。
以下结合实施例具体说明本发明的乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒，其制备方法以及其检测方法，但不是对本发明的限制。
实施例1制备包括6色带比色卡的试剂盒设定乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒中的比色卡共有6个色带，分别代表的蛋白质浓度为0、1.5、3.0、4.5、6.0和7.5mg/ml；乳粉样品的取样量为30mg，最终溶液体积为4ml；则比色卡对应的乳粉样品的蛋白质含量为0、5、10、15、20和25wt％。
标准比色卡的制作首先配制10％氢氧化钠溶液备用。
其次，配制双缩脲试剂。称取1.5g硫酸铜(CuSO4·5H2O，分析纯，购自北京化工厂)和6.0g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O，分析纯，购自北京化学试剂公司)，用500ml水溶解，然后在搅拌下加入300ml 10％氢氧化钠溶液，最后用蒸馏水稀释到1000ml，储存于塑料瓶中。
双缩脲试剂可长期使用，密闭储存，室温下可保存3-6个月，4℃可保存1年，若出现沉淀则不能使用。
然后，用凯氏定氮法精确测得某乳粉中的蛋白质含量为24.38wt％。准确称取一定量的该乳粉，配成1.5mg/ml的乳粉标准蛋白质溶液。然后分别称取一定量的牛血清白蛋白(购自Roche公司)用上述乳粉标准蛋白质溶液依次配制成总蛋白质含量为3.0、4.5、6.0和7.5mg/ml标准蛋白质溶液。以蒸馏水作为空白，形成梯度为0、1.5、3.0、4.5、6.0和7.5mg/ml的标准蛋白质溶液系列。分别取1毫升标准蛋白质溶液注入6只试管中，加入以上配制的3毫升双缩脲试剂，充分混匀，静置2分钟，用奥林巴斯U600数码相机拍照，将图片输入计算机。对照上述6个标准溶液，用photoshop软件处理图片，得到6条分别与标准溶液颜色一致的色带。在6条色带下标明蛋白质含量值为0、5、10、15、20、25(g/100g乳粉样品)。彩色打印输出该比色卡。
制备试剂盒中的双缩脲显色液将3份上述配制的双缩脲试剂与1份蒸馏水混合，装入密封性能良好的塑料瓶中，作为试剂盒中的双缩脲显色液。
配制其它物品30mg取样器一个，其容纳样品的部件为中空的半球体，带有一个长的手柄，由塑料制成；刻度塑料试管若干，均在2ml和4ml处进行标示；试管架一个；使用说明书一份。
实施例2制备3色带比色卡的试剂盒设定乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒中的比色卡共有3个色带，分别代表的蛋白质浓度为4.0、6.0和8.0mg/ml；乳粉样品的取样量为80mg，最终显色溶液体积为10ml；则比色卡对应的乳粉样品的蛋白质含量为10、15和20wt％。
标准比色卡的制作按照实施例1中的方法配制双缩脲试剂备用。
然后，准确称取一定量的已知蛋白质含量为24.38wt％的乳粉，配成4.0mg/ml的乳粉标准蛋白质溶液。然后分别称取一定量的牛血清白蛋白(购自Roche公司)用上述乳粉标准蛋白质溶液依次配制成总蛋白质含量为6.0和8.0mg/ml标准蛋白质溶液。形成梯度为4.0、6.0和8.0mg/ml的标准蛋白质溶液系列。分别取2毫升标准蛋白质溶液注入3只试管中，加入以上配制的8毫升双缩脲试剂，充分混匀，静置2分钟，用奥林巴斯U600数码相机拍照，将图片输入计算机。对照上述3个标准溶液，用photoshop软件处理图片，得到3条分别与标准溶液颜色一致的色带。在3条色带下标明蛋白质含量值为10、15、20(g/100g乳粉样品)。彩色打印输出该比色卡并进行塑封。
制备试剂盒中的双缩脲显色液将4份上述配制的双缩脲试剂与1份蒸馏水混合，装入密封性能良好的塑料瓶中，作为试剂盒中的双缩脲显色液。
配制其它物品80mg取样器一个，其容纳样品的部件为中空的圆锥体，带有一个长的手柄，由不锈钢制成；10ml的量筒一个；25ml的试管若干；滴管若干；试管架一个；使用说明书一份。
实施例3制备4色带比色卡的试剂盒设定乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒中的比色卡共有4个色带，分别代表的蛋白质浓度为4.0、6.0、8.0和10.0mg/ml；乳粉样品的取样量为160mg，最终显色溶液体积为25ml；则比色卡对应的乳粉样品的蛋白质含量为10、15、20和25wt％。
标准比色卡的制作按照实施例1中的方法配制双缩脲显色液备用。
然后，准确称取一定量的已知蛋白质含量为24.38wt％的乳粉，配成4.0mg/ml的乳粉标准蛋白质溶液。然后分别称取一定量牛血清白蛋白(购自Roche公司)用上述乳粉标准蛋白质溶液依次配制成总蛋白质含量为6.0、8.0和10.0mg/ml标准蛋白质溶液。形成梯度为4.0、6.0、8.0和10.0mg/ml的标准蛋白质溶液系列。分别取5毫升标准蛋白质溶液注入4只试管中，加入以上配制的20毫升双缩脲试剂，充分混匀，静置2分钟，用奥林巴斯U600数码相机拍照，将图片输入计算机。对照上述4个标准溶液，用photoshop软件处理图片，得到4条分别与标准溶液颜色一致的色带。在4条色带下分别标明蛋白质含量值为10、15、20和25(g/100g乳粉样品)。彩色打印输出该比色卡并进行塑封。
制备试剂盒中的双缩脲显色液将4份上述配制的双缩脲试剂与1份蒸馏水混合，装入密封性能良好的塑料瓶中，作为剂盒中的双缩脲显色液。
配制其它物品160mg取样器一个，其容纳样品的部件为中空的半球体，带有一个长的手柄，由塑料制成；50ml容量的透明塑料管若干，每5ml处进行标示，标示到25ml；使用说明书一份。
实施例4用实施例1的试剂盒检测乳粉样品的蛋白质含量从商场购得不同品牌、不同种类的乳粉产品共5种，分别编号为A全脂甜乳粉、B全脂乳粉、C加锌乳粉、D婴儿配方乳粉、E全脂甜乳粉。用实施例1中制造的试剂盒检测这5种乳粉产品的蛋白质含量。
用刻度试管量取4毫升双缩脲显色液，然后用取样器取一平勺乳粉样品加入试管中，充分混匀，静置2分钟，然后与乳粉蛋白质含量标准比色卡对照。结果如下表1。
表1实施例5用实施例2的试剂盒检测乳粉样品的蛋白质含量用实施例2中制造的试剂盒检测上述实施例4中的5种乳粉产品的蛋白质含量。
用量筒量取10毫升双缩脲显色液加入试管中，然后用取样器取一平勺乳粉样品加入试管中，充分混匀，静置2分钟，然后与乳粉蛋白质含量标准比色卡对照。由于B样品的标称含量超过了比色卡的测量范围，因此采用2倍稀释的方法。用量筒量取10毫升双缩脲显色液加入试管中，然后用取样器取一平勺乳粉样品加入试管中，充分混匀。量取5ml的混合液于另一试管中，再加入5ml显色液混匀，静置2分钟，然后与乳粉蛋白质含量标准比色卡对照后将读数乘2即为B样品的蛋白质含量。结果如下表2。
表2对比例1用凯氏定氮法检测乳粉样品的蛋白质含量用凯氏定氮法测定上述实施例4中的5种乳粉样品中的蛋白质含量。
所需的主要仪器设备包括凯氏烧瓶(500ml)、定氮蒸馏装置、分析天平、高温炉、容量瓶、酸性滴定管、量筒、通风柜等所用试剂主要有浓硫酸、硫酸铜、硫酸钾、40％氢氧化钠溶液、4％硼酸吸收液(称取20g硼酸溶解于500ml热水中，摇匀备用)、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂(5份0.2％溴甲酚绿的乙醇溶液与1份0.2％甲基红乙醇溶液混合均匀)、0.1000mol/l盐酸标准溶液等。所用试剂均为分析纯，购自北京化学试剂公司。
具体检测步骤如下分别准确称取样品A、B、C、D、E各0.2g，小心移入干燥洁净的500ml凯氏烧瓶中，然后加入研细的硫酸铜0.5g、硫酸钾10g和浓硫酸20ml，轻轻摇匀后，按装消化装置，于凯氏瓶口放一小漏斗，并将其以45°斜支于有小孔的石棉网上。用电炉以小火加热，待内容物全部炭化，泡沫停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至液体变蓝绿色透明后，再继续加热微沸30min。冷却后，小心加入100ml蒸馏水，冷却至室温，转入200ml容量瓶中，定容。
然后用20ml移液管取20ml加入蒸馏烧瓶内，加入100ml蒸馏水，加入玻璃珠数粒以防蒸馏时爆沸。连好蒸馏装置，塞紧瓶口，冷凝管下端插入吸收瓶液面下(瓶内预先装入50ml 14％硼酸溶液及混合指示剂2-3滴)。放松夹子，通过漏斗加入70-80ml 40％氢氧化钠溶液，并摇动蒸馏烧瓶，至瓶内溶液度为深蓝色，或产生黑色沉淀，再加入100ml蒸馏水(从漏斗中加入)，夹紧夹子，加热蒸馏，至氨全部蒸出(馏液约250ml即可)，将冷凝管下端提离液面，用蒸馏水冲洗管口，继续蒸馏1min，用表面皿接几滴馏出液，以奈氏试剂检查，如无红棕色物生成，表示蒸馏完毕，即可停止加热。
将上述吸收液用0.1000mol/l盐酸标准溶液直接滴定至由蓝色变为微红色即为终点，记录盐酸溶液用量，同时做一份试剂空白(除不加样品外，从消化开始操作完全相同)作为对照，记录空白试验消耗盐酸标准溶液的体积。
按照下式计算结果 其中C为盐酸标准溶液的浓度(mol/l)；
V1为滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶液体积(ml)；V2为滴定空白吸收液时所消耗的盐酸标准溶液体积(ml)；M为样品的质量(g)；M氮为氮的摩尔质量(14.01g/mol)；F为氮换算为蛋白质的系数6.38。
结果如下表3所示
表3对比例2；用双缩脲法检测乳粉样品的蛋白质含量用常规双缩脲法测定上述实施例4中的5种乳粉样品中的蛋白质含量。
所用主要仪器有分光光度计、离心机(4000rpm)、分析天平、容量瓶、纳氏比色管等。
主要试剂有10％氢氧化钠溶液、双缩脲试剂、四氯化碳等。以上试剂均为分析纯，购自北京化学试剂公司。
具体检测步骤为分别精确称取牛血清白蛋白40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg和110mg，放入8支50ml纳氏比色管中，然后各加入1ml四氯化碳，再用双缩脲试剂准确稀释至50ml，振摇10min，静置1h，取上层清液离心5min，取离心分离后的透明液于比色皿中，在560nm波长下以蒸馏水作参比液调节仪器(722型分光光度计，上海精密仪器仪表有限公司)零点并测定各溶液的吸光度A，以蛋白质质量为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。
准确称取乳粉样品适量，使得其中蛋白质的量在40～110mg之间。加入50ml纳氏比色管中，加1ml四氯化碳，按上述步骤显色后，在相同条件下测定其吸光度A。用测得的A值在标准曲线上即可查得被测样品中的蛋白质的质量(mg)，进而由此求得乳粉样品中的蛋白质含量。
按照下式计算结果蛋白质含量(g/100g)＝(C/M)×100其中C为由标准曲线上查得的蛋白质质量(mg)；M为所称取的乳粉样品质量(mg)。
结果如下表4所示
表4对以上实施例3、4以及对比例1、2所测得的乳粉样品中蛋白质含量的结果与乳粉样品的标称蛋白质含量在以下表5中进行对比。
表5对采用本发明的乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒的检测方法、凯氏定氮法和常规双缩脲法所用的仪器设备、试剂、具体步骤、检测时间、人员和场地要求以及检测结果等进行比较(见表6)。
表6
由以上对比结果可以看出，本发明根据双缩脲法原理，结合乳粉检测的特点进行改进，提供了一种乳粉蛋白质含量快速检测试剂盒。本发明的试剂盒具有使用简便、检测快捷以及便于携带的特定。采用本发明试剂盒的检测效率较常规双缩脲法提高6倍以上，较凯氏定氮法提高20倍以上，适用于现场对乳粉蛋白质含量的快速检测。本发明的检测试剂盒可对乳粉产品中的蛋白质含量进行半定量的检测，能迅速检测出蛋白质含量明显与标称值不符，以及蛋白质含量低于国家标准的可疑产品。便于商品检验人员和工商执法人员迅速采取措施，防止可疑产品继续流通。对维护乳粉产品的正常市场秩序、保护消费者的利益有积极的作用。
权利要求
1.一种乳粉蛋白质含量检测试剂盒，该试剂盒包括乳粉蛋白质含量标准比色卡、取样器、透明刻度容器和双缩脲显色液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述乳粉蛋白质含量标准比色卡是一系列含有乳粉的标准蛋白质溶液与双缩脲试剂混合后溶液颜色的色带。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述混合后的溶液中蛋白质的浓度在0-2mg/ml的范围内。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述乳粉蛋白质含量标准比色卡具有至少2条以上的色带。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述乳粉蛋白质含量标准比色卡具有3-6条色带。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其中所述取样器具有容纳固定量的乳粉的部件，该部件具有的内容积在可容纳10-400mg乳粉的范围内变化。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中所述部件具有的内容积在可容纳30-80mg乳粉的范围内变化。
8.根据权利要求1-7中任意一项所述的试剂盒，其中该试剂盒进一步包括一种或多种选自如下组中的物品试管架、试管和滴管。
9.一种制造权利要求1-8中任意一项所述的试剂盒的方法，该方法包括一个制造乳粉蛋白质含量标准比色卡的步骤，其中包括以下步骤用已知蛋白质含量的乳粉和标准蛋白质试剂配制含有乳粉的标准蛋白质溶液系列；按照一定比例混合上述标准蛋白质溶液和双缩脲试剂以获得混合溶液；对混合溶液拍照；和用图像处理软件处理所得的照片，得到色带并输出。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述混合溶液中的蛋白质浓度在0-2mg/ml的范围内。
全文摘要
本发明公开了一种乳粉蛋白质含量检测试剂盒，该试剂盒包括乳粉蛋白质含量标准比色卡、取样器、透明刻度容器和双缩脲显色液。本发明还公开了该试剂盒的制造方法，其中包括一个制造乳粉蛋白质含量标准比色卡的步骤，该步骤包括用已知蛋白质含量的乳粉和标准蛋白质试剂配制含有乳粉的标准蛋白质溶液系列；向上述系列标准蛋白质溶液中加入双缩脲试剂获得混合溶液；对混合溶液拍照；和用图像处理软件处理照片，得到色带并输出。该试剂盒装备简单，便于携带。用于检测乳粉蛋白质含量时不需其它辅助仪器和设备，检测成本低，检测时间短。其检测方法操作简便，对检测人员没有特殊要求。为商品检验人员对乳粉市场进行广泛、经常的监测和进行现场执法提供了可能。
文档编号G01N21/25GK101034065SQ20061005699
公开日2007年9月12日 申请日期2006年3月7日 优先权日2006年3月7日
发明者桑华春 申请人:桑华春