专利名称：：药品的裂解气相色谱分析法的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种药品的分析方法，具体而言是一种应用裂解气相色谱来鉴别药品的方法。
背景技术：
：目前，药品中假冒伪劣产品在巿场上非常普遍，情况复杂，有以假充真的，以次充好的等等。药品的优劣真伪直接关系到人们的生命安全，因此药品的质量评价非常重要。而药品检验主要依据法定标准对成品进行检验。对于一些具有合法身份，又熟悉生产工艺和检验技术的专业造假者来说，很容易钻检验标准的空子。如"梅花K"案中在黄柏胶囊中添加盐酸四环素，部分壮阳药中非法加入"枸缘酸西地那非"，1998年抗洪救灾期间发生的假氟哌酸胶囊案等等，都是一些合法企业在法定处方中掺入其它成分，以降低成本，牟取暴利。现在，识别假药的基本方法主要是应用多种分析手段和方法，综合各种检验结果，通过与已知对照样品参数的比较，对假药进行识别。因此，需要消耗的时间很长，并且需要样品的量相对较多。当样品来源困难、量小，并且要求快速鉴别时，这种鉴别方法就出现了很多问题。因此，建立一种通用、简便、快速的鉴别定性分析方法对于药品的真伪鉴别具有重要意义。裂解气相色谱分析方法因样品前处理简单、用量少、简便快速而受到重视，在药学领域中已广泛地应用于蛋白质、微生物的鉴定，已被证明是一种行之有效的方法。比起其它常规检验分析方法如HPLC、GC、TLC等，裂解气相色谱法具有适用于各种样品分析，预处理简单，成本低，样品用量少、灵敏度高，分析速度快等优点。但是，在药品的检测领域还没有一个可供参考和行之有效的方法。
发明内容(一)要解决的技术问题本发明的目的是公开一种药品的裂解气相色谱分析方法，用于快速准确地鉴别不同的药品。(二)技术方案为实现上述目的，本发明的具体技术方案是1.将药品溶解在水的有机溶剂中；2.应用裂解气相色谱法对药品进行测定，获取药品的裂解气相色谱3.通过步骤l、2分别获取待测样品和标准品的裂解气相色谱图谱，并通过相似度分析来鉴别样品。并且可以通过步骤1和2，建立标准药品裂解气相色谱数据库(以下简称数据库)，将待测药品的裂解气相色谱图谱与数据库中的图谱相比对分析即可鉴别药品。在步骤(l)中，所述水的有机溶剂，其中水的含量按体积比为0~5:10;所述的有机溶剂为常应用于药品溶解的溶剂，且优选为选自以下组中乙腈、氯苯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、甲醇、甲酰胺、四氯化碳、吡啶、甲苯、丁酮、乙醚、乙酸、丙酮、甲基环基烷、甲氧基苯、正丁醇、异丙基苯、乙醇、乙酸乙酯、甲酸、异辛烷、N，N-二甲氧基乙酰胺、N，N-二甲氧基甲酰胺、以及其混合物；不易溶解的药品可用超声波助溶。在步骤(2)中，裂解气相色谱法中药品的裂解温度范围为300°C~1000°C,裂解压力范围为10.0psi~50.0psi;气相色谱分析条件中的色谱柱，优选为选自以下组中SPB-1、DB-624或HP-FFAP，其中色谱柱的升温速率范围为3~20°C/min。上述的数据库可以包括两个部分，一个是两强峰数据库，它是以样品中的最强色谱峰作为参比，计算出样品中最强的两个组分的相对保留值，并将两组分的保留时间按由小到大的顺序依次排列，依次建立起来的数据库；另一个是全谱数据库，它是以四氢化萘作为外标，计算出样品中各组分的相对保留值和相对峰面积比值，并将样品中各组分的相对保留值CC按由小到大的顺序依次排列，以此建立裂解气相指紋图谱数据库。目前已经建立的数据库中包括青霉素类和头孢类青霉素类青霉素钾氨苄西林阿莫西林青霉素V钾美洛西林氯唑西林仑氨西林苯唑西林舒他西林氟氯西林哌拉西林头孢类头孢氨苄头孢羟氨苄头孢拉定头孢他啶头孢克洛头孢噻吩头孢哌酮头孢噻肟头孢呋辛酯头孢唑啉头孢硫脒本发明中所用的相似度分析软件是中药色谱指紋图谱相似度评价系统(2004A版，国家药典委员会)，其计算原理为夹角余弦。(三)有益效果本发明公开了药品的裂解气相色谱分析法，其样品的用量少，可以直接使用任何物理形态的样品进行测定，避免了因预处理可能带来的分析失真或其他信息的丢失，搡作简单，灵敏度高，为药品的快速检测、鉴别提供了行之有效的方法。图l是不同厂家青霉素钠指紋图谱；图2是不同厂家头孢氨苄指紋图谱；图3是不同厂家头孢拉定指紋图谱；图4是不同厂家氨节西林钠指紋图谱；图5是不同厂家阿莫西林钠指紋图谱；图6是样品041001的指紋图谱；图7是样品041002的指紋图谱；图8是样品041003的指紋图谱。具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不用来限制本发明所要保护的范围。实施例中所用到的抗生素对照品(标准品)均为中国药品生物制品检定所提供。实施例l注射用粉针剂青霉素钠注射用青霉素钠，标准品华北制药股份有限公司石家庄制药集团有限公司山东瑞阳制药有限公司溶剂水的甲醇溶液，其中水与甲醇的体积比为2:8将药品溶解在上述溶剂中，配制成lmg/ml的溶液作为供试品溶液。裂解气相色谱实验条件如下载气氮气，流速2.0ml/min;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);氢气流速30ml/min;空气流速300ml/min;分流比l:1，进样量2pl。色谱柱HP-FFAP,30mx0.32mm，0.25|am,固定液为聚乙二醇-硝基对苯二甲酸修饰；程序升温起始温度60°C;保持时间8min升温速率10°C/min终点温度240°C;保持时间20min进样口温度240°C;检测器温度260°C裂解器温度300°C裂解压力1《0psi其裂解气相色谱指紋图谱如图1所示，相似度结果如表1所示。其中，Sl为标准图谱；S2.山东；S3.石家庄；S4.华北。表i注射用青霉素钠相似度结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表l中每一个数值表示为相交的两者之间的相似度，如0.975就表示为Sl与S2之间的相似度，而其中1.000表示同一张图谱进行比较。从表中可以看出三个厂家的图谱与标准图谱之间的相似性很好，相似度值均在0.95以上，认为它们与标准图谱对应的物质为同一物质，即都是青霉素。实施例2片剂头孢氨节头孢氨苄，标准品北京华丰制药公司江西清江制药厂唐山天恩药业有限公司溶剂水的甲醇溶液，其中水与甲醇的体积比为1:2将上述片剂研细，称取适量，用上述溶剂溶解，再用0.45[mi滤膜过滤，取续滤液。裂解气相色谱实验条件如下载气氮气，流速2.0ml/min;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);氢气流速30ml/min;空气流速300ml/min;分流比l:1，进样量2(^1。色谱柱SPB-1，30mx0.32mm,0.25pm,固定液为聚乙二醇-硝基对苯二甲酸修饰；程序升温起始温度60°C;保持时间8min升温速率3°C/min终点温度240°C;保持时间20min进样口温度240°C;检测器温度260°C裂解器温度300°C裂解压力10.0psi其裂解气相色谱指紋图谱如图2所示，相似度结果如表2所示。其中，S5为标准图谱；S6.江西；S7.唐山；S8.北京。表2头孢氨苄片相似度结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>从表2中看出，样品与标准图谱相似度值都在0.8以上，相似性较好。其中，与对照品相似度最高的是S6。实施例3胶囊剂头孢拉定头孢拉定，标准品哈药集团制药总厂福建古田药业有限公司山东鲁抗医药股份有限公司鲁原分公司溶剂水的甲醇溶液，其中水与甲醇的体积比为1:5头孢拉定，标准品哈药集团制药总厂福建古田药业有限公司山东鲁抗医药股份有限公司鲁原分公司称取胶囊内容物适量，用上述溶剂溶解，再用0.45fim滤膜过滤，取续滤液。载气氮气，流速2.0ml/min;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);氢气流速30ml/min;空气流速300ml/min;分流比l:1，进样量2^1。色谱柱HP-FFAP，30mx0.32mm，0.25pm,固定液为聚乙二醇-硝基对苯二甲酸修饰；程序升温起始温度60°C;保持时间8min升温速率20°C/min终点温度240°C;保持时间20min进样口温度240°C;检测器温度260°C裂解器温度IOO(TC裂解压力50.0psi其裂解气相色谱指紋图谱如图3所示，相似度结果如表3所示。其中，S9为标准图谱；S10.福建；Sll.哈药；S12.山东。表3头孢拉定胶囊相似度结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>从表3中看出，样品与标准的图谱相似度值都在0.9以上，相似性较好。其中，与对照品相似度最高的是S12。试验例4:注射用粉针剂氨节西林钠氨节西林钠，标准品华北制药股份有限公司福建汇天生物药业有限公司溶剂水的甲醇溶液，其中水与甲醇的体积比为1:3将药品溶解在上述溶剂中，配制成lmg/ml的溶液作为供试品溶裂解气相色谱实验条件如下载气氮气，流速2.0ml/min;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);氢气流速30ml/min;空气流速300ml/min;分流比l:1,进样量2^1。色谱柱HP-FFAP，30mx0.32mm,0.25pm,固定液为聚乙二醇-硝基对苯二甲酸修饰；程序升温起始温度60°C;保持时间8min升温速率15°C/min终点温度240°C;保持时间20min进样口温度240°C;检测器温度260°C裂解器温度500°C裂解压力20.0psi其裂解气相色谱指紋图谱如图4所示,相似度结果如表4所示。其中，S13.为标准图谱；S14.华北；S15.福建汇天。表4注射用氨节西林钠相似度结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表4可知，S14与标准品更接近。试验例5:注射用粉针剂阿莫西林钠阿莫西林钠，标准品海南省海灵制药厂哈药集团制药总厂溶剂水的甲醇溶液，其中水与甲醇的体积比为1:9将药品溶解在上述溶剂中，配制成lmg/ml的溶液作为供试品溶液。裂解气相色谱实验条件如下载气氮气，流速2.0ml/min;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);氢气流速30ml/min;空气流速300ml/min;分流比l:1,进样量2^1。色谱柱HP-FFAP，30mx0.32mm,0.25pm,固定液为聚乙二醇-硝基对苯二甲酸修饰；程序升温起始温度60°C;保持时间8min升温速率18°C/min终点温度240°C;保持时间20min进样口温度240°C;检测器温度260°C裂解器温度650°C裂解压力30.0psi其裂解气相色谱指紋图谱如图5所示，相似度结果如表5所示。其中，S16为标准品，S17为海南，S18为哈药。表5阿莫西林钠相似度结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>从表中看出，样品与标准的图谱相似度值都在0.9以上，样品与标准之间的相似性较好。实施例6数据库的建立青霉素类裂解气相指紋图谱数据库的建立，以青霉素钾、氨苄西林和阿莫西林为例由于裂解气相色谱指紋图谱较复杂，直接比较数据量大，检索较繁复，因此，希望构建一个由初步筛选到最终确定的检索流程，即首先通过谱图中最强的两个色谱峰之间的相对保留值来进行粗筛，缩小检索范围；然后再进行全谱比较，最终确定。溶剂水的正己烷溶液，其中水与正己烷的体积比为1:3将药品溶解在上述溶剂中，配制成lmg/ml的溶液作为供试品溶液。裂解气相色谱实验条件如下载气氮气，流速2.0ml/min;检测器为氢火焰离子化检测器(FID);氢气流速30ml/min;空气流速300ml/min;分流比l:1,进样量2^1。色谱柱HP-FFAP,30mx0.32mm,0.25pm,固定液为聚乙二醇-硝基对苯二甲酸修饰；程序升温起始温度60°C;保持时间8min升温速率15°C/min终点温度240°C;保持时间20min进样口温度240°C;检测器温度260°C裂解器温度500°C裂解压力20.0psi两强峰数据库以样品中最强色谱峰为参比，计算出样品中最强的两个组分的相对保留值，并将两组分的保留时间按由小到大的顺序依次排列，以此建立两强峰数据库，见表6。表6青霉素类两强峰数据库<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>以四氢化萘作为外标，计算出样品中各组分的相对保留值和相对峰面积比值，并将样品中各组分的相对保留值OC按由小到大的顺序依次排列，以此建立裂解气相指紋图谱数据库，见表7。_表7青霉素类数据库_<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注"一"表示没有特征裂解气相色谱峰实施例7应用数据库分析药品对标示为氨苄西林钠的样品用数据库进行分析。注射用粉针剂氨节西林钠氨节西林钠，041001041002041003溶剂水的正己烷溶液，其中水与正己烷的体积比为1:3将药品溶解在上述溶剂中，配制成lmg/ml的溶液作为供试品溶液。裂解气相色谱实验条件同实施例6。其裂解气相色谱指紋图谱如图所示，从图中可知，样品041001图谱中没有裂解色谱峰，肯定其不是氨节西林钠；列出样品041002和041003的两强峰数据表见表1表1<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>从表1中可知，样品041003与氨节西林两强峰数据较相近，对其进行全谱比较，计算相似度，见表2表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>从表2中看出，样品041003与氨节西林的标准图谱相似性较好，可初步判断样品041003为氨苄西林。权利要求1.一种药品的裂解气相色谱分析方法，其特征在于包括如下步骤(1)将样品溶解在水的有机溶剂中；(2)应用裂解气相色谱法对药品进行测定，获取药品的裂解气相色谱指紋图谱；(3)通过步骤(1)和(2)分别获得样品和标准品的裂解气相色谱指紋图谱，并通过相似度软件分析两者的相似度。2.—种药品的裂解气相色谱分析方法，其特征是通过按权利要求l中的步骤(1)和(2)建立标准药品的裂解气相色谱指紋图谱数据库，并应用相似度分析软件将样品的裂解气相色谱指紋图谱与数据库中的相比较，鉴别药品。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的裂解气相色谱指紋图谱数据库包括以标准药品中最强色谱峰为参比，计算出药品中最强的两个组分的相对保留值，并将两组分的保留时间按由小到大的顺序依次排列，以此建立的两强峰数据库；以及，以四氢化萘作为外标，计算出样品中各组分的相对保留值和相对峰面积比值，并将样品中各组分的相对保留值cc按由小到大的顺序依次排列，以此建立的裂解气相指紋图谱全谱数据库。4.根据权利要求1或2所述的裂解气相色谱分析法，其特征在于，所述水的有机溶剂的水与有机溶剂的体积比为05:10,其中，所述有机溶剂为乙腈、氯苯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、甲醇、甲酰胺、四氯化碳、吡啶、甲苯、丁酮、乙醚、乙酸、丙酮、甲基环基烷、甲氧基苯、正丁醇、异丙基苯、乙醇、乙酸乙酯、甲酸、异辛烷、N，N-二甲氧基乙酰胺、N,N-二甲氧基甲酰胺中的任一种或多种。5.根据权利要求1或2所述的裂解气相色谱分析法，其特征在于，裂解气相色谱法中药品的裂解温度为300°C~1000°C，裂解压力为10.0psi~50.0psi,色谱柱为SPB-1、DB-624或HP-FFAP中的任一种，色谱柱的升温速率范围为3~20°C/min。全文摘要本发明提供了一种裂解气相色谱分析方法，用于药品的鉴别，其包括步骤1).将药品溶解在水的有机溶剂中；2).应用裂解气相色谱法对药品进行测定，获取药品的裂解气相色谱指纹图谱；3).通过步骤1)、2)分别获取待测样品和标准品的裂解气相色谱指纹图谱，并通过相似度分析来鉴别样品。并且，可以通过建立药品的裂解气相色谱数据库，进一步为药品的检测提供快捷的途径。本发明提供的分析方法简单且准确，为药品的快速检测、鉴别提供了行之有效的途径。文档编号G01N33/15GK101122586SQ20061008922公开日2008年2月13日申请日期2006年8月10日优先权日2006年8月10日发明者尹利辉,王志军,胡昌勤,金少鸿申请人:中国药品生物制品检定所