专利名称：一种hplc法分析分离左乙拉西坦的方法
技术领域：
本发明属涉及一种高效液相色谱法，尤其是一种分析分离左乙拉西坦及其对 映异构体的高效液相色谱法。左乙拉西坦为一种抗癫痫辅助药，分子式为C8H14N202，化学名为(S)-a-乙 基-2-氧代-l-吡咯烷乙酰胺，其结构式为该分子中含1个手性碳原子，在通过定向合成目标化合物左乙拉西坦的过程中需 要控制其对映异构体的含量。对于左乙拉西坦的对映异构体杂质，在药物合成过程当中是需要进行质量控 制的。含手性碳原子的对映异构体的分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量 控制的难点，实现左乙拉西坦及其对应异构体的分离在左乙拉西坦药物的合成和 制剂过程的质量控制方面具有现实意义。本发明的目的在于提供一种分析分离左乙拉西坦及其对映异构体杂质的高 效液相色谱方法，从而实现左乙拉西坦与其对映异构体杂质的分离测定。申请人发现，以纤维素类手性柱，以正相混合溶剂(或者加入一定比例的胺) 为流动相，可以将左乙拉西坦及其对映异构体进行有效分离，从而可以准确控制 左乙拉西坦的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分离左乙拉西坦及 其对映异构体杂质。进一步地，选用纤维素类手性柱OJ-H (DACEL250mmx4.6mm， 5pm)，可 以获得更好的分析分离效果。OJ-H (DACEL250mmx4.6mm， 5pm)纤维素类手背景技术发明内容性柱是以对甲苯基甲酸酯键合纤维素为填料。进一步地，本发明的正相溶剂选用正己烷和异丙醇的混合溶剂。本发明的方法中的流动相选用体积比为卯io~95: 5正己烷和异丙醇的混 合溶剂。本发明的方法中的流动相中的胺选用二乙胺。本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现(1) 取左乙拉西坦样品适量，用无水乙醇溶解样品，配制成每lmL含左乙 拉西坦0.1mg 0.5mg的样品溶液。(2) 设置流动相流速为0.4 1.2mL/min，检测波长为205 235 nm，最佳检 测波长为210nm，色谱柱柱温箱为20 40°C，色谱柱柱温的最佳温度为室温o(3) 取(l)的样品溶液2-50pL注入液相色谱仪，完成左乙拉西坦及其对映异 构体的分析与分离。其中高效液相色谱仪岛津LC-10ATv; ， SPD-M10Avp， SCL-10Av/ ， DGU-12A;色谱柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5pm)纤维素手性色谱柱；流动相正己烷-异丙醇=90 : 10;检测波长210nm;流速1.0mL/min;柱温室温；进样体积10pL。本发明采用纤维素类OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5nm)手性色谱柱，能 够有效的分析分离左乙拉西坦及其对映异构体；选择流动相溶解样品，确保了溶 液的稳定性；选择进样体积10pL，柱温为室温，提高了色谱峰的对称性。本发 明解决了含左乙拉西坦及其对映异构体的原料及制剂的分析与分离问题，从而确 保了左乙拉西坦及其制剂的质量可控。
图l实施例l，正己垸-异丙醇二90:10的HPLC图； 图2实施例2，正己垸-异丙醇二95:5的HPLC图；图3实施例3，正己垸-异丙醇=92.5:7.5的HPLC图4实施例4，正己烷-异丙醇-二乙胺=90:10:0.1的HPLC图。
具体实施例方式
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATv/ ， SPD-M10Av; ， SCL-10Av; ， DGU-12A; 色谱柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5pm);
流动相正己烷-异丙醇=90 : 10;
流速1.0mL/min; 柱温室温； 进样体积10pL。 检测波长210nm;
实验步骤
分别称取左乙拉西坦及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加无水 乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取左乙拉西坦其对 映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图l，图中l号峰为左乙拉西坦，2号峰为异构体，可以看 出在该条件下左乙拉西坦主峰可以和异构体完全分离开来，且左乙拉西坦主峰在 9.25min左右。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATv/ ， SPD-M10Av; ， SCL-10Av/ ， DGU-12A; 色谱柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5nm);
流动相正己垸-异丙醇=95 : 5;
流速1.0mL/min; 检测波长210nm;柱温室温； 进样体积10pL。
实验步骤
分别称取左乙拉西坦及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加无水 乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取左乙拉西坦其对 映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图2，图中l号峰为左乙拉西坦，2号峰为异构体，可以看 出在该条件下左乙拉西坦主峰可以和异构体基线分离开，且左乙拉西坦主峰在 19.06min左右。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATv; ， SPD-M10A甲，SCL-10Ayp， DGU-12A;
色谱柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5nm);
流动相正己烷-异丙醇=92.5 : 7.5;
流速1.0mL/min;
检测波长210nm;
柱温室温；
进样体积lOpL。
实验步骤
分别称取左乙拉西坦及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加无水 乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取左乙拉西坦其对 映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图3，图中l号峰为左乙拉西坦，2号峰为异构体，可以看 出在该条件下左乙拉西坦主峰可以和异构体基线分离开来，且左乙拉西坦主峰在 16.26min左右。实施例4
仪器与条件
高效液相色谱仪岛津LC-10ATvp, SPD-M10Ayp， SCL-10Av; ， DGU-12A;
色谱柱OJ國H (DACEL4.6mmx250mm， 5pm);
流动相正己烷-异丙醇-二乙胺=卯10 : 0.1;
流速1.0mL/min;
检测波长210nm;
柱温室温；
进样体积lOpL。
实验步骤
分别称取左乙拉西坦及其对映异构体各5mg，置于25mL容量瓶中，加无水 乙醇溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取左乙拉西坦其对 映异构体各5mg，分别置于2个25mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释置刻度， 摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记 录色谱图。结果见附图4，图中l号峰为左乙拉西坦，2号峰为异构体，可以看 出在该条件下左乙拉西坦主峰可以和异构体基线分离开来，且左乙拉西坦主峰在 9.75min左右。
权利要求
1. 一种高效液相色谱法分析分离左乙拉西坦及其对映异构体的方法，其特征在于采用以纤维素类手性柱，以含有或不含有有机碱的正相混合溶剂为流动相。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素类手性柱为OJ-H(DACEL250mmx4.6mm， 5|im)。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于采用正相色谱法。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的正相混合溶剂为正己垸和异 丙醇的混合溶剂。
5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的正己垸和异丙醇的体积比为 95 : 5~90 : 10。
6. 根据权利要求1所述的分离分析方法，所述的有机碱选自选乙二胺、二乙胺或三乙胺。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的有机碱为二乙胺。
8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的二乙胺的加入量为 0.1%~0.5%。
9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤(1) 取左乙拉西坦样品适量，用无水乙醇溶解样品，得到lmL含左乙拉西坦 0.1mg 0.5mg的样品溶液。(2) 设置流动相流速为0.4 1.2mL/min,检测波长为210nm，色谱柱柱温箱 为室温。(3) 取步骤(l)的样品溶液2-50pL注入液相色谱仪，记录色谱图。
全文摘要
本发明公开了一种左乙拉西坦及其对映异构体分析与分离测定方法，采用纤维素类手性柱，以含有或不含有胺的正相混合溶剂为流动相的正相色谱法进行分离，用该方法可以快速的分离分析左乙拉西坦以及含左乙拉西坦制剂的对映异构体杂质。
文档编号G01N30/06GK101532996SQ200810101629
公开日2009年9月16日 申请日期2008年3月10日 优先权日2008年3月10日
发明者牟淑慧 申请人:北京德众万全医药科技有限公司