专利名称：：乙醇酸正丁酯及杂质含量的高效液相色谱分析方法
技术领域：
：本发明涉及一种乙醇酸正丁酯及杂质含量的高效液相色谱分析方法。
背景技术：
：乙醇酸正丁酯是一种用途广泛的有机助剂，作为高效的流平剂用于涂料，在硝基漆中加入总量的3wt%5wt^，可提供非常好的光泽和流平性；用于皮革的硝基漆中适当地增加乙醇酸正丁酯的加入量，具有更好的光泽；用于手刷醇酸漆和油性漆中加入总量的lwt%2wt^的乙醇酸正丁酯时，能在很大程度上阻止油性漆起皱的现象。乙醇酸正丁酯也常应用于印刷油墨业，汽车修补漆中，还可以降低聚醋酸乙烯分散体的最低成膜温度。乙醇酸正丁酯的结构如下乙醇酸正丁酯通常采用乙二醛、正丁醇为原料，在复合催化剂的存在下制备得到乙醇酸正丁酯。但其最终产品中始终都存有乙醇酸杂质，其含量的多少直接影响产品的质量和应用性能，因此分析乙醇酸正丁酯的含量对杂质含量的监控十分重要，目前还未见乙醇酸正丁酯及杂质含量高效液相色谱分析方法的报道。
发明内容本发明所要解决的技术问题在于提供一种乙醇酸正丁酯及杂质含量的高效液相色谱分析方法，以填补现有技术中对乙醇酸正丁酯及杂质含量进行定量检测的空白。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案来实现—种乙醇酸正丁酯及杂质含量的高效液相色谱分析方法，采用反相高效液相色谱法，测定乙醇酸正丁酯以及杂质的含量，高效液相色谱条件为色谱柱C18，5iim，250X4.6mm(I.D.)。流动相组成的体积比乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(pH2.5)=10:90，m1/ml。流速0.5ml/min。柱温25。C。检测波长200nm。进样量20iU。按照本发明的高效液相色谱分析方法，将测定含量的进样样品浓度稀释10倍，测定乙醇酸正丁酯主体及其杂质的含量，本发明的流动相中添加20mmol/LNa^P04，用磷酸调节pH值为2.5。本发明的有益效果本发明采用C18反相色谱柱，以液相色谱方法准确测定乙醇酸正丁酯主体含量的同时，可以准确测定乙醇酸杂质的含量；本发明选用流动相溶解样品，确保了溶液的稳定性；选用进样体积为20iU，柱温为25t:，提高了色谱峰的对称性；为乙醇酸正丁酯主体含量的质量控制提供了可靠的检测数据。图1为不同体积比流动相组成的色谱图，其中图l-a为20X乙腈和80X含有pH=2.5的磷酸缓冲水溶液作为流动相时的分离效果图；图l-b为10%乙腈和90%含有pH=2.5的磷酸缓冲水溶液作为流动相时的分离效果图。图1中a峰为乙醇酸，b峰为乙醇酸正丁酯。图2为紫外光谱图，其中图2-a为乙醇酸正丁酯紫外光谱图；图2-b为乙醇酸紫外光谱图。图3为乙醇酸正丁酯标准曲线图。图4为乙醇酸标准曲线图。图5为样品的色谱图，a峰为乙醇酸，b峰为乙醇酸正丁酯。具体实施例方式下面通过实施例对本发明作进一步说明，但实施例并不限制本发明的保护范围。主要实验仪器及色谱条件Waters1525型高效液相色谱仪，Waters717plus自动进样器，配Waters2996型二极管阵列(PDA)检测器，色谱分离系统的控制和记录由WatersEmpower色谱管理系统完成。色谱柱选用的是Cw，5iim，250X4.6mm(I.D)，流动相为乙腈磷酸_磷酸二氢钠缓冲水溶液(pH2.5)=10:90ml/ml，流速0.5ml/min，柱温25。C，检测波长200nm。试剂与药品乙醇酸正丁酯对照品(>99.0%)乙醇酸对照品(>99.0%)乙腈HPLC级；磷酸分析纯；磷酸二氢钠分析纯；实验中流动相和溶液用水均为二次石英蒸馏水。实施例1高效液相色谱条件的选择1.l流动相的选择将不同体积比的流动相组成进行试验，当乙腈比例大于20%，乙醇酸正丁酯和乙醇酸两个色谱峰出峰较快不能达到很好的分离，且有拖尾现象，见图卜a。当乙腈-水比例为IO:90ml/ml(体积比)的条件下，各成分能够达到基线分离，且拖尾现象得到改善，见图l-b。由于乙醇酸正丁酯在水中溶解性差，在有机相溶解性比较好，用此流动相需先用有机溶剂溶解样品，在再用流动相进行稀释的办法。1.2检测波长的选择4用二极管阵列检测器在190-400nm进行连续扫描，得到紫外吸收光谱图，乙醇酸正丁酯在205nm附近有最大吸收(参见图2_a)，而乙醇酸在190-400nm区间没有最大吸收波长(参见图2-b)，在兼顾各组分灵敏度，选择检测波长为200nm。1.3样品浓度的选择为了同时兼顾主成分含量与杂质含量的测定，在测定杂质的含量时，样品的浓度必须足够大，以使杂质能够出峰；测定主成分的含量时，溶液浓度过大会导致色谱峰峰超出检测范围而不能定量，故将样品稀释IO倍后再测定，试验准确度见表1。实施例2标准溶液及样品溶液的配制准确称取200.OOmg乙醇酸正丁酯标准对照品，置于10ml容量瓶中，先加入少量甲醇使之溶解，再用流动相稀释至刻度，摇匀，配成浓度为20mg/ml的乙醇酸正丁酯的标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度。准确称取20.OOmg乙醇酸标准对照品，置于10ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为2.Omg/ml的乙醇酸的标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度。实施例3标准曲线的制作选择最佳高效液相色谱条件，即色谱柱为C18，5iim，250X4.6mm(I.D);流动相组成为的体积比为乙腈磷酸-磷酸二氢钠缓冲水溶液(PH=2.5)=10:90ml/ml;流速为0.5ml/min;柱温为25°C;检测波长为200nm。取乙醇酸正甲酯标准溶液20ill进样，以峰面积对浓度作图(参见图3)。乙醇酸正丁酯溶液在浓度O.515mg/ml的范围内时，样品浓度与峰面积成线性关系，线性回归方程为A乙醇酸正丁酯216692.55354+6.72359E7C，r=0.99991。取乙醇酸标准溶液20ill进样，以峰面积对浓度作图(参见图4)。乙醇酸溶液在浓度为0.041.2mg/ml的范围内时，样品浓度与峰面积成线性关系，线性回归方程为A乙醇酸二113498.56134+5.67617E7C，r=0.99985。当信噪比S/N二3时，测得乙醇酸正丁酯和乙醇酸的最低检测限分别为0.OOOlmg/ml、和0.0002mg/ml。实施例4样品的测定4.1主含量的测定精确称取200.Omg乙醇酸正丁酯试样，置于10ml容量瓶中，先加入少量甲醇使之溶解，再用流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度为20.Omg/ml的溶液。取上述20.Omg/ml溶液1.Oml置于10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得2.Omg/ml的溶液，备用。选择任意5个批号的样品，按上述方法配制2.Omg/ml样品溶液。在本发明的高效液相色谱条件，即色谱柱C化，5iim，250X4.6mm(I.D);流动相组成为的体积比为乙腈:磷酸-磷酸盐缓冲水溶液怖2.5)=10:90ml/ml;流速为0.5ml/min;柱温为25。C;检测波长为200nm进行高效液相色谱分析，进样量为20(参见图5)。4.2杂质含量的测定5选择任意五个批号的样品，按上述方法配制20mg/ml样品溶液。根据本发明的高效液相色谱条件，即色谱柱C化，5iim，250X4.6mm(I.D);流动相组成为的体积比乙腈:磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH2.5)=10:90，ml/ml;流速为0.5ml/min;柱温为25°C;检测波长为200nm进行HPLC分析，进样量为20(参见图l_b)。样品中主体成分乙醇酸正丁酯及杂质乙醇酸的检测结果列于表1。表1检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>权利要求一种乙醇酸正丁酯及杂质含量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤1)采用反相高效液相色谱法，其高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，250×4.6mm(I.D.)；流动相组成乙腈∶磷酸-磷酸盐缓冲水溶液pH2.5＝10∶90ml/ml；流速0.5ml/min；柱温25℃；检测波长200nm；进样量20μl；2)分别配制乙醇酸正丁酯和乙醇酸的标准溶液及样品溶液；3)制作标准曲线；4)样品含量的测定。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，将测定含量的进样样品浓度稀释10倍，测定乙醇酸正丁酯主体及其杂质的含量。3.根据权利要求l所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，在流动相中添加20mmol/LNaH2P04，用磷酸调节pH值为2.5。全文摘要本发明公开了一种乙醇酸正丁酯及杂质含量的高效液相色谱分析方法。采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱条件为色谱柱C18，5μm，250×4.6mm(I.D.)，流动相组成体积比乙腈∶磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(pH＝2.5)＝10∶90，流速0.5ml/min，柱温25℃，检测波长200nm，进样量20μl；本发明流动相中添加20mmol/L的NaH2PO4，将测定含量的进样样品浓度稀释10倍，准确测定乙醇酸正丁酯主体及杂质的含量。本发明为乙醇酸正丁酯主体含量的质量控制提供了简易可靠的分析方法。文档编号G01N30/00GK101726550SQ20091020131公开日2010年6月9日申请日期2009年12月17日优先权日2009年12月17日发明者刘慧青,蒋旭亮,黄莹申请人:上海化学试剂研究所