专利名称：大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法
技术领域：
本发明属于农药残留测定技术领域，涉及大蒜中农药残留快速检测的方法。更具体的说，是利用微波处理去除大蒜中的205种农药残留的气相色谱/质谱联用法(GC/MS)。
背景技术：
大蒜在种植过程中，地下害虫危害严重，使得菜农大量使用高毒农药，对大蒜造成严重污染。农药超标现象严重。在蔬菜农药残留检测中，洋葱、大蒜和韭菜等含硫蔬菜是一类较为特殊的复杂样品。这类蔬菜在样品制备过程中被搅碎时，其中的活性酶会使蔬菜中的硫化物释放，产生特殊气味。这些硫化物不易除去，在气相色谱电子捕获检测器(GC/ECD)、气相色谱火焰光度检测器(GC/FPD)和气相色谱质谱检测器(GC/MS)上会产生很强的响应，影响待测物的定性与定量。因此解决样品中硫化物的干扰是气相色谱法测定含硫蔬菜中农药残留的关键。
大蒜里一般含有大蒜素，在新鲜的大蒜中大蒜素是以大蒜氨酸的形式存在的，当大蒜受到冲击时，大蒜酶接触到空气中的氧被活化，大蒜氨酸发生酶促反应转化成大蒜素，由于大蒜素与某些农药的结构和性质相似，因此在进行农药多残留分析时会产生强烈的干扰，因此蒜氨酸酶的失活是消除这类干扰的关键。
一般常用微波处理和磷酸处理，微波和磷酸的作用是使含硫蔬菜中活性酶失活，这样在切碎时，就不会产生硫化物，大大减少了测定干扰。此外，还有采用硝酸银分散到氧化铝和氟罗里硅土上去除蔬菜中硫化物的报道，但硝酸银对含硫农药有很强的吸附，使回收率不能达到要求。用高锰酸钾-硫酸氧化法也可去除蔬菜中的硫化物，但不适用于性质不稳定的有机磷类农药。但采用加硫酸铜匀浆方法测定油菜、油菜籽和甜菜样品时，对除去硫化物也有很好的效果。
发明内容
本发明选择了微波处理作为大蒜的前处理手段，并对微波处理时间对农药稳定性的影响进行了试验。将整瓣大蒜直接微波处理，在大蒜素产生之前，使大蒜样品中的酶失活，也就不会产生大蒜素，从而达到去除硫化物的干扰，又使待测分析物回收率达到要求。为实现上述目的，本发明提供如下的技术方案 大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法，其特征在于按如下的步骤进行 (1)大蒜去皮，整瓣称100-200g用500W微波加热90-120秒，样品匀浆处理； (2)精确称取样品10g(精确到0.1g)加入40-60mL乙腈和10-20mL水，以20000-30000转/min匀浆搅拌2-5min；5mL乙腈洗刀头，抽滤，15-30mL乙腈分三次清洗残渣，添加水1-5mL后，待净化； (3)用10-20mL乙腈和10-30mL纯水分别预淋C18柱(1000mg代表柱子规格)，将上述滤液过PSA柱净化，直接将上述提取液过柱，不需要淋洗液(其中的PSA是一种固相萃取柱通用名称，具体填料为N-丙基乙二胺的固相萃取柱，C18为填料是三宫能十八烷基的固相萃取柱)，用9-15mL乙腈，3-5mL水洗残液； (4)洗脱液，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和6-10g食盐，振荡3-5min，静止10-15min； (5)取上层溶液，在38℃下减压浓缩；将浓缩液进行第2次净化，用洗脱液A 5mL预淋，PSA柱(500mg代表柱子规格)，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液；其中洗脱液A丙酮+正己烷(50mL+50mL)；洗脱液B丙酮+正己烷(20mL+80mL)。
(6)洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，2mL定容液{丙酮+正己烷(50mL+50mL)}定容，收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。
本发明大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法的具体步骤如下 1、试验材料和仪器设备 试剂除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水乙腈、丙酮(色谱纯)、正己烷(色谱纯)；洗脱液A丙酮+正己烷(50+50)、洗脱液B丙酮+正己烷(20+80)、定容液丙酮+正己烷(50+50)；氯化钠；正十烷；预处理小柱C18柱(500mg，3mL)、PSA柱；食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液(pH＝7.5)；农药标准品(纯度均≥95％，购自德国Dr.Ehrenstorfer公司)；农药标准品储备溶液200mg/L；工作标准溶液A1000μg/L；B500μg/L；C50μg/L。
仪器设备Agilent6890/5973N气相色谱-质谱联用仪配有电子轰击源(EI)、电子天平(十万分之一，瑞士梅特勒公司)、微波炉(格兰仕)、固相萃取仪(日本GLSciences)、样品匀浆机(IKA-WERKE)、分液漏斗振荡器(MMV-1000W)旋转蒸发器(Laborota4000efficient，德国Heidolph)、自动快速浓缩仪(DSY-II型，北京金科精华苑技术研究所)等。
2、前处理方法 称取大蒜去皮，整瓣称100g用微波炉(500W)加热90秒，样品匀浆机处理。精确称取样品10g(精确到0.1g)于250mL烧杯中，加入40mL乙腈和10mL水，均一搅拌器匀浆(20000转/min)2min；5mL乙腈洗刀头，抽滤，15mL乙腈分三次清洗残渣，添加水1mL后，待净化。
净化用10mL乙腈和10mL纯水分别预淋C18柱(1000mg)，将上述滤液过柱净化，用9mL乙腈，3mL水洗残液。将洗脱液倒入500mL分液漏斗中，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和6.5g食盐，振荡3min，静止10min。取上层乙腈层，在38℃下减压浓缩。
将浓缩液进行2次净化，用洗脱液A 5mL预淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液。洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，2mL定容液定容。收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。
3、仪器分析条件 3.1气相色谱条件 进样口温度 60℃，保持0.1分钟，每分钟150℃升至260℃，保持3分钟，再以每分钟40℃升至300℃，保持5分钟； 进样方式 脉冲不分流；进样体积2μL； 色谱柱 HP-5ms(30m×0.25mm×0.251μm)。
柱温60℃，保持3分钟，每分钟5℃升至120℃，保持2分钟，再以每分钟1.5℃升至225℃，保持2分钟，每分钟20℃升至300℃，保持10分钟，共运行102.75分钟。
载气He；柱流量1mL/min。
3.2质谱条件 EI源；电子能量70ev；反应气氦气； MS Source230℃；MS Quad150℃；Scan50-500； 3.3离子分组情况 表1SIM法农药离子通道分组表 4、方法的回收率(见表2附在说明书最后)
具体实施例方式 为了更充分的解释本发明的实施方法，提供了大蒜中农药残留快速检测的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的原料均有市售。
实施例1 (1)大蒜去皮，整瓣称100g用500W微波加热90秒，样品匀浆处理； (2)精确称取样品10g加入40mL乙腈和mL水，以20000转/min匀浆搅拌2min；5mL乙腈洗刀头，抽滤，15mL乙腈分三次清洗残渣，添加水1mL后，待净化； (3)用10mL乙腈和10mL纯水分别预淋C18柱(1000mg)，将上述滤液过PSA柱净化，用9mL乙腈，3mL水洗残液； (4)洗脱液，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和6.5g食盐，振荡3min，静止15min； (5)取上层溶液，在38℃下减压浓缩；将浓缩液进行第2次净化，用洗脱液A5mL预淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液； (6)洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，2mL定容液定容，收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。
实施例2 (1)大蒜去皮，整瓣称200g用500W微波加热120秒，样品匀浆处理； (2)精确称取样品10.1g加入60mL乙腈和20mL水，以30000转/min匀浆搅拌5min；5mL乙腈洗刀头，抽滤，30mL乙腈分三次清洗残渣，添加水5mL后，待净化； (3)用20mL乙腈和30mL纯水分别预淋C18柱(1000mg)，将上述滤液过PSA柱净化，用15mL乙腈，5mL水洗残液； (4)洗脱液，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和7g食盐，振荡3min，静止10min； (5)取上层溶液，在38℃下减压浓缩；将浓缩液进行第2次净化，用洗脱液A 5mL预淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液； (6)洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，2mL定容液定容，收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。
实施例3 (1)大蒜去皮，整瓣称150g用500W微波加热100秒，样品匀浆处理； (2)精确称取样品10g(精确到0.1g)加入50mL乙腈和20mL水，以20000转/min匀浆搅拌5min；5mL乙腈洗刀头，抽滤30mL乙腈分三次清洗残渣，添加水5mL后，待净化； (3)用20mL乙腈和30mL纯水分别预淋C18柱(1000mg)，将上述滤液过PSA柱净化，用15mL乙腈，5mL水洗残液； (4)洗脱液，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和8g食盐，振荡5min，静止10min； (5)取上层溶液，在38℃下减压浓缩；将浓缩液进行第2次净化，用洗脱液A 5mL预淋PSA柱(500mg)，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液； (6)洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，2mL定容液定容，收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。
在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式的限制。
表2方法的回收率
权利要求
1.大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法，其特征在于按如下的步骤进行
(1)大蒜去皮，整瓣称100-200g用500W微波加热90-120秒，样品匀浆处理；
(2)精确称取样品10g±0.1，加入40-60mL乙腈和10-20mL水，以20000-30000转/min匀浆搅拌2-5min；5mL乙腈洗刀头，抽滤，15-30mL乙腈分三次清洗残渣，添加水1-5mL后，待净化；
(3)用10-20mL乙腈和10-30mL纯水分别预淋C18柱，将上述滤液过PSA柱净化，用9-15mL乙腈，3-5mL水洗残液；
(4)洗脱液，加5mL食盐饱和的2mol/L磷酸缓冲溶液和6-10g食盐，振荡3-5min，静止10-15min；
(5)取上层溶液，在38℃下减压浓缩；将浓缩液进行第2次净化，用洗脱液A5mL预淋PSA柱，然后用30mL洗脱液B洗脱，再用30mL洗脱液A洗脱，收集洗脱液；其中洗脱液A为丙酮+正己烷＝50mL+50mL、洗脱液B为丙酮+正己烷＝20mL+80mL、采用洗脱液A定容液；
(6)洗脱液中加入正十烷50μL，在38℃下减压浓缩近干，用氮吹仪吹干，采用洗脱液A2mL定容液定容，收集于样品小瓶内，供GC/MS测定。
全文摘要
本发明涉及大蒜样品中农药多残留测定的前处理方法，具体是选择微波处理作为大蒜的前处理手段，并对微波处理时间对农药稳定性的影响进行了试验。选择微波炉加热90-120秒，在大蒜素产生之前，使大蒜样品中的酶失活，也就不会产生大蒜素，从而达到去除硫化物的干扰，又使待测分析物回收率达到要求。本发明的测定方法具有操作简单快捷，回收率高，灵敏度高，去除硫化物干扰完全的特点。为快速准确的测定大蒜中农药残留量，建立简便，有效的分析方法提供了可靠的保障。
文档编号G01N30/06GK101762663SQ200910228930
公开日2010年6月30日 申请日期2009年12月2日 优先权日2009年12月2日
发明者郭永泽, 张玉婷, 邵辉, 李辉, 李娜, 刘磊, 程奕, 宋淑荣 申请人:天津市农业科学院中心实验室