专利名称：一种检测t-2毒素的方法及其专用试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测T-2毒素的方法及其专用试剂盒。
背景技术：
T-2毒素(T-2toXin)，属于单端孢霉烯族A族化合物，是该类化合物中毒性最强、 污染水平较高的毒素之一，主要由镰刀霉菌产生。T-2毒素主要污染小麦、玉米、大麦、燕麦 和黑麦等谷物及麦芽、啤酒和面包等农产品。关于T-2毒素污染情况的报道，大多集中于对 谷物和饲料的报道。T-2毒素是体内蛋白质合成的抑制剂，人畜误食病谷后，可引起呕吐、腹 泻、发热等急性中毒症状，严重时可损伤造血组织，造成伤亡。此外，T-2毒素还与我国某些 地区食管癌、克山病和大骨节病的高发病率有着密切的关系。T-2毒素的检测方法有气相色谱法、薄层层析法、高效液相色谱法和气质联仪法 等。这些方法有的太复杂，有的缺乏灵敏度，有的价格昂贵，不适于常规毒素分析。因此有必 要建立一种特异性强、灵敏可靠、简单快速、适于检测大量样品的方法，以便加强对T-2毒 素的监控。酶联免疫吸附测定(ELISA)法是一种准确、可靠、快速、特异的检测方法，适合于 大量样品的检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测T-2毒素的方法及其专用试剂盒。本发明提供了分泌T-2毒素单抗的杂交瘤细胞株，即为保藏编号为CGMCCNo. 3395 的T2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株(3E-5A-7H-8B)。该细胞株已于2009年11月3日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCCJia 北京市朝阳区大屯 路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No. 3395。本发明还保护一种单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No. 3395的T2毒素单克隆 抗体杂交瘤细胞株(3E-5A-7H-8B)分泌产生的。本发明同时保护一种检测T-2毒素的酶联免疫试剂盒，包括所述单克隆抗体。所述试剂盒可为如下1)至4)中的任意一种1)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板、一抗和酶标二抗；所述包被原为式 (I)所示的化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物；所述一抗为所述单克隆抗体；2)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板和酶标半抗原；所述包被原为所述单 克隆抗体；所述酶标半抗原中的半抗原为式(I)所示的化合物；3)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板和酶标一抗；所述包被原为式(I)所示 的化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物；所述酶标一抗中的一抗为所述单克隆抗体；4)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板、一抗和酶标半抗原；所述包被原为二 抗；所述一抗为所述单克隆抗体；所述酶标半抗原中的半抗原为式(I)所示的化合物；
权利要求
1.保藏编号为CGMCCNo. 3395的T2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株。
2.一种单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No. 3395的T2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞 株分泌产生的。
3.—种检测T-2毒素的酶联免疫试剂盒，包括权利要求2所述单克隆抗体。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒为如下1)至4)中的任意一种1)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板、一抗和酶标二抗；所述包被原为式(I)所 示的化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物；所述一抗为所述单克隆抗体；2)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板和酶标半抗原；所述包被原为所述单克隆 抗体；所述酶标半抗原中的半抗原为式(I)所示的化合物；3)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板和酶标一抗；所述包被原为式(I)所示的化 合物和载体蛋白偶联得到的偶联物；所述酶标一抗中的一抗为所述单克隆抗体；4)所述试剂盒包括包被有包被原的酶标板、一抗和酶标半抗原；所述包被原为二抗； 所述一抗为所述单克隆抗体；所述酶标半抗原中的半抗原为式(I)所示的化合物；
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋 白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白；所述的二抗为羊抗 鼠二抗或羊抗兔二抗。
6.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于1)中所述的酶标二抗、2)或4)中所 述的酶标半抗原、3)中所述的酶标一抗中，所用的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯 酶。
7.如权利要求3至6中任一所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括呕吐毒素 标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液和样品浓缩液；所述呕吐毒素标准品溶液浓度为Olng/mL ；所述浓缩洗涤液为磷酸盐缓冲液；所述浓缩洗涤液优选为将0. 8-1. 2mL吐温20和 0. 5g叠氮钠加入IOOmL pH7. 4 0. OlM磷酸盐缓冲液得到的溶液；所述样品浓缩液为0. 8mol/L pH7. 2-7. 5的磷酸盐缓冲液。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述标记酶为辣根过氧化物酶；所述底物 显色液由显色液A液和显色液B液组成；显色液A液为过氧化氢溶液或过氧化脲溶液；显色 液B液为邻苯二胺溶液或四甲基联苯胺溶液；所述终止液为硫酸溶液或盐酸溶液。
9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述标记酶为碱性磷酸酯酶；所述底物显 色液为对硝基苯磷酸酯缓冲液；所述终止液为氢氧化钠溶液。
10.一种检测样品中T-2毒素的方法，包括如下步骤1)将待测样品进行前处理，得到待测样本溶液；2)用权利要求3-9中任一所述试剂盒对所述待测样本溶液进行检测；所述待测样品为谷物或饲料；所述前处理的方法为称取待测样品，溶于20体积份甲醇和80体积份水的混合液中， 超声波提取，过滤。
全文摘要
本发明公开了一种检测T-2毒素的方法及其专用试剂盒。本发明提供了保藏编号为CGMCC No.3395的杂交瘤细胞株3E-5A-7H-8B。本发明还提供了一种单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.3395的杂交瘤细胞株3E-5A-7H-8B分泌产生的。本发明提供的试剂盒包括所述单克隆抗体。本发明中将T-2毒素进行结构改造，加入间隔臂，合成了人工抗原。用所述人工抗原免疫动物，获取到了一个杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌得到的单克隆抗体特异性很高。本发明的试剂盒，操作简便易行，造价低廉，具有特异性高、灵敏度高、精确度高等特点，能够现场监控且适合大量样本筛查，将在T-2毒素的检测中发挥重要作用。
文档编号G01N33/577GK102080066SQ200910237949
公开日2011年6月1日 申请日期2009年11月26日 优先权日2009年11月26日
发明者史为民, 吴小平, 张兴祥, 徐飞, 李娜, 江海洋, 潘净如, 王战辉, 王熙, 王进 申请人:北京维德维康生物技术有限公司