专利名称：快速横向流动的聚糖检测装置的制作方法
快速横向流动的聚糖检测装置相关申请本申请要求于2009年3月6日提交的美国临时申请第61/157，933号的优先权， 通过弓丨用将其全部内容并入本文。
背景技术：
由分泌型基因FUT2编码的半乳糖苷2- α -L-岩藻糖基转移酶2 (FUT2)负责α 1， 2-岩藻糖基化(分泌型)聚糖的合成。非洲、美洲、亚洲和欧洲中大约20-25%的个体缺乏活性FUT2基因，并且因此不能表达分泌型聚糖。发明概述本发明的一方面涉及用于检测聚糖的快速横向流动装置。该装置包括样品垫、与所述样品垫连通的膜(例如，硝酸纤维素膜)、凝集素-标记物偶联物、固定的凝集素和固定的抗凝集素抗体。偶联物中的凝集素与固定的凝集素相同。同样，固定的抗体与该凝集素特异结合。用于本装置的合适的凝集素包括但不限于，UEA1、ΑΙΑ、GSA II、WGA、sWGA、SNA、 MAL-II, PWA、SJA、LEA和I-PHA。固定的凝集素和固定的抗凝集素抗体位于膜的第一区域和第二区域上，所述第一区域和第二区域不重叠。所述偶联物位于样品垫和固定的凝集素或固定的抗凝集素抗体之间。在一个实例中，以这样的顺序组织这四种组分；样品垫、偶联物、固定的凝集素和固定的抗凝集素抗体。本发明的装置还可以包括支持构件，其上用于安装所述样品垫和所述膜。该装置还可以包括接收垫(sink pad)，其通过所述膜与所述样品垫分开。在一个实例中，将样品垫、膜和接收垫顺序安装在所述支持构件上。同样在本发明范围内的是利用上述装置鉴定个体中聚糖表达表型的方法。所述方法包括(i)将来自个体的体液(例如唾液)分配于装置中的样品垫中，( )检验装置中第一区域和第二区域处的信号，和(iii)基于第一区域和第二区域是否存在信号来确定个体中的聚糖表达表型。当在两个区域处均可检测到信号时，其表明个体表达能与装置中的凝集素结合的聚糖。如果仅在第二区域处可检测到信号，其表明个体不表达该聚糖。当使用含有凝集素UEAl的装置时，(i)在第一区域和第二区域处均检测到信号表明个体是分泌型聚糖阳性的；和(ii)仅在第二区域处检测到信号表明个体是分泌型聚糖阴性的。以下的描述中将详述本发明的一个或多个实施方案。从以下的附图和实际的实例，以及还从所附的权利要求书中明显可见本发明的其它特征和优点。附图简要说明首先描述附图。
图1是用于测定分泌状态的快速横向流动装置的简图。图2是用于检测唾液中分泌状态的免疫层析试条检测装置的数字图像。发明的详细描述本文所公开的是用于在快速诊断检验中确定个体的聚糖表达表型，尤其是分泌型聚糖状况的聚糖检测装置。如图1所示，本发明的装置包括样品垫100、膜200和任选地接收垫600，所有这些可以顺序安装在支持构件700上。样品垫100与膜200连通。也就是说，置于样品垫上的流体能迁移至膜。如果需要，所述装置还可以包括芯垫(wick pad) 310，其被置于膜200之上，用于从样品垫100吸收溢出的流体。样品垫100、接收垫600和芯垫310均可以由能吸收流体的材料制成，例如滤纸 (例如Whatman GF/DVA膜)或海绵。膜200允许生物分子移动，所述生物分子例如，蛋白质、核酸和多糖。适于制备膜 200的材料包括但不限于，硝酸纤维素、尼龙、纤维素、聚偏氟乙烯(PVDF)、聚碳酸酯、聚丙烯、聚乙烯、特氟龙(Teflon)和凯夫拉尔(Kevlar)。薄片或厚片形式的支持构件700可以由(即包含)金属或塑料(例如苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯)制成。本发明的装置还包括凝集素400、抗凝集素抗体500和凝集素-标记物偶联物 300。凝集素400和抗凝集素抗体500两者都是固定的，位于膜200上的两个单独的区域 420和520(即区域1和区域2、。位于样品垫100和凝集素400或抗凝集素抗体500之间的凝集素-标记物偶联物300包含与凝集素400相同类型的凝集素和标记物，所述标记物可以是任何可检测的标志物。所述标记物的实例包括但不限于，胶体金、荧光素及其衍生物 (例如FITC-荧光素异硫氰酸酯)、罗丹明及其衍生物、绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物、量子点和其它荧光或生色团分子(例如二硝基苯胼)。凝集素是与特定糖配体具有高特异性的糖结合蛋白。下面的表1列举了适用于本文所描述的装置的示例性的凝集素和它们所结合的糖配体表1.示例性的凝集素和它们所结合的糖配体
权利要求
1.用于检测聚糖的装置，包括样品垫，与所述样品垫连通的膜， 含有第一凝集素和标记物的偶联物，位于所述膜的第一区域上的固定的第二凝集素，所述第二凝集素与第一凝集素相同，和固定的对所述凝集素特异的抗体，所述抗体位于所述膜的第二区域上， 其中所述第一区域和所述第二区域是分开的，并且所述偶联物位于所述样品垫和所述第一区域或第二区域之间。
2.如权利要求1所述的装置，其中所述膜选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、纤维素膜、聚偏氟乙烯膜、聚碳酸酯膜、聚丙烯膜、聚乙烯膜、特氟龙膜和凯夫拉尔膜。
3.如权利要求2所述的装置，其中所述膜是硝酸纤维素膜。
4.如权利要求1所述的装置，其中所述凝集素选自UEAl、ΑΙΑ、GSAII、WGA、sWGA、SNA、 MAL-II, PffA, SJA, LEA 和 I-PHA。
5.如权利要求4所述的装置，其中所述凝集素是UEAl。
6.如权利要求5所述的装置，其中所述膜是硝酸纤维素膜。
7.如权利要求1所述的装置，其中所述标记物选自胶体金、荧光素、罗丹明、绿色荧光蛋白、量子点和生色团。
8.如权利要求7所述的装置，其中所述标记物是胶体金。
9.如权利要求1所述的装置，还包括与所述膜连通的接收垫，其中所述样品垫和所述接收垫被所述膜分开。
10.如权利要求1所述的装置，还包括支持构件，在所述支持构件上安装所述样品垫和所述膜。
11.如权利要求10所述的装置，还包括接收垫，其中所述样品垫、所述膜和所述接收垫顺序安装在所述支持构件上。
12.如权利要求11所述的装置，其中所述装置顺序包括样品垫、偶联物、固定的第二凝集素、对所述凝集素特异的抗体和接收垫。
13.如权利要求12所述的装置，其中所述凝集素选自UEA1、ΑΙΑ、GSAII、WGA、sWGA、 SNA、MAL-II、PWA、SJA, LEA 和 I-PHA。
14.如权利要求13所述的装置，其中所述凝集素是UEAl。
15.如权利要求10所述的装置，其中所述支持构件是塑料的或金属的。
16.如权利要求15所述的装置，其中所述支持构件由苯乙烯制成。
17.鉴定个体中聚糖表达表型的方法，包括将来自个体的体液分配于权利要求1所述的装置的样品垫中， 检验所述装置中第一区域和第二区域处的信号，和基于所述第一区域和第二区域是否存在信号来确定个体中的聚糖表达表型， 其中(i)所述第一区域和第二区域均存在信号表明所述个体表达与权利要求1所述的装置中含有的凝集素特异结合的聚糖和(ii)仅在第二区域处存在信号表明所述个体不表达所述聚糖。
18.如权利要求17所述的方法，其中权利要求1所述的装置中含有的凝集素选自 UEAl、ΑΙΑ、GSA II、WGA、sWGA、5SNA、MAL-II、PWA、SJA、LEA 禾口 I-PHA0
19.如权利要求18所述的方法，其中所述凝集素是UEA1，并且⑴所述第一区域和所述第二区域处均存在信号表明所述个体具有分泌型聚糖阳性表型和(ii)仅在所述第二区域处存在信号表明所述个体具有分泌型聚糖阴性表型。
全文摘要
聚糖检测装置，包括样品垫、与所述样品垫连通的膜、标记的凝集素、固定的相同类型的凝集素和固定的对所述凝集素特异的抗体。
文档编号G01N33/53GK102439443SQ201080010411
公开日2012年5月2日 申请日期2010年3月8日 优先权日2009年3月6日
发明者吉耶尔莫·M·鲁伊斯-帕拉西奥斯, 大卫·S·纽伯格, 阿尔迪斯·L·莫罗 申请人:儿童医院医疗中心, 国立医学与营养研究所, 综合医院股份有限公司