专利名称：一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及的是检测试纸，具体的是一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸。
背景技术：
嗜酸氧化亚铁硫杆菌UcitZiiAio如以7/狀ferrooxidans,以下简称免/)是一种化能自养、专性好氧、嗜酸革兰氏阴性菌，主要生长在pH 1. O 4. 5的环境中，以氧化狗2+、 S0及S2—的化合物等来获得生长过程所需的能量。该细菌被广泛地应用于生物冶金、有用金属的回收、煤的脱硫及含硫废水的处理，是在资源微生物处理工艺中应用最多、适应性最强的一种细菌。在输水、输油设备、冷却循环水管、采油井、暖气回水管和城市排水管线中均发现有A /存在，由于A /能将水中亚铁氧化成高铁氧化物沉积于菌体外鞘或周围粘液层中，在金属表面形成黄褐色的结瘤，结瘤内氧进入困难而导致氧浓差电池腐蚀，进而加速管道腐蚀。此外，A/还能将水体中的元素硫和还原性硫化物氧化，最终产生硫酸，从而腐蚀金属、混凝土构件等，其腐蚀行为给地下管线、海底电缆、采油设备、工业注水系统等设施带来严重危害，造成经济上的损失。因此人们对其有效检测方法也越来越关注。目前，A/存在与否的检测方法主要有培养富集后检测亚铁离子的氧化性能法、多管发酵法、测试瓶法、基于分子生物学技术的检测16S rRNA基因和亚铁氧化酶基因法。这些方法都需要对样品中的A/进行富集培养，培养基的配置复杂、操作程序繁琐、检测时间长、对测试环境和操作人员的素质要求极高。近年来，不依赖于培养的分子生物学技术也开始应用与A/的检测，根据16S rRNA基因设计荧光探针，然后通过分子杂交来判断样品中 A/的含有情况。此外，根据铜蓝蛋白(Rusticyanin，以下简称Rus)编码基因rus建立的含有两对引物的PCR法也被应用于A /的检测。这两种方法虽然具有一定的灵敏性和特异性，但其试剂配制复杂、对仪器要求高、测试成本高、并且需要专门的技术人员来完成。Rus是A /亚铁氧化过程中的一种重要的蛋白，每一分子的蛋白包含一个铜原子， 分子量为16. 5 kDa。在铁生长环境中A /菌体内含有高浓度的Rus，可以达到可溶性蛋白总量的5%。从不同A/菌株中分离的Rus，其氨基酸序列同源性非常高，并且在其它革兰氏阴性细菌中尚未发现有Rus的存在，因此Rus可以作为A/的一个很好的检测标志。需要发明一种利用Rus蛋白来检测A /是否存在的装置。
发明内容本实用新型的发明目的是针对上述问题提供一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸，解决目前检测A. f是否存在的方法过于复杂，成本较高的问题。本实用新型通过以下技术方案来实现一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸，该试纸包括塑料底板、微孔滤膜、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜、滤纸，塑料底板上依次贴有微孔滤膜、玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和滤纸；所述的玻璃纤维素膜上有胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I，硝酸纤维素膜上有Rus单克隆抗体II条带。[0007]上述的硝酸纤维素膜上还有羊抗鼠IgG条带，Rus单克隆抗体II条带和羊抗鼠IgG 条带平行设置，且Rus单克隆抗体II条带位于胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带之间。采用上述技术方案的积极效果本实用新型利用抗原抗体反应和免疫层析技术的原理，将Rus单克隆抗体制备到试纸上，通过Rus单克隆抗体会与Rus结合的特性，通过胶体金颗粒显色，检测出Rus的存在，进而判断A /是否存在；同时，增加了羊抗鼠IgG条带， 可以灵敏地检测出本实用新型是否失效，方便使用。
图1是本实用新型的俯视图；图2是本实用新型的装配示意图。图中1塑料底板、2微孔滤膜、3玻璃纤维素膜、4硝酸纤维素膜、5滤纸、6 Rus单克隆抗体II条带、7羊抗鼠IgG条带。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型作进一步说明图1是本实用新型的俯视图，图2是本实用新型的装配示意图，结合图1、图2所示，一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸，该试纸包括塑料底板1、微孔滤膜2、玻璃纤维素膜3、硝酸纤维素膜4、滤纸5，塑料底板1上依次贴有微孔滤膜2、玻璃纤维素膜3、硝酸纤维素膜4和滤纸5。微孔滤膜2是用于加样的，滤纸5主要用于吸取多余液体。玻璃纤维素膜3上有胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I，利用抗原抗体反应，如果待测溶液中含有Rus的话，Rus会和胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I相结合。硝酸纤维素膜4上有 Rus单克隆抗体II条带6，由于Rus单克隆抗体II被喷涂成条带状，这样Rus与胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I结合后形成的复合物会继续和Rus单克隆抗体II相结合，从而在 Rus单克隆抗体II条带6处发生沉积，产生显色，从而判断待测溶液中是否含有Rus。为了能够随时检测出试纸是否失效，在Rus单克隆抗体II条带6不显色的情况下判断出是因为待测溶液中不含有Rus，还是由于试纸失效导致胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I消失，在硝酸纤维素膜4上还设置有羊抗鼠IgG条带7，Rus单克隆抗体II条带6 和羊抗鼠IgG条带7平行设置，且Rus单克隆抗体II条带6位于胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带7之间。因为Rus单克隆抗体I和Rus单克隆抗体II均来源于小鼠，因此羊抗鼠IgG是可以和Rus单克隆抗体I和Rus单克隆抗体II相互结合的，由于 Rus单克隆抗体I还标记有胶体金颗粒，当标记有胶体金颗粒的Rus单克隆抗体I和羊抗鼠IgG相结合时，会在羊抗鼠IgG条带7处发生沉积，从而显色。在正常情况上，试纸上有一定量的标记有胶体金颗粒的Rus单克隆抗体I，不管待测液体中是否含有Rus，标记有胶体金颗粒的Rus单克隆抗体I都会和羊抗鼠IgG相结合，从而使羊抗鼠IgG条带7处显色； 如果试纸已经失效了，即没有标记有胶体金颗粒的Rus单克隆抗体I时，羊抗鼠IgG条带7 也就不会发生显色反应了，此时，提醒实验人员需要重新更换试纸进行检测。当该试纸条用来检测样品时，把预处理过的样品滴于该试纸条的微孔滤膜2处， 样品由于毛细作用进行侧向层析，经过玻璃纤维素膜3，若样品中有Rus，其会与胶体金标记的Rus单克隆抗体I结合，形成Ag-Ab I -胶体金复合物。然后继续渗移，与硝酸纤维素膜4上固定的Rus单克隆抗体II结合，形成Ab II -Ag-Ab I -胶体金复合物，从而在Rus单
4克隆抗体II条带6处发生沉积，呈肉眼可见的条带。然后继续渗移，由于Rus单克隆抗体I 和Rus单克隆抗体II均来源于小鼠，当遇到羊抗鼠IgG条带7时，会和羊抗鼠IgG发生结合， 胶体金标记的Rus单克隆抗体I在羊抗鼠IgG条带7处呈现肉眼可见的条带。若样品中没有Rus，则不会形成Ag-Ab I -胶体金复合物，从而不会和Rus单克隆抗体II结合，Rus单克隆抗体II条带6不显色。但是，无论样品中是否有Rus，胶体金标记的 Rus单克隆抗体I均会在毛细作用下渗移到羊抗鼠IgG条带7处，同羊抗鼠IgG结合，使羊抗鼠IgG条带7显色。检测中，如果Rus单克隆抗体II条带6和羊抗鼠IgG条带7均显色，证明待测溶液中含有Rus，进而证明了 A/的存在；如果Rus单克隆抗体II条带6不显色，羊抗鼠IgG条带 7显色，证明待测溶液中不含有Rus，即没有A f的存在；如果Rus单克隆抗体II条带6和羊抗鼠IgG条带7均不显色，证明试纸条已经失效，需要重新更换试纸进行检测。
权利要求1.一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸，其特征在于该试纸包括塑料底板 (1)、微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)、滤纸(5)，塑料底板(1)上依次贴有微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)和滤纸(5);所述的玻璃纤维素膜(3) 上有胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I，硝酸纤维素膜(4)上有Rus单克隆抗体II条带 (6)。
2.根据权利要求1所述的一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸，其特征在于 所述的硝酸纤维素膜(4)上还有羊抗鼠IgG条带(7)，Rus单克隆抗体II条带(6)和羊抗鼠 IgG条带(7)平行设置，且Rus单克隆抗体II条带(6)位于胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体I和羊抗鼠IgG条带(7)之间。
专利摘要本实用新型涉及的是一种检测嗜酸氧化亚铁硫杆菌的胶体金试纸，该试纸包括塑料底板(1)、微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)、滤纸(5)，塑料底板(1)上依次贴有微孔滤膜(2)、玻璃纤维素膜(3)、硝酸纤维素膜(4)和滤纸(5)；所述的玻璃纤维素膜(3)上有胶体金颗粒标记的Rus单克隆抗体Ⅰ，硝酸纤维素膜(4)上有Rus单克隆抗体Ⅱ条带(6)。本实用新型利用抗原抗体反应和免疫层析技术的原理，将Rus单克隆抗体制备到试纸上，通过Rus单克隆抗体会与Rus结合的特性，通过胶体金颗粒显色，检测出Rus的存在，进而判断A.f是否存在，方便使用。
文档编号G01N33/577GK202330437SQ20112043727
公开日2012年7月11日 申请日期2011年11月8日 优先权日2011年11月8日
发明者张爽, 晏磊 申请人:黑龙江八一农垦大学