专利名称：一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条的制作方法
技术领域：
，本发明属于生物检测领域，涉及一种医用检测耗材，具体涉及一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条。
背景技术：
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以慢性、对称性、进行性多关节炎为主要表现，至今病因仍不甚明了的自身免疫性疾病，初步调查我国该病患病率约为0. 32% 0. 36%(唐福林.应规范类风湿关节炎的诊断与治疗，中华医学杂志，2004，84(12)，971-973)。一般认为它于感染、遗传、内分泌代谢、营养有关。寒冷、潮湿是其发病的主要诱因。RF是最先在类风湿关节炎患者血清中发现的，是一种抗变性IgG的自身抗体。类风湿关节炎(RA)患者的阳性率为70%-80%阳性，系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为30%，其他结缔 组织并，如干燥综合征，硬皮病，多发性肌炎，以及慢性肝炎，老年人等也可检出一定的阳性率(吴建民.实用医学检验参考值和异常结果分析，人民卫生出版社，184)。1987年美国风湿病学学会(ARA)类风湿关节炎分类标准(I)晨僵关节及其周围僵硬感至少持续lh。病程彡6周；(2)3个或3个区域以上关节部位的关节炎医生观察到下列14个区域(左侧或右侧的近端指间关节、掌指关节、腕、肘、膝、踝及跖趾关节)中累及3个，且同时软组织肿胀或积液(不是单纯骨隆起)，病程> 6周；(3)手关节炎腕、掌指或近端指间关节炎中，至少有一个关节肿胀，病程> 6周；(4)对称性关节炎两侧关节同时受累(双侧近端指间关节、掌指关节及跖趾关节受累时，不一定绝对对称。病程>6周；(5)类风湿结节医生观察到在骨突部位，伸肌表面或关节周围有皮下结节；(6)类风湿因子阳性任何检测方法证明血清类风湿因子含量异常，而该方法在正常人群中的阳性率小于5% ；(7)放射学改变在手和腕的后前位相上有典型的类风湿关节炎放射学改变必须包括骨质侵蚀或受累关节及其邻近部位有明确的骨质脱钙。以上7条满足4条或4条以上，并排除其他关节炎即可诊断类风湿关节炎(中华医学会风湿病学分会.类风湿关节炎诊治指南，现代实用医学2004，16.)。其中RF作为RA分类标准中唯一的血清学指标，因此对于RA的诊断起着重要的临床诊断指导作用。类风湿因子(rheumatoid factor; RF),一种抗变性IgG的自身抗体，通常为IgM类，多出现于类风湿关节炎患者血清、关节液或滑膜液。类风湿因子(rheumatoidfactor, RF)可分为IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型，是类风湿关节炎血清中针对IgG FC片段上抗原表位的一类自身抗体，类风湿因子阳性患者较多伴有关节外表现，如皮下结节及血管炎等。RA病人和约50%的健康人体内都存在有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG (或与抗原结合的IgG)或EB病毒直接作用下，可大量合成RF。健康人产生RF的细胞克隆较少，且单核细胞分泌的可溶性因子可抑制RF的产生，故一般不易测出。类风湿因子是由于感染因子(细菌、病毒等)引起体内产生的以变性IgG (—种抗体)为抗原的一种抗体，故又称抗抗体。常见的类风湿因子有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型。人体内普遍存在着类风湿因子，并起着一定的生理作用。近年来对IgM型类风湿因子的生物作用已有所了解，这些生物作用包括1、调节体内免疫反应；2、激活补体，加快清除微生物感染；3、清除免疫复合物使机体免受循环复合物的损伤。只有类风湿因子的量超过一定的滴度时称类风湿因子阳性。由于IgM型类风湿因子是类风湿因子的主要类型，而且具有高凝集的特点，易于沉淀，故临床上主要测定IgM型类风湿因子，测定方法为乳胶凝集法和酶联免疫吸附法。类风湿因子阳性除见于类风湿性关节炎外，还可见于病毒感染如感冒、肿瘤、慢性感染如肺结核、亚急性细菌性心内膜炎以及其它自身免疫性疾病。多数学者认为，IgM类RF的含量与RA的活动性无密切关系；IgG类RF的含量与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状密切相关。Ig A类RF见于RA、硬皮病、Felty综合征和SLE，是RA临床活动的一个指标。IgD类RF研究甚少。IgE类RF除RA患者外，也见于Felty综合征和青年型RA。在RA患者，高效价的RF存在并伴有严重的关节功能受限时，常提示预后不良。在非类风湿患者中，RF的阳性率随年龄的增加而增加，但这些人以后发生RA者极少。老年类风湿性关节炎是指发病年龄> 60岁的类风湿性关节炎(RA)患者，约占RA的1/3，随着社会老龄化，发病率呈上升趋势(程秀峰谭魁麟谭军.老年类风湿性关节炎患者自身抗体检测及其临床意义，临床内科杂志，545-546.)。类风湿因子(RF)是临床检验的常规项目，目前对于类风湿因子(RF)的检测主要是RF体外诊断，而RF体外诊断主要技术有，乳胶凝集法、酶免疫法和免疫比浊法(陈琳洁，李志军，范晓云，段京明.抗RA33抗体在类风湿关节炎鉴别诊断中的意义及一年随访研究，实用医学杂志，2005，21 (11),1141-1143;李敬扬，周伦祥，易晴松，蔡细英，罗筱文，董李湘.抗核周因子、抗角蛋白抗体与类风湿因子联合检测在类风湿关节炎中的意义，中国现代医学杂志，2006，16 (13)，1996-1999;雷小妹，何培根.抗角蛋白抗体及类风湿因子对类风湿性关节炎的诊断价值，临床内科杂志，2003，20 (12),668.)。免疫比浊法，采用实验仪器进行检测，保证了检测的灵敏度和稳定性，但检测过程中需维持反应管中抗体蛋白始终过剩，浪费样品，同时易受到脂血的影响，并且其操作复杂，耗时。目前，检测类风湿因子较普遍采用的方法是乳胶凝集定性试验，因其经济实用和操作简单而被广泛应用，但其灵敏度低，特异性差，假阳性率高，受环境及个体差异等影响困素较多，已远不能满足临床诊断、治疗及预后的需要。RF乳胶凝集玻片检测法(上海伊华医学科技有限公司)。因为类风湿因子(RF)是一种主要发生于类风湿性关节炎患者体内的抗人变性IgG自身抗体，可与IgG的Fe段结合并呈现特异性凝集反应。该方法检测灵敏度和准确性不高。申请号为200910194749. 3的发明专利，提出一种半定量检测类风湿因子方法，该方法操作复杂，并且要求专业技术人员。申请号为200910049923. 5的发明专利提出一种IgG型类风湿因子酶免疫检测方法；申请号为200910222271.0的发明专利，提出一种人变性IgG和类风湿因子吸附装置及相关的人血清中IgM抗体检测方法，此两种方法检测类风湿因子前、后都需要做必要的仪器清洗及保养工作，并且要求专业技术人员来操作。免疫胶体金技术(Immunogold labelling techique)是上世纪80年代继突光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，形成肉眼可见的红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。快速诊断试纸条是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新型层析材料基础上发展起来的一项新型体外诊断技术，近年来发展迅速，在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用。该技术主要是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维膜上，胶体金标记试剂吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体区域时，待测物金标试剂复合物与之发生特异性结合而被截留，胶体金标记聚集在检测带上，可通过目测得到直观的显色结果。而游离的标记物则越过检测带，从而达到与检测物自动分离的目的。目前胶体金技术与双抗原夹心法、抗体捕获法联合应用已经是非常成熟的技术，但是应用到类风湿因子(RF)的检测中，却分别出现了灵敏性低和检测类型窄的现象，单独使用双抗原夹心法的免疫胶体金技术，其灵敏性低，不能达到临床的常见参考值，而单独使用抗体捕获法的免疫胶体金技术，其灵敏性较高，能达到临床的参考值，但这种方法只能单一检测靶标物质类风湿因子(RF)的IgM型，而不能检测类风湿因子(RF)的其它类型。双抗原夹心法(double antigen sandwich method)一种借助酶免疫或放射免疫法检测抗体的技术。即以已知抗原包被固相载体，相继加入待测抗体和酶标记的抗原，从而 形成三明治样双抗原夹心。抗体捕获法(亦称反向间接法)ELISA，主要用于血清中某种抗体亚型成分的测定。其原理是将抗原固化在基质上，加入含抗体的杂交瘤培养上清，洗去未结合的抗体，结合于抗原上的抗体可由标记有荧光素、放射性核素或一些酶的兔抗小鼠免疫球蛋白抗体识别。目前，能同时保证检测的灵敏度和特异性，并且使用方便，操作简单，节省资源的用于快速检测类风湿因子的产品鲜有报道。
发明内容
为解决上述领域的需求和空白，本发明旨在提供一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条，本发明试纸条在检测时抗体捕获法和双抗原夹心法原理并用，并且结合免疫胶体金技术快速检测人血清、血浆或全血中的类风湿因子，用于类风湿性关节炎患者的检测，兼具灵敏性和特异性；操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及到基层社区医院，对老年人体检类风湿的筛查，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，可广泛用于类风湿因子(RF)的定性检测，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点，同时所需样本少，节省资源。一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上；从沾液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫，在所述金标纤维垫和手柄段吸水材料垫上覆盖有保护膜层，在所述纤维素药膜上印制有条状的检测线T线和条状的对照线C线，所述检测线T线和所述对照线C线均呈与所述胶体金试纸条长度方向垂直的条状，其特征在于，在所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的人变性IgG ;在所述T线上包被有抗U链IgM和人变性IgG，所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG、T线上的抗U链IgM和人变性IgG的单位面积包被量比值为0. 133 0. 889 :5 :1。包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗链IgM、人变性IgG的单位面积包被量比值为1:15:3。包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗ii链IgM、人变性IgG的单位面积包被量分别为1600ng / cm2, 24000ng / cm2,4800ng / cm2。所述用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条，其特征在于，在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T平行的可视的MAX标志线。所述样品纤维垫采用玻璃纤维棉，所述吸水材料垫采用粗纤维吸水纸，所述金标纤维垫采用吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。所述保护膜层为胶带。所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。
还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维层及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。一种用于快速检测类风湿因子的试剂盒，其特征在于包括上述任一胶体金试纸条和样品稀释器皿。技术效果单独采用抗体捕获法和双抗原夹心法检测类风湿因子的难度在于灵敏度和特异性不能两全，为了既保证灵敏度，又提高特异性，本发明采用抗体捕获法和双抗原夹心法原理并用的方式制备了快速检测血清/血浆/全血样本中的类风湿因子(RF)的试纸条，在试纸条的检测线上包被有抗U链IgM和人变性IgG混合液，在胶体金垫上包被胶体金标记的人变性IgG，并通过调整金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和所述T线上的抗ii链IgM、人变性IgG的单位面积包被量的比值在特定范围内，从而保证了试纸条的检测灵敏性和特异性。试验数据表明，见表I和表3，在该比值范围内，特异性和灵敏性都高于单一检测原理的试纸条。检测时在硝酸纤维膜上包被抗U链IgM、人变性IgG和抗人IgG。若待检样本中RF含量高于其检测阈值时，胶体金标记的人变性IgG在层析过程中与样本中的RF结合，形成“金标人变性IgG-RF复合物”继续爬行，在检测线上与固相的人变性IgG作用，形成“金标人变性IgG-RF-人变性IgG”抗原抗体复合物沉积，即出现一条红色条带(检测线，T线)，或者在检测线上与固相的抗U链IgM作用，形成“金标人变性IgG-RF-抗ii链IgM”抗原抗体复合物沉积，即出现一条红色条带(检测线，T线)；无论RF是否存在于样本中，一条红色条带都会出现在对照区(C)内。对照区(C)内所显现的红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。本发明解决了特异性差和灵敏度弱的问题。抗体捕获法的不足之处是特异性差，但其灵敏度高；双抗原夹心法的不足之处是灵敏度弱，但其特异性高。两者的结合解决了抗体捕获法特异性差的问题，以及双抗原夹心法灵敏度弱的问题，其准确率高于单独使用抗体捕获法和双抗原夹心法。同时，与单独采用两种方法的测试条相比，二者合二为一节省了原材料材料，降低了成本，提高了使用的效率。本发明一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条，其独特之处在于，在所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的人变性IgG ;在所述T线上包被有抗ii链IgM和人变性IgG，所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG、T线上的抗U链IgM和人变性IgG的单位面积包被量比值为0. 133 0. 889 5 :1。根据表I数据列表来看，在这个单位面积的包被量比值范围内，胶体金试纸条都是合格的，而在这个范围之外，则是不合格的。包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗U链IgM、人变性IgG的单位面积包被量比值为1:15:3，同时考虑在放大生产过程中的误差因素，以及成本因素，这个单位面积的包被量比值为较佳比值。
包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗U链IgM、人变性IgG的单位面积包被量分别为1600ng / cm2, 24000ng / cm2,4800ng / cm2。同时考虑在放大生产过程中的误差因素，以及成本因素，这个单位面积的包被量为最佳包被量。本发明，优选在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T平行的可视的MAX标志线。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线，以免引起假阳性。本发明，优选所述样品纤维垫采用玻璃纤维棉，所述吸水材料垫采用粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜采用硝酸纤维素膜，所述金标纤维垫采用吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本发明检测试纸条的检测速度和准确性。本发明，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。本发明，优选基板支撑层为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。本发明，优选样品纤维垫的上表面及所述金标纤维垫的下表面设一层无纺布。用于适量吸取液体，起到一定的缓冲作用。本发明，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。本发明试纸条采用抗体捕获法和双抗原夹心法并用的原理，并且结合免疫胶体金技术快速检测人血清、血浆或全血中的类风湿因子，用于类风湿性关节炎患者的检测；本发明试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，并且保证检测的灵敏性、准确性和高效率。
图I本发明试纸条的俯视图；图2本发明试纸条的纵向剖面图其中1-手持端，2-对照线C线，3-检测线T线，4-MAX标志线，5-沾液端，6-纤维素药膜层，7-样品纤维层，8-手持端吸水材料层，9-金标纤维层，10-大无纺布，11-小无纺布，12-手持端胶带，13-箭头胶带，14-基板支撑层。
具体实施例方式提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。实施例I.根据胶体金检测的原理，将本发明的胶体金试纸条的粘液端浸入待测液中，或者在粘液端的样品纤维层滴加待测液，待测液中的物质在纤维层材料的毛细作用下沿着试纸条从沾样端向手持端移动，待测液中的靶标物质经过金标纤维层时与胶体金标记蛋白粘附在一起并向吸水纸垫方向移动，待测液中的靶标物质经过检测线时，靶标物质与检测线上包被的物质由于特异性结合导致胶体金在检测线上聚集，使检测线显色。其余胶体金标记蛋白继续迁移，到对照线时，由于采用的胶体金标记蛋白与对照线上包被的蛋白能特异结合，因此，胶体金在对照线上聚集使对照线显色。即检测线和对照线都显色，表明待测液为阳性；如果，待测液中不存在靶标物质，那么，待测液迁移至检测线时，待测液中没有与检测线上包被的物质能够结合的成分，从而导致胶体金不会聚集于检测线，因此，检测线不会显色，但是对照线处仍然显色。即仅仅有对照线显色，表明待测液为阴性。 本发明试纸条，在高度方向上包括基板支撑层14、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层14上；所述反应试剂载体吸附层从沾液端5到手持端I依次为样品纤维垫7，金标纤维垫9，纤维素药膜6，手持端吸水材料垫8 ;在所述金标纤维垫9和手持端吸水材料垫8上覆盖有保护膜层。在所述纤维素药膜上印制有条状的检测线T-3和条状的对照线C-2，所述检测线检测线T-3和对照线C-2均呈与所述胶体金试纸条长度方向垂直的条状。其特征在于，在所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的人变性IgG ;在所述T线上包被有抗U链IgM和人变性IgG，所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG、T线上的抗U链IgM和人变性IgG的单位面积包被量比值为0. 133 0. 889 :5 :1。根据表I数据列表来看，在这个单位面积的包被量比值范围内，胶体金试纸条都是合格的，而在这个范围之外，则是不合格的。包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗U链IgM、人变性IgG的单位面积包被量比值为1:15:3，同时考虑在放大生产过程中的误差因素，以及成本因素，这个单位面积的包被量比值为较佳比值。包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗U链IgM、人变性IgG的单位面积包被量分别为1600ng / cm2, 24000ng / cm2,4800ng / cm2。同时考虑在放大生产过程中的误差因素，以及成本因素，这个单位面积的包被量为最佳包被量。本发明，优选在样品纤维垫I上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T 3平行的可视的MAX标志线4。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线4，以免引起假阳性。本发明，优选所述样品纤维垫7采用玻璃纤维棉，所述吸水材料垫8采用粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜6采用硝酸纤维素膜，所述金标纤维垫9采用吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本发明检测试纸条在检测速度和准确性。本发明，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。
本发明，优选基板支撑层14为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。本发明，优选样品纤维垫7的上表面及所述金标纤维垫9的下表面设一层无纺布10，11。用于适量、快速吸取液体，起到一定的缓冲作用。本发明，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。本发明试纸条的难度在于灵敏度和特异性不能两全，为了既保证灵敏度，又提高特异性，本发明技术方案采用抗体捕获法和双抗原夹心法并用的原理，解决了特异性差和灵敏度弱的问题。同时，与单独采用两种方法的测试条相比，二者合二为一节省了原材料材料，降低了成本，提高了使用的效率。
本发明试纸条采用抗体捕获法和双抗原夹心法并用的原理，并且结合免疫胶体金技术快速检测血清、血浆、全血样本中的类风湿因子(RF)。在硝酸纤维膜上包被人变性IgG和抗U IgM0即在包被T线时同时包被有抗ii IgM和人变性IgG，若单独用抗体捕获法就会出现检测类型窄出现导致的假阴性，单独用双抗原夹心法就会出现灵敏度弱而导致的低值标本不能检出，考虑类风湿因子是一种以人变性IgG为靶抗原而产生的自身抗体，抗体本身又主要为IgM型，于是用抗ii IgM抗体和人变性IgG同时捕捉自身抗体RF，实现了产品的高准确性，以及灵敏度和特异性的结合。另外在加样方法上我们采用1000倍稀释的方法，克服了产品特异性差和HOOK效应的现象。实施例2.试纸条的制备性能验证生物活性原料抗U链IgM，人变性lgG，抗人IgG的购买来源均为加拿大ArtronBioResearch Inc.进口试剂牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白(casein)购自Sigma。硝酸纤维素膜德国赛多利斯(Sartorius)公司试纸条的制备程序如下步骤I.抗]i链IgM与人变性IgG的混合如下配制抗ii链IgM与人变性IgG的混合液，用20mM PBS对抗y链IgM与人变性IgG进行稀释，配制成特定浓度从而使包被浓度如表I所示。步骤2.胶体金标记的人变性IgG的制备取40nm的胶体金溶液，按终浓度16 u I/ml加入0. 2M K2CO3,加入人变性IgG制备成特定浓度从而使包被浓度如表I所示，放置室温反应18分钟,然后按终浓度20 u I/ml加A 20%BSA的溶液，用于饱和游离的胶体金。IOOOOrpm离心30分钟，除去上清液中未结合的蛋白质。用1/10体积的0. 5M硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、0. 1%PVA)复溶沉淀的胶体金标记原液。工作溶液采用上述0. 5m硼酸溶液稀释，浓度为原液的15%。步骤3.试剂的包被硝酸纤维膜上包被抗U链IgM、人变性IgG和抗人IgG的方法将抗ii链IgM与人变性IgG的混合液和抗人IgG用包被机分别包被于T线和C线，C、T线之间的间距为4. Omm，C、T线宽度为0. 8mm，包被速度为40mm/s。干燥时间为6小时，温度为30°C，湿度彡35%。金标纤维层的标记将胶体金标记的人变性IgG溶液铺于30*30cm玻璃纤维垫上，加液量使玻璃纤维垫单位面积上的人变性IgG如表I所示，干燥时间为6小时，温度为30°C，湿度< 35%。表I为胶体金标人变性IgG /抗ii链IgM /人变性IgG的单位面积的包被量，其比例为 0. 133 0. 889 :5 :1。表I如下
权利要求
1.一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上；从沾液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫，在所述金标纤维垫和手柄段吸水材料垫上覆盖有保护膜层，在所述纤维素药膜上印制有条状的检测线T线和条状的对照线C线，所述检测线T线和所述对照线C线均呈与所述胶体金试纸条长度方向垂直的条状，其特征在于，在所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的人变性IgG ;在所述T线上包被有抗U链IgM和人变性IgG，所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG、T线上的抗U链IgM和人变性IgG的单位面积包被量比值为0. 133 0. 889 :5 :1。
2.根据权利要求I所述试纸条，其特征在于，包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗U链IgM、人变性IgG的单位面积包被量比值为1:15:3。
3.根据权利要求I所述试纸条，其特征在于，包被于所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG和包被于所述T线上的抗U链IgM、人变性IgG的单位面积包被量分别为1600ng / cm2,24000ng / cm2,4800ng / cm2。
4.根据权利要求I所述试纸条，其特征在于，在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T平行的可视的MAX标志线。
5.根据权利要求I所述试纸条，其特征在于，所述样品纤维垫采用玻璃纤维棉，所述吸水材料垫采用粗纤维吸水纸，所述金标纤维垫采用吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。
6.根据权利要求I所述试纸条，其特征在于，所述保护膜层为胶带。
7.根据权利要求I所述试纸条，所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。
8.权利要求1-7任一所述试纸条，还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附垫及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。
9.一种用于快速检测类风湿因子的试剂盒，其特征在于包括权利要求I 6任一所述的胶体金试纸条和样品稀释器皿。
全文摘要
本发明“一种用于快速检测类风湿因子的胶体金试纸条”，属于医用检测耗材。其特征在于，在所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的人变性IgG；在所述T线上包被有抗μ链IgM和人变性IgG，所述金标纤维垫上的胶体金标记的人变性IgG、T线上的抗μ链IgM和人变性IgG的单位面积包被量比值为0.133～0.88951。本发明试纸条在检测时抗体捕获法和双抗原夹心法原理并用，兼具灵敏性与特异性，并且结合免疫胶体金技术快速检测人血清、血浆或全血中的类风湿因子，具有简便、灵敏、准确的优点。
文档编号G01N33/558GK102707050SQ201210165040
公开日2012年10月3日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者孙茜, 聂丽芳 申请人:蓝十字生物药业(北京)有限公司