专利名称：葛根提取工艺、葛根素及葛根总黄酮测定方法
技术领域：
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种葛根提取工艺、葛根素及葛根总黄酮测定方法。
背景技术：
葛根，为豆科植物野葛，是中国南方一些省区的一种常食蔬菜，其味甘凉可口，常作煲汤之用。其主要成分是淀粉，此外还含有约12%的黄酮类化合物，包括大豆(黄豆)甙、大豆甙元、葛根素等10余种，并含有胡萝卜甙、氨基酸、香豆素类等，可作为药物应用。目前，运用于葛根素的提取方法主要有溶剂提取法、微波辅助萃取法、超声提取和超声水解法等，其主要缺点在于，提取效率低下，操作较为繁琐，葛根总黄酮提取率、葛根素提取率和浸膏得率普遍较低。
发明内容
本发明旨在克服上述现有技术中存在的技术问题，提出一种提取率高、测定方法可靠的葛根提取工艺、葛根素及葛根总黄酮测定方法。本发明采用的技术方案如下葛根提取工艺，其特征在于，包括如下步骤①、乙醇提取向葛根中加入60%乙醇，加热回流，于70°C条件下提取2次，得乙醇提取液；第一次提取时葛根与60%乙醇的重量比为12 1，提取时间为1.5h;第二次提取时葛根与60%乙醇的重量比为10 1，提取时间为Ih;②、树脂吸附将乙醇提取液在DlOl型大孔吸附树脂中进行吸附，DlOl型大孔吸附树脂与乙醇提取液的重量比为7 :1，吸附完成后用70%乙醇作为洗脱剂洗脱，70%乙醇与乙醇提取液的重量比为12 :1，再回收乙醇洗脱液；③、将乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味，浓缩液比重为I. 2 ；④、将浓缩液采用正丁醇萃取4次，浓缩液与4次正丁醇添加量的重量比为2 6 6:3:3，合并正丁醇萃取液；⑤、将萃取液再次浓缩，得浸膏，浸膏的比重为I. I I. 2 ;⑥、将浸膏烘干，得葛根素提取物。本发明将不同的提取方法进行比较后，筛选出较适合的提取方法为乙醇提取，然后采用正交试验法考察乙醇提取葛根的各影响因素，以多指标综合评分法进行数据分析，优选工艺条件，得到葛根提取的最佳条件为，从而为开发利用葛根资源提供依据。本发明还公开了葛根素及葛根总黄酮测定方法，包括如下步骤①、葛根素含量的HPLC测定色谱条件色谱柱为Hyper silODS C18柱,20mmX 4. 6mm, 5Lm,大连依利特科学仪器有限公司，检测波长为250nm，柱温为室温，流动相为体积比为25 75的甲醇和水，流速为I. OmL/min，理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4000 ；精密称取葛根素对照品8. 42mg置IOmL容量瓶中，以甲醇溶解定容；以此为母液，依次配成O. 0210,0. 0421,0. 0842,0. 168,0. 337mg/mL5 个浓度梯度的对照品溶液；分别吸取上述对照品溶液各5 μ L，按上述色谱条件进行测定；以峰面积积分值为纵坐标，葛根素对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；计算得回归方程为Y=I. 6+20870. TL, r = O. 99996 ； 葛根素在O. 0210 O. 337mg/mL时峰面积积分值与浓度线性关系良好；②、葛根总黄酮含量的UV测定精密称取葛根素对照品8. 23mg置IOmL量瓶中，以甲醇溶解定容；以此为母液，依次配成2. 06,4. 12,6. 18,8. 24、10. 3mg/mL5个浓度梯度的对照品溶液；分别测定250nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葛根素对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；计算得回归方程为Υ=69· 597Χ+0. 01463，r=0. 9998 ；总黄酮以葛根素计在O. 0021 O. 0103mg/mL线性关系良好；③、浸膏得率的测定取浸膏50mL，置已干燥至恒重的IOOmL蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内105°C干燥3h，取出置干燥器内冷却30min，迅速精密称定质量。本发明选择的测定方法，具有检测效率高，测定方法可靠等优点。
具体实施例方式一、提取实施例葛根提取工艺，包括如下步骤①、乙醇提取向葛根中加入60%乙醇(体积百分比，下同)，加热回流，于70°C条件下提取2次，得乙醇提取液；第一次提取时葛根与60%乙醇的重量比为12 1，提取时间为1.5h;第二次提取时葛根与60%乙醇的重量比为10 1，提取时间为Ih;②、树脂吸附将乙醇提取液在DlOl型大孔吸附树脂中进行吸附，DlOl型大孔吸附树脂与乙醇提取液的重量比为7:1，吸附完成后用70%乙醇(体积百分比，下同)作为洗脱剂洗脱，70%乙醇与乙醇提取液的重量比为12 :1，再回收乙醇洗脱液；③、将乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味，浓缩液比重为I. 2 ；④、将浓缩液采用正丁醇萃取4次，浓缩液与4次正丁醇添加量的重量比为2 6 6:3:3，合并正丁醇萃取液；⑤、将萃取液再次浓缩，得浸膏，浸膏的比重为I. I I. 2 ;⑥、将浸膏烘干，得葛根素提取物。
二、葛根素及葛根总黄酮测定方法实施例①、葛根素含量的HPLC测定色谱条件色谱柱为Hyper sil ODS C18柱,20mmX 4. 6mm, 5Lm,大连依利特科学仪器有限公司，检测波长为250nm，柱温为室温，流动相为体积比为25 75的甲醇和水，流速为1. OmL/min，理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4000 ；精密称取葛根素对照品8. 42mg置IOmL容量瓶中，以甲醇溶解定容；以此为母液，依次配成O. 0210,0. 0421,0. 0842,0. 168,0. 337mg/mL5 个浓度梯度的对照品溶液；分别吸取上述对照品溶液各5 μ L，按上述色谱条件进行测定；以峰面积积分值为纵坐标，葛根素对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；计算得回归方程为Y=1. 6+20870. TL, r = 0. 99996 ；葛根素在O. 0210 O. 337mg/mL时峰面积积分值与浓度线性关系良好；②、葛根总黄酮含量的UV测定精密称取葛根素对照品8. 23mg置IOmL量瓶中，以甲醇溶解定容；以此为母液，依次配成2. 06,4. 12,6. 18,8. 24、10. 3mg/mL5个浓度梯度的对照品溶液；分别测定250nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葛根素对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线；计算得回归方程为Y = 69. 597X+0. 01463，r = O. 9998 ；总黄酮以葛根素计在O. 0021 O. 0103mg/mL线性关系良好；③、浸膏得率的测定取浸膏50mL，置已干燥至恒重的IOOmL蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内105°C干燥3h，取出置干燥器内冷却30min，迅速精密称定质量。三、提取工艺条件的选择1、乙醇提取工艺条件的选择在整个提取过程中，提取所用乙醇的浓度和量以及提取时间对葛根有效成分的影响较大，故采用正交试验进一步优选醇提的最佳条件。按L9(34)正交表进行试验，因素水平见表I。称取葛根各20g，按L9 (34)正交试验设计表的条件进行试验。提取液滤过后合并，分别测葛根素、葛根总黄酮、浸膏得率，并进行多指标综合评分。评分时以各指标的最大值为参照将数据进行归一化，再给出不同的权重。葛根素和总黄酮的权重系数设为O. 4。在有效成分明显的前提下，浸膏得率越高则纯度越低，因此设负权重系数为-O. 2。以综合值进行统计分析，结果见表2。其中，综合评分Y = O. 4X1 X 100/130. 2+0. 4X2 X 100/51. 03-0. 2X3 X 100/0. 2604。表I正交试验因素水平
权利要求
1.葛根提取工艺，其特征在于，包括如下步骤 ①、乙醇提取 向葛根中加入60%乙醇，加热回流，于70°C条件下提取2次，得乙醇提取液； 第一次提取时葛根与60%乙醇的重量比为12:1，提取时间为I. 5 h ; 第二次提取时葛根与60%乙醇的重量比为10:1，提取时间为I h ； ②、树脂吸附 将乙醇提取液在DlOl型大孔吸附树脂中进行吸附，DlOl型大孔吸附树脂与乙醇提取液的重量比为7 :1，吸附完成后用70%乙醇作为洗脱剂洗脱，70%乙醇与乙醇提取液的重量比为12 :1，再回收乙醇洗脱液； ③、将乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇至浓缩液无醇味，浓缩液比重为I.2 ； ④、将浓缩液采用正丁醇萃取4次，浓缩液与4次正丁醇添加量的重量比为26 6 3 3，合并正丁醇萃取液； ⑤、将萃取液再次浓缩，得浸膏，浸膏的比重为I.I I. 2 ; ⑥、将浸膏烘干，得葛根素提取物。
2.葛根素及葛根总黄酮测定方法，其特征在于，包括如下步骤 ①、葛根素含量的HPLC测定 色谱条件色谱柱为Hyper sil ODS C18柱,20 mmX4. 6 mm, 5 Lm,大连依利特科学仪器有限公司，检测波长为250nm，柱温为室温，流动相为体积比为25 75的甲醇和水，流速为I.0 mL/min，理论塔板数按葛根素峰计算应不低于4000 ； 精密称取葛根素对照品8. 42 mg置10 mL容量瓶中，以甲醇溶解定容； 以此为母液，依次配成0. 0210、0. 0421、0. 0842、0. 168,0. 337 mg/mL 5个浓度梯度的对照品溶液； 分别吸取上述对照品溶液各5 UL，按上述色谱条件进行测定；以峰面积积分值为纵坐标，葛根素对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线； 计算得回归方程为Y=L 6+20870. 7X, r=0. 99996 ； 葛根素在0. 0210 0. 337 mg/mL时峰面积积分值与浓度线性关系良好； ②、葛根总黄酮含量的UV测定 精密称取葛根素对照品8. 23 mg置10 mL量瓶中，以甲醇溶解定容； 以此为母液，依次配成2.06、4.12、6.18、8.24、10.3 mg/mL 5个浓度梯度的对照品溶液； 分别测定250 nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葛根素对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线； 计算得回归方程为 Y=69. 597X+0. 01463，r=0. 9998 ； 总黄酮以葛根素计在0. 0021 0. 0103mg/mL线性关系良好； ③、浸膏得率的测定 取浸膏50 mL，置已干燥至恒重的100 mL蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱内105 °C干燥,3 h，取出置干燥器内冷却30min，迅速精密称定质量。
全文摘要
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种葛根提取工艺、葛根素及葛根总黄酮测定方法。提取工艺依次采取两次乙醇提取、树脂吸附、浓缩回收乙醇，正丁醇萃取、浓缩烘干等加工工序。本发明将不同的提取方法进行比较后，筛选出较适合的提取方法为乙醇提取，然后采用正交试验法考察乙醇提取葛根的各影响因素,以多指标综合评分法进行数据分析,优选工艺条件，得到葛根提取的最佳条件为，从而为开发利用葛根资源提供依据。
文档编号G01N30/88GK102973643SQ201210544150
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月14日 优先权日2012年12月14日
发明者朱峰, 朱方敏, 朱莉, 郭俊, 刘霞 申请人:安徽珠峰生物科技有限公司