一种氧化还原水溶胶、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种氧化还原水溶胶，采用如下方法制备：用高分子溶胶和氨基硅烷偶联剂制备有机无机复合溶胶，将此复合溶胶与电子介体混合制备氧化还原水溶胶。本发明还涉及一种用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的制备方法及应用，通过所制备的氧化还原水溶胶，把微生物和电子介体同时固定在电极上，制备一体化微生物电极，并将一体化微生物电极应用在水体生物毒性的快速检测和即时监测上。采用由本发明制备的一体化微生物电极构建的电化学传感器系统，可即时监测水体生物毒性的改变和快速检测水体生物毒性大小，达到即时、连续、快速的检测，具有分析灵敏度高、成本低廉、操作简单、便于携带等特点。
【专利说明】一种氧化还原水溶胶、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物传感器【技术领域】，具体涉及用于水体生物毒性快速检测的氧化还原水溶胶、一体化微生物电极的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]随着近代工业的发展，日益增多的环境污染给水生态系统造成了很大的冲击，对其进行毒性检测已经成为评价水环境质量的重要环节。目前，用于污染物毒性测试的方法主要有理化方法和生物学方法。传统理化方法可以精确定量分析某一种或某一类污染物的种类和含量；但这些方法不能直接、全面地反映有毒物质对环境的综合影响。生物学方法是通过检测毒性物质对生物生理行为的改变，进而反映水体毒性大小，其能较全面地反映废水中复合污染物的联合毒性作用，并能充分了解各种环境因子(如PH值、温度、溶解度等)对污染物毒性效应的具体影响，有很大的优势。因此，在水污染研究中，作为常规理化方法的有效补充，使用生物学方法进行生物毒性检测已经成为监测和评价水体环境质量的重要手段之一。
[0003]近些年兴起了介体型微生物传感器应用在生物毒性检测领域的研究。这种方法具有成本低，易操作，检测灵敏等特点。它不仅克服了国标方法中发光法易受体系浊度的影响，生物需氧量法(BOD)中溶解氧浓度低，不稳定等缺点。并且具有便携、灵敏、快速和可实时在线分析检测等特点，有望用于大量污染水体的综合急性生物毒性连续在线检测。
[0004]对于介体型传感器，电子介体基本都是分散在溶液中。专利号为200810036317.5的中国专利《水质毒性生物传感器的微生物电极制备方法》公开了一种采用双面胶制备微生物传感器电极的方法，此方法生产的电极上只包含微生物菌群，在传感器的检测过程中依然需要依赖分散在溶液中的电子介体，且电子介体分散在溶液中消耗量较大，不可避免的对检测样品或参比电极有一定的污染和影响。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的第一个技术问题是制备一种氧化还原水溶胶，这种溶胶克服了有机材料溶胀性和无机材料易脆裂的缺点，综合了两者的优点，并且把电子介体固定在了溶胶里，制备方法简单，生物兼容性好。
[0006]本发明要解决的第二个技术问题是提供一种用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的制备方法，本方法采用由有机无机复合溶胶制备的氧化还原水溶胶将微生物菌群和电子介体固定在电极板上，简化了电极的操作步骤，同时减少了电子介体的消耗量，降低了电子介体对检测样品和参比电极的污染，且易于电化学传感器的仪器化和现场检测，易于检测设备的小型化、便携化，提高检测的方便性及速度，可以用于无试剂的检测，并可作成一次性电极使用。
[0007]本发明要解决的第三个技术问题是用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的应用，采用氧化还原水溶胶固定微生物的一体化微生物电极用于制备即时监测和监测水体生物毒性的系统，该系统包括工作电极、对电极、参比电极、电解池，在即时监测水体生物毒性的改变和检测水体生物毒性大小的过程中，达到即时、在线、连续的检测,不仅可以实现快速检测，且具有分析灵敏度高、成本低廉、操作简单、便于携带等特点。
[0008]为了解决第一个技术问题，本发明采用如下方法制备氧化还原水溶胶:将天然高分子材料溶解在水中配制有机溶液，调节PH至:3-7，加入氨基硅烷偶联剂，在3(T70°C下搅拌至形成均匀的无机有机复合溶胶；取无机有机复合溶胶与电子介体水溶液混合，搅拌2小时以上,形成氧化还原水溶胶。
[0009]优选的，所述高分子材料为明胶或壳聚糖；所配制的有机溶液中天然高分子材料的质量浓度为10mg/ml~100mg/ml。
[0010]优选的，所述氨基硅烷偶联剂选自氨丙基三甲氧基硅烷(APTMOS)、氨丙基三乙氧基硅烷(APTEOS)或N- ( β -氨乙基)-Y -氨丙基三甲氧基硅烷；优选的，所述复合溶胶中氨基硅烷偶联剂的质量分数为0.5%~5%。
[0011]优选的，所述电子介体包括苯醌、2，6-二甲基苯醌或甲萘醌；优选的，所述电子介体水溶液浓度为0.01mol/L^0.lmol/L ;所述无机有机复合溶胶与电子介体水溶液混合的体积比为10:1~1:10。
[0012]为了解决第二个技术问题，本发明采用如下方法制备用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极，具体 包括如下步骤:
[0013](I)培养微生物菌液；
[0014](2)取氧化还原水溶胶与微生物菌液混合均匀，得到混合溶胶；
[0015](3)取混合溶胶滴涂在电极表面，干燥，清洗，再次干燥，得到氧化还原水溶胶固定微生物的一体化微生物电极。
[0016]优选地，所述微生物菌液为大肠杆菌菌液、酵母菌菌液或大肠杆菌和酵母菌的混合菌液；优选地，所述氧化还原水溶胶与微生物菌液混合的体积比为1:3~3:1 ;优选地，所述电极包括金电极、钼电极、玻碳电极或硼掺杂的金刚石薄膜电极。
[0017]优选地，所述混合菌液中大肠杆菌和酵母菌的混合比例为大肠杆菌40-100份重量、酵母菌20-80份重量。
[0018]为了解决第三个技术问题，本发明将所制备的一体化微生物电极应用于水体生物毒性快速检测。
[0019]所述一体化微生物电极在水体生物毒性快速检测上的应用，其具体应用如下:在三电极体系中，工作电极为制备的氧化还原水溶胶固定微生物的一体化微生物电极，在恒电压计时电流模式下，加入细菌呼吸营养溶液，设定工作电压，待背景电流稳定后，加入待检测液，记录电流的改变，根据电流抑制曲线中电流和抑制率关系表达式:抑制率％= (1-12/I1) X 100%，I1为加入待检测溶液前的稳态电流；12为加入待检测溶液后的稳态电流，计算抑制率；通过抑制率与待检测溶液生物毒性之间的关系，进行即时监测和检测水体的生物毒性。
[0020]优选的，所述设定的工作电压为0.2疒0.7V。
[0021]本发明具有如下有益效果:
[0022]1.用于固定微生物组分的固定材料对于传感器性能影响很大，本发明制备的氧化还原水溶胶，克服了有机材料溶胀性和无机材料易脆裂的缺点，综合了两者的优点，并且把电子介体固定在了溶胶里，制备方法简单，生物兼容性好。
[0023]2.通过氧化还原水溶胶，可以同时把电子介体和微生物固定在电极上，制备出了一体化微生物电极。一体化微生物电极使用过程中，省去了向溶液中加入电子介体并等待电流稳定的步骤，缩短了检测时间，同时还减少了电子介体的消耗量，这样能避免电子介体对检测样品或者参比电极的污染，且易于电化学传感器的仪器化和现场检测，易于检测设备的小型化、便携化，提高检测的方便性及速度，且可用于无试剂的检测，并可作成一次性电极使用。
[0024]3.采用本发明的氧化还原水溶胶固定微生物的一体化微生物电极制备的水体生物毒性监测和监测系统，可用于即时监测水体生物毒性的改变和检测水体生物毒性大小，达到即时、在线、连续的检测，不仅实现了快速检测，且具有分析灵敏度高、成本低廉、操作简单、便于携带等特点。
【专利附图】
【附图说明】
[0025]本发明所包含的附图用于提供对本发明的进一步理解。
[0026]图1为实例I的检测不同浓度Hg2+的计时电流曲线
[0027]图2为实例I的Hg2+浓度-抑制率响应曲线
[0028]图3为实例2的重金属混合物毒性抑制率图
[0029]图4为实例5的DCP2+浓度-抑制率响应曲线
[0030]图5为实例6的Ni2+浓度-抑制率响应曲线
【具体实施方式】
[0031]为了更好的理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
[0032]实施例1:
[0033]1、一种氧化还原水溶胶的制备:
[0034]将明胶溶解在水中得到的质量浓度为50mg/ml的溶液；调节pH至4，加入氨丙基三甲氧基硅烷(APTMOS)，溶液中APTMOS的质量分数为1%，在50°C下搅拌至形成均匀的复合溶胶；取复合溶胶与0.04mol/L苯醌溶胶混合(体积比为4:1)，搅拌12小时，至形成氧化还原水溶胶；
[0035]2、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的制备:
[0036](I)微生物菌液:以大肠杆菌(E.coli)为受试微生物，接种于液体培养基中。大肠杆菌液体培养基成分(质量分数):0.3%牛肉膏，1%蛋白胨，0.5%氯化钠。培养16小时，离心清洗得到湿菌体，分散在磷酸盐缓冲液中，保存在4°C下；
[0037](2)取合成的氧化还原水溶胶，与大肠杆菌菌液以体积比1:1的比例混合均匀，得到氧化还原水溶胶与大肠杆菌的混合溶胶；
[0038](3)取混合溶胶滴涂在电极表面，在室温下干燥；然后用磷酸盐缓冲液清洗两次，室温干燥，得到氧化还原水溶胶固定微生物的一体化电极。
[0039]3、一体化微生物电极应用于水体生物毒性的即时监测与快速检测:[0040]通过一个不锈钢架子将一个一体化微生物电极固定在一底部有圆形小孔的电解池的底部外面，在该电极的另一面相接有一不锈钢底板；所述的一体化电极与所述电解池之间用橡胶密封圈(橡胶密封圈的外径不大于工作电极的边长，垫圈直径为3mm)进行密封；将作为对电极的钼电极和作为参比电极的银/氯化银电极置于所述电解池之中，以所述一体化微生物电极作为工作电极；电化学检测装置组装完成后，由下到上依次为不锈钢底板、工作电极、橡胶密封圈、电解池。
[0041]选取pH=7.0、含有 10mmol/L 乳酸钠、10mmol/L 丁二酸钠、10mmol/L 葡萄糖的0.01mol/L磷酸盐缓冲液为细菌呼吸营养溶液。
[0042]向所述的三电极体系的电化学检测装置的电解池中加入IOml细菌呼吸营养溶液。然后在0.5V(vs.Ag/AgCl)下测定电流变化。大约600s左右电流信号稳定后,加入不同浓度的待测溶液进行毒性测试。此过程由电化学工作站记录该微生物传感器电流的变化曲线，根据电流抑制曲线，可计算出不同浓度梯度对应的抑制率大小。抑制率和抑制物质浓度之间关系表达式为:抑制率^f(1-12A1) X 100%
[0043]配置不同浓度的Hg2+溶液作为待测溶液进行水质急性生物毒性测试，计时电流曲线如图1所示，结果显示，可以看到加入Hg2+后20秒内稳态电流迅速降低，表明制备的一体化微生物电极可以在很短的时间内显示水体中毒性物质浓度的突变，在加入有毒物质后电流有不同程度地下降，这表明重金属离子Hg2+对大肠杆菌有很明显的毒性效应。通过浓度-抑制率响应曲线图2，用内插法，得到Hg2+半抑制浓度IC5tl为21.2μ g/ml。由此可见，一体化微生物电极可实现水体生物毒性的即时监测和快速检测。
[0044]实施例2 [0045]操作方法和步骤同实施例1,唯一的变化是:在应用一体化微生物电极对水体生物毒性进行监测和检测的过程中，向体系中加入Cu2+和Zn2+的混合物、Cu2+和Cd2+的混合物、Zn2+和Cd2+的混合物以代替Hg2+溶液(混合物中每种重金属的浓度都为40 μ g/ml)。结果显示，在加入不同二元重金属混合物后响应电流都有明显下降，通过计算得到三组二元重金属混合物的的抑制率如图3所示，毒性大小顺序为CU2+-Zn2+>Zn2+-Cd2+>CU2+-Cd2+
[0046]实施例3
[0047]1、一种氧化还原水溶胶的制备:
[0048]将明胶溶解在水中得到的质量浓度为10mg/ml的溶液；调节pH至3，加入氨丙基三甲氧基硅烷(APTMOS)，溶液中APTMOS质量分数为0.5%，在60°C下搅拌至形成均匀的复合溶胶；取浓度为0.01mol/L甲萘醌水溶液与制备的复合溶胶混合(体积比为1:10)，搅拌12小时，至形成氧化还原水溶胶。
[0049]2、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极及其制备:
[0050](I)微生物菌液:以大肠杆菌(E.coli)为受试微生物，接种于液体培养基中。大肠杆菌液体培养基成分(质量分数):0.3%牛肉膏，1%蛋白胨，0.5%氯化钠。培养16小时，离心清洗得到湿菌体，分散在磷酸盐缓冲液中，保存在4°C下
[0051](2)取合成的氧化还原水溶胶，与大肠杆菌菌液以体积比1:3的比例混合均匀，得到氧化还原水溶胶与大肠杆菌的混合溶胶。
[0052](3)取混合溶胶滴涂在电极表面，在室温下干燥；然后用磷酸盐缓冲液清洗两次，室温干燥，得到氧化还原水溶胶固定微生物的一体化电极。[0053]3、一体化微生物电极应用于水体生物毒性的即时监测与快速检测:
[0054]通过一个不锈钢架子将一个一体化微生物电极固定在一底部有圆形小孔的电解池的底部外面，在该电极的另一面相接有一不锈钢底板；所述的一体化电极与所述电解池之间用橡胶密封圈(橡胶密封圈的外径不大于工作电极的边长，垫圈直径为3mm)进行密封；将作为对电极的钼电极和作为参比电极的银/氯化银电极置于所述电解池之中，以所述一体化微生物电极作为工作电极；电化学检测装置组装完成后，由下到上依次为不锈钢底板、工作电极、橡胶密封圈、电解池。
[0055]选取pH=7.0、含有 10mmol/L 乳酸钠、10mmol/L 丁二 酸钠、10mmol/L 葡萄糖的0.01mol/L磷酸盐缓冲液为细菌呼吸营养溶液。
[0056]向所述的三电极体系的电化学检测装置的电解池中加入IOml细菌呼吸营养溶液。然后在0.2V(vs.Ag/AgCl)下测定电流变化。大约600s左右电流信号稳定后，加入不同浓度待测样品进行毒性测试。此过程由电化学工作站记录该微生物传感器电流的变化曲线，根据电流抑制曲线，可计算出不同浓度梯度对应的抑制率大小。抑制率和抑制物质浓度之间关系表达式为:抑制率qZK1-12A1) X 100%
[0057]配置80 μ g/ml的Cu2+作为被测溶液进行水质急性生物毒性测试，测得80 μ g/ml的Cu2+的抑制率为37.1%。
[0058]实施例4
[0059]操作方法和步骤同实施例3，与实施例3的不同之处在于:在制备氧化还原水溶胶过程中,加入的电子介体水溶液是0.02mol/L2, 6-二甲基苯醌。
[0060]配置80 μ g/ml的Cu2+作为被测溶液进行水质急性生物毒性测试，测得80 μ g/ml的Cu2+的抑制率为28.9%。
[0061]实施例5
[0062]1、一种氧化还原水溶胶的制备:
[0063]将壳聚糖溶解在水中得到的质量浓度为10mg/ml的溶液；调节pH至7，加入氨丙基三甲氧基硅烷(APTMOS)，溶液中APTMOS质量分数为5%，在60°C下搅拌至形成均匀的复合溶胶；取浓度为0.lmol/L苯醌水溶液与制备的复合溶胶混合(体积比为1:10)，搅拌12小时，至形成氧化还原水溶胶。
[0064]2、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极及其制备:
[0065](I)微生物菌液:以酵母菌为受试微生物，接种酿酒酵母(S.cerevisiae)于液体培养基中，液体培养基成分为(质量浓度):1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖，生长24h，离心清洗得到湿菌体，分散在磷酸盐缓冲液中，保存在4°C下。
[0066](2)取合成的氧化还原水溶胶，与酵母菌菌液以体积比1:3的比例混合均匀，得到氧化还原水溶胶与酵母菌的混合溶胶。
[0067](3)取混合溶胶滴涂在电极表面，在室温下干燥；然后用磷酸盐缓冲液清洗两次，室温干燥，得到氧化还原水溶胶固定微生物的一体化电极。
[0068]3、一体化微生物电极应用于水体生物毒性的即时监测与快速检测:
[0069]通过一个不锈钢架子将一个一体化微生物电极固定在一底部有圆形小孔的电解池的底部外面，在该电极的另一面相接有一不锈钢底板；所述的一体化电极与所述电解池之间用橡胶密封圈(橡胶密封圈的外径不大于工作电极的边长，垫圈直径为3mm)进行密封；将作为对电极的钼电极和作为参比电极的银/氯化银电极置于所述电解池之中，以所述一体化微生物电极作为工作电极；电化学检测装置组装完成后，由下到上依次为不锈钢底板、工作电极、橡胶密封圈、电解池。
[0070]选取pH=7.0、含有 10mmol/L 乳酸钠、10mmol/L 丁二 酸钠、10mmol/L 葡萄糖的0.01mol/L磷酸盐缓冲液为细菌呼吸营养溶液。
[0071]向所述的三电极体系的电化学检测装置的电解池中加入IOml细菌呼吸营养溶液。然后在0.7V(vs.Ag/AgCl)下测定电流变化。大约600s左右电流信号稳定后，加入不同浓度待测样品进行毒性测试。此过程由电化学工作站记录该微生物传感器电流的变化曲线，根据电流抑制曲线，可计算出不同浓度梯度对应的抑制率大小。抑制率和抑制物质浓度之间关系表达式为:抑制率qZK1-12A1) X 100%
[0072]配置不同浓度的3，5- 二氯苯酚(DCP)作为被测溶液进行水质急性生物毒性测试，如图4所示，由测试的抑制率结果得到DCP浓度-抑制率响应曲线，通过内插法，得到DCP半抑制浓度IC5tl为54.3 μ g/ml。
[0073]实施例6
[0074]1、一种氧化还原水溶胶的制备:
[0075]将明胶溶解在水中得到的质量浓度为100mg/ml的溶液；调节pH至5，加入氨丙基三乙氧基硅烷(APTEOS)，溶液中APTEOS的质量分数为3%，在50°C下搅拌至形成均匀的复合溶胶；取浓度为0.01mol/L苯醌水溶液与制备的复合溶胶混合(体积比为10:1)，搅拌12小时，至形成氧化还原水溶胶。
[0076]2、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极及其制备:
[0077](I)微生物菌液:以大肠杆菌(E.coli)和酿酒酵母(S.cerevisiae)的混合菌株作为受试微生物，取冷冻干燥的大肠杆菌(50份)和酿酒酵母(20份)进行菌株混合复配。取复配好的混合菌株加入磷酸缓冲溶液中，保存在4°C下。
[0078](2)取合成的氧化还原水溶胶，与混合菌株菌液以体积比3:1的比例混合均匀，得到氧化还原水溶胶与混合菌株的混合溶胶。
[0079](3)取混合溶胶滴涂在电极表面，在室温下干燥；然后用磷酸盐缓冲液清洗两次，室温干燥，得到氧化还原水溶胶固定微生物的一体化电极。
[0080]3、用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极应用于水体生物毒性的即时监测与快速检测:
[0081]通过一个不锈钢架子将一个一体化微生物电极固定在一底部有圆形小孔的电解池的底部外面，在该电极的另一面相接有一不锈钢底板；所述的一体化电极与所述电解池之间用橡胶密封圈(橡胶密封圈的外径不大于工作电极的边长，垫圈直径为3mm)进行密封；将作为对电极的钼电极和作为参比电极的银/氯化银电极置于所述电解池之中，以所述一体化微生物电极作为工作电极；电化学检测装置组装完成后，由下到上依次为不锈钢底板、工作电极、橡胶密封圈、电解池。
[0082]选取pH=7.0、含有 10mmol/L 乳酸钠、10mmol/L 丁二 酸钠、10mmol/L 葡萄糖的
0.01mol/L磷酸盐缓冲液为细菌呼吸营养溶液。
[0083]向所述的三电极体系的电化学检测装置的电解池中加入IOml细菌呼吸营养溶液。然后在0.3V(vs.Ag/AgCl)下测定电流变化。大约600s左右电流信号稳定后,加入不同浓度待测样品进行毒性测试。此过程由电化学工作站记录该微生物传感器电流的变化曲线，根据电流抑制曲线，可计算出不同浓度梯度对应的抑制率大小。抑制率和抑制物质浓度之间关系表达式为:抑制率qZK1-VI1) X 100%
[0084]配置不同浓度的Ni2+溶液作为被测溶液进行水质急性生物毒性测试，如图5所示，由测试的抑制率结果得到Ni2+浓度-抑制率响应曲线，通过内插法，得到Ni2+半抑制浓度IC50 为 86.2 μ g/ml。
[0085]显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
【权利要求】
1.一种氧化还原水溶胶，其特征在于，通过下述方法制备:将天然高分子材料溶解在水中配制有机溶液，调节pH至:3~7，加入氨基硅烷偶联剂，在30~70°C下搅拌至形成均匀的无机有机复合溶胶；取无机有机复合溶胶与电子介体水溶液混合，搅拌2小时以上，形成氧化还原水溶胶。
2.如权利要求1所述的氧化还原水溶胶，其特征在于，优选的，所述高分子材料为明胶或壳聚糖；所配制的有机溶液中天然高分子材料的质量浓度为lOmg/mflOOmg/ml。
3.如权利要求1所述的氧化还原水溶胶，其特征在于，优选的，所述氨基硅烷偶联剂选自氨丙基三甲氧基硅烷(APTMOS)、氨丙基三乙氧基硅烷(APTEOS)或Ν-(β-氨乙基)-Y -氨丙基三甲氧基硅烷；优选的，所述无机有机复合溶胶中氨基硅烷偶联剂的质量分数为0.5%~5%。
4.如权利要求1所述的氧化还原水溶胶，，其特征在于，所述电子介体包括苯醌、2，6- 二甲基苯醌或甲萘醌；优选地，所述电子介体水溶液浓度为0.01mol/L^0.lmol/L ;所述无机有机复合溶胶与电子介体水溶液混合的体积比为10: f 1:10。
5.采用权利要求1制备的氧化还原水溶胶制备用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)培养微生物菌液； (2)取氧化还原水溶胶与微生物菌液混合均匀，得到混合溶胶； (3)取混合溶胶滴涂在电极表面，干燥，清洗，再次干燥，得到氧化还原水溶胶固定微生物的一体化微生物电极。
6.如权利要求5所述的制备用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的方法，其特征在于，优选地，所述微生物菌液为大肠杆菌菌液、酵母菌菌液或大肠杆菌和酵母菌的混合菌液；优选地，所述氧化还原水溶胶与微生物菌液混合的体积比为1:3~3:1 ;优选地，所述电极包括金电极、钼电极、玻碳电极或硼掺杂的金刚石薄膜电极。
7.如权利要求6所述的制备用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的方法，其特征在于，优选地，所述混合菌液中大肠杆菌和酵母菌的混合比例为大肠杆菌40-100份重量、酵母菌20-80份重量。
8.一种利用如权利要求5制备的用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的应用，其特征在于，用于水体生物毒性快速检测。
9.如权利要求8所述的一种用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的应用，其特征在于:在三电极体系中，工作电极为制备的氧化还原水溶胶固定微生物的一体化微生物电极，在恒电压计时电流模式下，加入细菌呼吸营养溶液，设定工作电压，待背景电流稳定后，加入待检测液，记录电流的改变，根据电流抑制曲线中电流和抑制率关系表达式:抑制率^F(1-12A1) X100%, I1为加入待检测溶液前的稳态电流；12为加入待检测溶液后的稳态电流，计算抑制率；通过抑制率与待检测溶液生物毒性之间的关系，进行即时监测和检测水体的生物毒性。
10.如权利要求9所述的一种用于水体生物毒性快速检测的一体化微生物电极的应用，优选的，所述设定的工作电压为0.2V、.7V。
【文档编号】G01N27/327GK104007154SQ201310057152
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2013年2月22日 优先权日:2013年2月22日
【发明者】只金芳, 李久铭, 钱俊 申请人:中国科学院理化技术研究所