一种快速高效的丛枝菌根真菌染色的方法与流程

技术特征：
1.一种快速高效的丛枝菌根真菌染色并确定AMF侵染率的方法，按照下述步骤进行：A、固定：将采集的植物根样在尼龙网中清洗干净，每5g根样倒入FAA固定液50ml，并用玻璃棒轻压根样，使其完全浸泡在FAA固定液中，固定4h以上；如果采集植物根样后可以立即进行下一步处理，则省略该步骤；B、消化：将采集的植物根样或FAA固定液中的根样冲洗干净后，按每5g根样加入10％W/VKOH溶液50ml，在121℃高压灭菌5~10min，以除去根样中的细胞质，经过消化后根样呈透明状，以便于染色观察；C、漂洗：在室温冷却后，将根样从KOH溶液中取出，用蒸馏水冲洗干净，若KOH处理后根样的颜色为褐色或深黄色，则将根样置于250ml三角烧瓶中，按每5g根样加入H2O2漂洗液100ml，H2O2漂洗液为分析纯，有效含量不少于3%W/V，漂白根样5~10min；若步骤B消化处理后的根样为无色或半透明状，则省略漂洗步骤，直接进行下一步的酸化处理；D、酸化：然后将根样置于150ml三角烧瓶中，按每5g根样加入1％W/VHCl50ml，酸化3～5min；E、染色：将根样取出冲洗干净后置于150ml三角烧瓶中，按每5g根样加入0.1％W/V台盼蓝染色液50ml，煮沸10min；F、脱色：待冷却后，将根样取出，用蒸馏水冲洗掉染色液，然后将根样置于250ml三角烧瓶中，按每5g根样加入50％W/V乳酸溶液100ml，脱色10min以上；G、观察：将染色后的根样段切成1cm，于光学显微镜下观察，凡出现菌丝、孢子或者丛枝AMF结构，就将其计成已被侵染根段，计算AMF侵染率；其中所述的FAA固定液配制方法为甲醛、冰醋酸、50％W/V乙醇按体积比为10:5:85，混匀，试剂瓶盛放，常温保存；其中所述的0.1％W/V台盼蓝染色液为按每0.3gTrypanblue溶于300ml脱色液中，混合均匀；其中所述的根样为酢浆草根样、狗尾草根样、大叶黄杨根样或加拿大一枝黄花根样。