一种测定含有3,5,6-三氯-2-吡啶醇农药残留样品的前处理方法
【专利摘要】本发明公开了一种含有3,5,6-三氯-2-吡啶醇(TCP)农药残留的韭菜样品测定前处理方法，它是准确称取粉碎样品10-20g于250mL具塞三角瓶中，加入酸化乙酸乙酯水混合溶液，振荡提取后收集有机相，浓缩近干，以酸化乙腈洗脱，经石墨化碳氨基柱净化后，用甲醇+0.1％甲酸水(50+50，V+V)溶解，过0.22μm滤膜待测。本发明公开的处理方法，可对韭菜中3,5,6-三氯-2-吡啶醇做处理，方法无需衍生化，测定速度快，成本低，灵敏度、准确度、稳定性和可靠性高。
【专利说明】-种测定含有3,5,6-三氯-2-吡啶醇农药残留样品的前处 理方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于农药残留量的测定【技术领域】，涉及植物性食品中农药残留是否超标的 测定方法更具体的说，是一种含有3, 5,6-三氯-2-吡啶醇农药残留的韭菜样品测定前的处 理方法。
【背景技术】：
[0002] 农药残留指的是在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬 菜、果品、畜产品、水产品中以及土壤和水体中的现象。农药残留问题是随着农药大量生产 和广泛使用而产生的。目前使用的农药，有些在较短时间内可以通过生物降解成为无害物 质，而一些有机磷类农药却难以降解，是残留性强的农药。蔬菜农药残留超标，会直接危及 人体的神经系统和肝、肾等重要器官。同时残留农药在人体内蓄积，超过一定量度后会导致 一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至会诱发血管疾病、糖尿病和癌症等。由于农药残留 对人类和生物危害很大，各国对农药的施用都进行严格的管理，并对食品中农药残留容许 量作了规定。
[0003] 毒死蜱具有触杀、毒熏作用，属于广谱性有机磷杀虫杀螨剂，是世界最广泛应用的 杀虫剂之一，能引起人体胆碱酯酶的抑制，蓄积于神经系统后出现恶心、头晕等症状，被用 于粮谷，蔬菜和花卉等众多大田作物和经济作物中。3,5,6_三氯-2-吡啶醇（TCP)是毒死 蜱的有毒代谢产物，研究表明，TCP的毒性在很多情况下大于其母体毒死蜱。例如TCP对土 壤微生物的毒性影响比毒死蜱高出2倍多，对水虱的毒性大于毒死蜱2-3倍，且与毒死蜱有 协同作用。另外TCP的水溶性较大，比毒死蜱更容易渗人地下水，从而污染水体。
[0004] 关于3, 5,6-三氯-2-吡啶醇（TCP)前处理方法研究目前主要集中在生物样品和 环境样品，例如血液，尿液，水体和土壤，对食品中该农药的前处理研究不多，主要集中于水 稻等简单基质样品的测定，而且其前处理过程需要对目标化合物进行衍生化反应，过程较 为繁琐复杂。另因毒死蜱在韭菜中的应用更为广泛，因而有必要对此类复杂基质样品中TCP 的前处理方法，特别是非衍生化处理方法进行优化。
[0005] 本方法主要通过液液分配和固相萃取净化技术处理样品，建立了韭菜样品中3，5， 6-三氯-2-吡啶醇（TCP)的前处理方法，选用超高效液相色谱串联质谱联用技术对样品进 行测定。该方法有效消除了韭菜样品基质效应对方法检测的不利影响，使检测方法具有更 高的通用性。方法在5?1000ug/L浓度范围内线性良好，在5?500ug/kg添加范围内，平 均回收率达到80%以上，相对标准偏差不大于10%，完全满足农药多残留分析方法要求， 实现了简便，快速，准确的磺酰脲类除草剂多作物多残留分析要求。
【发明内容】
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[0006] 本专利所描述的含有3, 5,6-三氯-2-吡啶醇农药残留的韭菜样品测定前处理方 法，不仅可以用来测定韭菜样品中农药残留量，而且对黄瓜，甘蓝等其他植物性食品也同样 适用。
[0007] 具体是使用有机溶剂提取样品中的3, 5,6-三氯-2-吡啶醇农药残留，通过液液分 配和固相萃取进行净化，利用旋转蒸发将净化后的有机溶剂完全浓缩至干并定容，最后采 用液相质谱质谱联用仪检测。
[0008] 本发明更加详细的制备方法如下：
[0009] 1样品前处理方法
[0010] 1.1 提取
[0011] 准确称取粉碎样品10-20g(精确至O.Olg)于250mL具塞三角瓶中，加入 10mL-20mL水，0. lmL-0. 25mL冰乙酸和30mL-50mL乙酸乙酯，振荡提取0. 5h-2h，收集提取液 于100mL具塞量筒中，加入5g-15g氯化钠，振摇混匀后静置10分钟-30分钟，吸取上清液 10mL-20mL，浓缩至干，用lmL-2mL乙腈溶解，待净化。
[0012] I·2 净化
[0013] 将待净化液加入到经5mL-10mL乙腈活化的石墨化碳氨基柱上，待其流干后，用 5mL乙腈和5mL0. 2% -0. 5%甲酸酸化的乙腈溶液淋洗，再用40mL0. 2% -0. 5%甲酸酸化的 乙腈溶液洗脱，收集所有洗脱液。将其在40°C下浓缩至干，用lmL-4mL甲醇+0. 1%甲酸水 (50+50, V+V)溶解，过0· 22 μ m滤膜待测。
[0014] 2、仪器条件
[0015] 2.1色谱条件
[0016] 色谱柱：Acquity BEH RP18(2. ImmX 100mm，1. 7μ m);流动相：A 相：乙腈；B 相： 0. 1 %甲酸水溶液；洗脱梯度：乙腈+0. 1 %甲酸水溶液=70+30 ;流速：0. 2mL/min ;进样量： 10yL ;柱温：30°C。
[0017] 2. 2质谱条件
[0018] 电离模式：电喷雾正离子ESI(+);毛细管电压：3.0Kv ;离子源温度：110°C;脱溶剂 气温度：40(TC ;脱溶剂气流量：550L/h ;锥孔反吹气流量：50L/h ;检测方式：多反应监测扫 描模式（MRM);质谱采集参数见表1。
[0019] 表1TCP的质谱检测条件
[0020]
【权利要求】
1. 韭菜中3, 5, 6-三氯-2-吡啶醇（TCP)残留量的测定方法，其特征在于按如下的步骤 进行： (1) 准确称取粉碎样品10-20g (精确至0· Olg)于250mL具塞三角瓶中，加入10mL-20mL 水，0. lmL-0. 25mL冰乙酸和30mL-50mL乙酸乙酯，振荡提取0. 5h-2h ; (2) 提取液于100mL具塞量筒中，加入5g -15g氯化钠，振摇混勻后静置10分钟-30分 钟，吸取上清液10mL-20mL，浓缩至干，用lmL-2mL乙腈溶解； (3) 待净化液加入到经5mL - 10mL乙腈活化的石墨化碳氨基柱上，待其流干后，用5mL 乙腈和5mL0. 2% -0. 5%甲酸酸化的乙腈溶液淋洗，再用40mL0. 2% -0. 5%甲酸酸化的乙腈 溶液洗脱，收集所有洗脱液； (4) 在40°C下浓缩近干，用有机溶剂和0. 1 %甲酸水混合溶液溶解，过0. 22 μ m滤膜待 测。
2. 如权利要求书1所述的处理方法，其中步骤（1)中所述加20mL水，0. 25mL冰乙酸和 50mL乙酸乙酯。
3. 如权利要求书1所述的处理方法，其中步骤（3)中所述经10mL乙腈活化石墨化碳氨 基柱，用5mL乙腈和5mL0. 5%甲酸酸化的乙腈溶液淋洗，40mL0. 5%甲酸酸化的乙腈溶液洗 脱。
4. 如权利要求书1所述的处理方法，其中步骤（4)中所述有机溶剂为甲醇或乙腈。
【文档编号】G01N1/34GK104280283SQ201310286736
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月10日 优先权日:2013年7月10日
【发明者】张玉婷, 李辉, 刘磊, 李娜, 邵辉, 郭永泽, 宋淑荣 申请人:天津市农业质量标准与检测技术研究所