一种葡萄籽中低聚原花青素的提取及检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种从天然产物中提取有效成分并检测的工艺，特别是一种从葡萄籽中提取低聚原花青素及其检测的方法，属于分离纯化原花青素【技术领域】。本发明提供一种利用索氏提取法和固相萃取法相结合的工艺提取葡萄籽中的低聚原花青素，并利用高效液相色谱对其进行检测的方法。该方法首先是将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛，脱脂得到葡萄籽粉末，再将葡萄籽粉末经提取、过滤、浓缩，再溶解最后固相萃取得到精制原花青素，精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。利用该方法可从葡萄籽中快速、简单的提取得到含量大于65%，收率可达3.2%的低聚原花青素。
【专利说明】一种葡萄籽中低聚原花青素的提取及检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从天然产物中提取有效成分并检测的工艺，特别是一种从葡萄籽中提取低聚原花青素及其检测的方法，属于分离纯化原花青素【技术领域】。
[0002]
【背景技术】
[0003]原花青素(简称0PC)是一种多酚类化合物，广泛存在于葡萄、蓝莓、樱桃、李子和松树皮等植物中，其中葡萄籽是原花青素的重要来源。原花青素是一种天然的自由基清除剂和抗氧化剂，而且还有抗衰老，抗肿瘤，抗癌变，预防心脑血管疾病，预防动脉粥样硬化，改善肌肤弹性、美白和防晒等功能，现已广泛应用于食品、药品和化妆品等领域。在结构上，原花青素是由不同数量的儿茶素(catechin)或表儿茶素(epicatechin)结合而成。最简单的原花青素是儿茶素或表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体。按聚合度的大小，通常将二~五聚体称为低聚体(简称0PC)，将五聚体以上的称为高聚体(简称PPC)。
[0004]目前，有关利用葡萄籽提取原花青素的方法主要有以下几种:水提取法、传统有机溶剂提取法、超临界CO2萃取法、微波提取法等，这些提取方法主要存在的不足是:水提取法选水作为提取剂，浸提时间长，温度高，容易造成原花青素的损失，同时水的极性较大，溶出杂志比较多；传统有机溶剂提取法的缺陷是有机溶剂消耗多，耗时长，生产成本高，得到的产品或多或少都存在溶剂的残留；超临界CO2萃取法成本高，对操作条件的要求比较高；微波提取法一旦微波泄漏具有较高的危险性，安全性较差。
[0005]原花青素含 量的分析测定方法有很多，例如(铁铵盐)比色法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。在这些分析方法中比色法和分光光度法专属性差，误差大。
[0006]
【发明内容】
[0007]本发明的目的是克服上述现有技术的不足之处，提供一种利用索氏提取法和固相萃取法相结合的工艺提取葡萄籽中的低聚原花青素，并利用高效液相色谱对其进行检测的方法。该方法首先是将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛，脱脂得到葡萄籽粉末，再将葡萄籽粉末经提取、过滤、浓缩，再溶解最后固相萃取得到精制原花青素，精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。利用该方法可从葡萄籽中快速、简单的提取得到含量大于65%，收率可达3.2%的低聚原花青素。具体步骤如下:
(1)将葡萄籽干燥后粉碎至60—80目后备用；
(2)将粉碎后的葡萄籽放入脂溶性溶剂中，采用索氏提取脱脂，其中葡萄籽与脂溶性溶剂重量、体积比(料液比)为1:30，提取温度901:，提取时间90 min，提取结束后继续室温浸泡10 h ;得到脱脂葡萄籽粉末及淡黄色葡萄籽油；
(3)将脱脂后的葡萄籽粉末加入40%— 80%乙醇水溶液中置于索氏提取器中提取，提取温度120—160°C，提取时间20—60 min，料液比1:60— 1:100，过滤；
(4)将滤液合并后减压浓缩，得到原花青素粗提物；
(5)用蒸馏水或纯净水溶解粗提物，将粗提物置于固相萃取仪中进行固相萃取，先用纯水淋洗一次，再用20%甲醇淋洗一次，最后用纯甲醇洗脱得到精制原花青素；
(6)将精制原花青素过0.45 μ m有机相微孔滤膜，进行高效液相色谱分析测定。
[0008]上述脂溶性溶剂为石油醚(60— 90沸程)。
[0009]上述索氏提取器为全自动索氏提取器，型号为SE-412。
[0010]上述固相萃取仪为全自动固相萃取仪，型号为F250。
[0011]本发明具有以下特点:索氏提取法是利用溶剂回流和虹吸原理，使原花青素连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶剂萃取效率又高；固相萃取法可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理过程，操作简单、省时省力；高效液相色谱分析速度快、检测灵敏度高、分离效率高、操作自动化、定量精度高、重复性好、应用广泛。本发明是环保型的提取工艺，在提取过程中所用的溶剂可以循环利用，溶剂用量小，且毒性很小,对环境的影响较低。
[0012]采用该方法提取及测定的低聚原花青素含量> 65%，收率3.2%左右。
【专利附图】
【附图说明】
`[0013]图1为本发明工艺流程图。
[0014]图2为精制原花青素样品进行高效液相色谱分析测定谱图。图中I一儿茶素；2—原花青素B2 ；3一表儿茶素。
[0015]
【具体实施方式】
[0016]实施例1:
(1)将葡萄籽干燥后粉碎至60—80目后备用；
(2)将粉碎后的葡萄籽放入脂溶性溶剂中，采用索氏提取脱脂，其中葡萄籽与脂溶性溶剂重量、体积比(料液比)为1:30，提取温度901:，提取时间90 min，提取结束后继续室温浸泡10 h ;得到脱脂葡萄籽粉末及淡黄色葡萄籽油；
(3)将脱脂后的葡萄籽粉末加入40%乙醇水溶液中置于索氏提取器中提取，提取温度120°C，提取时间20 min，料液比1:60，过滤；
(4)将滤液合并后减压浓缩，得到原花青素粗提物；
(5)用蒸馏水或纯净水溶解粗提物，将粗提物置于固相萃取仪中进行固相萃取，先用纯水淋洗一次，再用20%甲醇淋洗一次，最后用纯甲醇洗脱得到精制原花青素。
[0017](6)将精制原花青素过0.45 μ m有机相微孔滤膜，进行高效液相色谱分析测定，提取率为3.0%。
[0018]实施例2— 4:
在上述实施例1的基础上，利用脱脂后的葡萄籽粉末提取低聚原花青素的参数为:提取溶剂的体积分数、提取温度(°c)、提取时间(min)、料液比(g/ml)，具体实施参数如下表所示:
【权利要求】
1.一种利用索氏提取法和固相萃取法相结合的工艺提取葡萄籽中的低聚原花青素，并利用高效液相色谱对其进行检测的方法；该方法首先是将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛，脱脂得到葡萄籽粉末，再将葡萄籽粉末经提取、过滤、浓缩，再溶解最后固相萃取得到精制原花青素，精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。
2.根据权利要求1所述的一种利用索氏提取法和固相萃取法相结合的工艺提取葡萄籽中的低聚原花青素，并利用高效液相色谱对其进行检测的方法，其特征是:利用该方法可从葡萄籽中快速、简单的提取得到含量大于65%，收率可达3.2%的低聚原花青素。
【文档编号】G01N30/08GK103601713SQ201310618192
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年11月29日 优先权日:2013年7月19日
【发明者】娄大伟, 胡凤, 孙秀云, 祝波, 连丽丽, 任红, 金丽, 罗亚楠, 杨巧玲, 陈晓影 申请人:吉林化工学院