一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法
【专利摘要】本发明公开一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法。该方法包括以下步骤：（1）称取待测食品，配制成样品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液进行萃取，然后过滤，将滤液蒸干；（2）用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对步骤（1）得到的蒸干物质进行萃取，然后过滤，滤液静置；（3）取下层溶液进行高效液相色谱检测。本发明所建立的方法具有很高的灵敏度、精密度和准确性。
【专利说明】一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食品检测领域。更具体地，涉及一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法。
【背景技术】
[0002]磷脂酰丝氨酸(简称ps)是一种磷脂类物质，对人的脑部神经系统健康具有重要作用。目前，可以将PS作为食品原料添加到食品中服用，或者作为保健食品服用。当PS作为保健食品服用时，由于纯度高，含量高，使用一般的高效液相色谱法即可检测，不需要复杂的前处理技术，而当PS作为普通食品原料添加到食品中时，其添加量一般较少，在食品中受其他原料的干扰不易检测，尤其是以蛋白质、脂肪、淀粉等物质为主的食品中，由于蛋白质、脂肪、淀粉等物质会对PS起到一定的包埋作用，使PS不易于从这些物质中分离，从而影响PS的检测。
[0003]由于ps的功效被人们广泛认可，越来越多的食品中添加了 ps，探索建立有效检测食品中磷脂酰丝氨酸含量的新方法对于食品原料的监测具有更加重要的意义。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法。该方法利用特殊的分离提取技术使得磷脂酰丝氨酸几乎可以全部从食品原料的干扰物质中提取出来，方法的回收率高、重现性好，操作简单，为磷脂酰丝氨酸在食品中的规模化使用提供了技术支持。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用下述技术方案:
[0006]一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，该方法包括以下步骤:
[0007](I)称取待测食品，配制成样品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液进行萃取，然后过滤，将滤液蒸干；
[0008](2)用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对步骤(I)得到的蒸干物质进行萃取，然后过滤，滤液静置分层；
[0009](3)取下层溶液进行高效液相色谱检测。
[0010]上述方法中，所述食品包括固态制品和液态制品。由于不同食品中磷脂酰丝氨酸的添加量差别较大，配制样品水溶液时，为了检测方便，优选地控制样品水溶液中磷脂酰丝氨酸的浓度为 0.lmg/mL-5mg/mL,更优选为 0.lmg/mL-1.5mg/mL。
[0011]进一步地，步骤(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷与甲醇的体积比为1-10，优选为2.5-5。用三氯甲烷和甲醇的混合溶液对样品水溶液进行萃取时，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液与样品水溶液的体积比至少大于10。此外，萃取的时间和温度对于ps萃取率也有影响，通常在15°C _70°C条件下萃取15min-5h，优选为在35°C _50°C条件下萃取30min_2h。
[0012]在本发明的一个实施方案中，步骤(I)中将滤液蒸干采用的是旋转蒸发。[0013]进一步地，步骤(2)中，所述三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的配制方法为:按照三氯甲烷与甲醇的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后按照三氯甲烷和甲醇的混合溶液与水的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液。用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对蒸干物质进行萃取时，三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的用量只要可以将蒸干物质充分溶解即可。
[0014]本发明通过两步萃取有效地去除了食品中的干扰物质，通过常规的高效液相色谱就可以完成食品中的磷脂酰丝氨酸的含量检测。为了使本领域技术人员更好地实施本发明，在此提供一种优选的高效液相色谱检测方法，具体如下:
[0015]高效液相色谱的检测条件为:采用LiChrospherelOOdiol色谱柱，流动相由A相和B相组成，进行梯度洗脱，流速1.5mL/min，柱温25°C -30°C，用蒸发光散射检测器进行检测，其中，所述A相为η-正己烷:2_丙醇:乙酸:三乙胺的体积比为820:170:10:0.8，B相为2-丙醇:纯水:乙酸:三乙胺的体积比为850:140:10:0.8。
[0016]优选的梯度洗脱条件为:0-23min，流动相中A相的体积浓度从95%降至60%，B相的体积浓度从5%升至40% ；23-28min,流动相中A相的体积浓度从60%降至0，B相的体积浓度从40%升至100% ；28-39min,流动相中A相的体积浓度从O升至95%，B相的体积浓度从100%降至5% ;39-50min，流动相中A相的体积浓度为95%，B相的体积浓度为5%。
[0017]根据上述检测条件，对前处理后的样品，即步骤(2)中获得的下层溶液，进行检测。一般情况，检测前还要使用三氯甲烷或甲醇定容，在高效液相色谱中获取磷脂酰丝氨酸的峰面积，通过标准曲线校正方程计算磷脂酰丝氨酸的浓度。
[0018]根据本发明的检测方法，从保护仪器并减少测试过程中干扰的角度出发，在对所述样品的溶液进行检测之前优选对该样品溶液进行过滤，从而除去该样品溶液中的不溶物。所述过滤可以为本领域技术人员熟知的各种方法，优选采用微孔滤膜对所述样品的溶液进行过滤。所述微孔滤膜的孔径可以为0.1-0.45 μ m，优选为0.2 μ m。
[0019]本发明的有益效果如下:
[0020]基于本发明的检测方法，磷脂酰丝氨酸的浓度在1.08-127.9 μ g/μ L范围内线性良好，可以稳定分析Ps的含量。并且方法线性范围较宽，适合于不同ps添加量的食品的分析；方法检出限为0.54 μ g/ μ L，方法定量限为1.8 μ g/ μ L。本发明的方法检出限低，灵敏度高、可以检测添加了微量ps的食品；方法平均回收率为在97.0%-101.0%之间，方法准确度高。
【专利附图】
【附图说明】
[0021 ] 图1磷脂酰丝氨酸标准品的高效液相色谱图。
[0022]图2实施例2中样品检测的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0023]为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
[0024]实施例1[0025]将ps标准品配制成浓度为50mg/100mL，即0.5 μ g/ μ L，按照色谱检测条件分别进样 IOyL (ps 含量 5yg)、30yL (ps 含量 15yg)、50yL (ps 含量 25 μ g)、80 μ L (ps 含量40 μ g)，以ps含量为横坐标，峰面积为纵坐标，求得的直线回归方程即为标准曲线，回归方程为 y=4132.3x-2956.2，R2=0.9919。
[0026]HPLC分析条件:
[0027]磷脂酰丝氨酸(ps)标准样品:sigma公司，产品名称:L-A-PHOSPHATIDYL_SERINEFROM SOYBEAN
[0028]仪器:ShimatzuHPLCIOVP series
[0029]柱型号:LiChrosphere100diol(Merck):4mm (内径)Xl25mm (柱长)(Merck),粒径:5 μ m
[0030]预柱:LiChrosphere diol pre cartridge
[0031]柱温:35°C
[0032]检测器参数:ELSD2000，ALLTECH,U.S.A
[0033]Drift tube 100°C
[0034]Nebulizer gas flow rate:2.0SLPM
[0035]流速:1.5mL/min
[0036]梯度洗脱条件:
[0037]
【权利要求】
1.一种食品中磷脂酰丝氨酸含量的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)称取待测食品，配制成样品水溶液，用三氯甲烷和甲醇的混合溶液进行萃取，然后过滤，将滤液蒸干； (2)用三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液对步骤(I)得到的蒸干物质进行萃取，然后过滤，滤液静置分层； (3)取下层溶液进行高效液相色谱检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷与甲醇的体积比为1-10。
3.根据权利要求2所述的检查方法，其特征在于，步骤(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液中，三氯甲烷与甲醇的体积比为2.5-5。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(I)中，所述三氯甲烷和甲醇的混合溶液与样品水溶液的体积比大于10。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液的配制方法为:按照三氯甲烷与甲醇的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷和甲醇的混合溶液，然后按照三氯甲烷和甲醇的混合溶液与水的体积比为1-3的比例配制成三氯甲烷、甲醇和水的混合溶液。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(I)中，所述萃取是在15°C _70°C条件下萃取 15min-5h。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤(I)中，所述萃取是在350C -50°C条件下萃取 30min-2h。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，高效液相色谱的检测条件为:采用LiChrospherelOOdiol色谱柱,流动相由A相和B相组成,进行梯度洗脱,用蒸发光散射检测器进行检测，其中，所述A相为η-正己烷:2_丙醇:乙酸:三乙胺，体积比为820:170:10:0.8，B相为2_丙醇:纯水:乙酸:三乙胺，体积比为850:140:10:0.8。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为:0-23min，流动相中A相的体积浓度从95%降至60%, B相的体积浓度从5%升至40% ;23_28min,流动相中A相的体积浓度从60%降至0，B相的体积浓度从40%升至100% ；28-39min,流动相中A相的体积浓度从O升至95%, B相的体积浓度从100%降至5% ;39-50min,流动相中A相的体积浓度为95%，B相的体积浓度为5%。
【文档编号】G01N30/88GK103884813SQ201410145181
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年4月11日 优先权日:2014年4月11日
【发明者】石丹, 王晓彦, 刘彪 申请人:内蒙古伊利实业集团股份有限公司