一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒的制作方法【专利摘要】本发明提供了一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒；由试剂R1及试剂R2组成，所述试剂R1包含的各组分为：缓冲液，硫醇类还原剂，乳酸脱氢酶，丝氨酸，还原性辅酶，表面活性剂，稳定剂，防腐剂；所述试剂R2包含的各组分为：缓冲液，胱硫醚β-合酶，胱硫醚β-裂解酶，表面活性剂，稳定剂，防腐剂。本发明使用循环酶法检测血清中的同型半胱氨酸，提供了一种操作简便，快捷、精确、灵敏、稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒。【专利说明】一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒【
技术领域：
】[0001]本发明涉及医学免疫体外诊断领域，具体地，涉及一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒。【
背景技术：
】[0002]同型半胱氨酸是氨基酸半胱氨酸的异种，在旁链部份硫醇基(-SH)前包含一个额外的亚甲基(-CH2-)。[0003]1969年Mccully从遗传性同型半胱氨酸尿症死亡儿童尸检中发现，其体循环内存在广泛的动脉血栓形成及动脉粥样硬化(AS)的病理表现，由此提出高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHCY)可导致动脉粥样硬化性血管性疾病的假说。此后，各国学者对HCY与心脑血管疾病的相关关系做了大量研究。研究结果表明，Hcy可以直接或间接导致血管内皮细胞损伤，促进血管平滑肌细胞增殖，影响低密度脂蛋白的氧化，增强血小板功能，促进血栓形成。[0004]血清内同型半胱氨酸的高水平是心血管疾病及中风的风险因素，是这种疾病的标记。本发明正是一种检测血清中同型半胱氨酸的试剂盒，性能优良，检测过程简便，灵敏度闻。[0005]诊断方法:最早检测同型半胱氨酸是氨基酸分析法，Ueland等测定血清中同型半胱氨酸，后经改良，目前常用方法包括以下几种。[0006]同位素法:由Refsum等1985年建立的方法。该方法通过14C标记的腺苷与HCY缩合后，经色谱分离，液体闪烁计数放射强度来测HCY浓度。该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。[0007]色谱法:1987年Stabler首先报道了气相色谱一质谱法测定同型半胱氨酸。该法可同时测定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多种物质。虽然灵敏度、特异性好，但仪器价格昂贵而不能推广。高效液相色谱法(HPLC)是目前比较成熟且推广使用的方法，不足之处是样品处理、层析条件、样品检测及定量的诸多变异，使其难以标准化。Fiskertrand等首先于1993年用全自动高效液相色谱法对血浆和尿液的HCY和硫醇物进行测定。HPLC根据衍生方式(柱前或柱后衍生)、检测方法(荧光、电化学)可分为多种方法。应用HPLC准确测定同型半胱氨酸需要优良的设备、高超的技术经验和应用HPLC方法适当的时间，另外选择和制备内部质控也相当重要。[0008]免疫学法:该法应用特异性的抗S-腺苷同型半胱氨酸单克隆技术，采用荧光偏振法或免疫法测定HCY.美国雅培公司采用全自动荧光偏振免疫技术，用AXSYM仪器检测HCY，反应原理为:正常人血浆中HCY约I%以还原型存在，70%与白蛋白结合，30%形成小分子二硫化物。血浆标本在含二硫苏糖醇的预处理液作用下，HCY、混合的二硫化物及蛋白结合型等均被还原成游离HCY形式(tHCY):tHCY在S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)水解酶和过量腺苷存在下，被转换成SAH；预稀释的SAH混合物、抗-SAH单克隆抗体及标记的荧光S-腺苷-L-半胱氨酸示踪物一同孵育，仪器自动检测偏振光的改变，即可测出标本总HCY水平。[0009]上述方法都存在着各自的问题，或操作繁琐，或成本高，很难普及。【
发明内容】[0010]针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒。[0011]本发明是通过以下技术方案实现的:[0012]本发明涉及一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，由试剂Rl及试剂R2组成，所述试剂Rl包含的各组分及浓度为:【权利要求】1.一种稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，由试剂Rl及试剂R2组成，所述试剂Rl包含的各组分及浓度为:所述试剂R2包含的各组分及浓度为:2.如权利要求1所述的稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的缓冲液均为Good’s缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种或几种。3.如权利要求1所述的稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的缓冲液的pH均为6.0~8.0。4.如权利要求1所述的稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂Rl中的复合硫醇类还原剂为DTT、β-巯基乙醇、TCEP中的几种混合。5.如权利要求1所述的稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的表面活性剂均为吐温20、吐温80、曲拉通-100、十二烷基苯磺酸钠中的一种或几种。6.如权利要求1所述的稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的稳定剂均为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、螯合剂EDTA类中的一种。7.如权利要求1所述的稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的防腐剂均为叠氮钠或proclin300防腐剂。【文档编号】G01N33/53GK104198726SQ201410401473【公开日】2014年12月10日申请日期:2014年8月14日优先权日:2014年8月14日【发明者】李伟奇,李杰,房君江,张秀文,林清玉申请人:上海睿康生物科技有限公司