本发明涉及液相色谱检测技术领域，特别涉及一种艾条中绿原酸检测方法，该检测方法检测准确，适合艾条。
背景技术：
艾条是棉纸包裹艾绒制成的圆柱形长卷，艾条主要用于艾灸，艾灸乃中国最古老的医术之一，属中医外治法，温灸养生是通过百草之王艾草特制成艾条，点燃后放入温灸器中滚动于经络或患处四周，帮助人体全面温通经络，温补元气，调和气血，润泽面色，散发健康神采。
艾条中含有黄酮类、绿原酸等活性物质，其中绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有清除自由基、抗菌、消炎、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、降血压、降血脂和兴奋中枢神经系统等作用。艾条中绿原酸含量的检测有重要意义。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种艾条中绿原酸检测方法，该检测方法检测准确，分离能力较好，柱效高，适合艾条。
本发明提供了一种艾条中绿原酸检测方法，步骤包括：
(1)将绿原酸对照品溶于有机溶剂制备对照品溶液；对艾条样品进行预处理制备供试品溶液；
(2)将对照品溶液、供试品溶液分别进行液相色谱分析，液相色谱分析的条件包括：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：327nm；流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液，检测时间0-9min内，流动相乙腈体积百分比11％，流动相0.4％磷酸溶液体积百分比89％；检测时间9-14min内，流动相乙腈体积百分比由11％增至90％，流动相0.4％磷酸溶液体积百分比由11％增至90％；检测时间14-16min内，流动相乙腈体积百分比90％，流动相0.4％磷酸溶液体积百分比10％。
(3)根据液相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量。
本发明的有益效果是：本发明采用气相色谱法能对艾条中的绿原酸进行有效检测，实验证明该检测方法准确度高，分离能力较好，柱效高，稳定性好，理论塔板数按绿原酸计算不低于1000，该峰与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，绿原酸回收率达97％以上，方法的重复性良好，中间精密度良好，采用不同品牌的色谱柱测定结果精密度佳，适合艾条中绿原酸含量的检测。
具体实施方式
本发明提供了一种艾条中绿原酸检测方法，步骤包括：
(1)将绿原酸对照品溶于有机溶剂制备对照品溶液；对艾条样品进行预处理制备供试品溶液；
(2)将对照品溶液、供试品溶液分别进行液相色谱分析，液相色谱分析的条件包括：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：327nm；流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液，检测时间0-9min内，流动相乙腈体积百分比11％，流动相0.4％磷酸溶液体积百分比89％；检测时间9-14min内，流动相乙腈体积百分比由11％增至90％，流动相0.4％磷酸溶液体积百分比由11％增至90％；检测时间14-16min内，流动相乙腈体积百分比90％，流动相0.4％磷酸溶液体积百分比10％。
(3)根据液相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量。
优选的，步骤(1)所述有机溶剂为甲醇。
更加优选的，步骤(1)所述对照品溶液的配制方法为：称取绿原酸对照品，加50％的甲醇制成每1ml含0.06mg绿原酸对照品的溶液。
优选的，步骤(1)所述预处理为将艾条样品中加入甲醇，超声处理后过滤，取滤液即为供试品溶液。
更加优选的，步骤(1)所述预处理为每1g艾条样品中加入25mL的50％甲醇，超声20-40min后冷却，补足损失的50％甲醇后过滤，取滤液即为供试品溶液。
优选的，步骤(2)所述液相色谱分析的条件还包括：进样量：5μl，柱温：30℃。
下面将结合具体实施例对本发明提供的艾条中绿原酸检测方法予以进一步说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。
本实施例提供了一种艾条中绿原酸检测方法。
1.1所用到的仪器与试药如下：
仪器：U3000液相色谱仪、WH1002型电子天平、MS105DU型电子天平。
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
试药：绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110753-201415)，甲醇(分析纯)，乙腈(色谱纯)。
1.2艾条中绿原酸检测方法步骤包括：
(1)对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加体积百分比50％的甲醇制成1ml含0.06mg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备：取待测样品，除去棉纸，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟(功率250W，频率35kHz)，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定。
所述测定的色谱条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
检测波长：327nm
柱温：30℃
流动相如表1所示，其中，A为乙腈，B为0.4％磷酸溶液
表1流动相配比
理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。
(4)根据气相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量。
1.3线性关系考察
取绿原酸对照品适量，加50％甲醇适量使对照品溶解并加50％甲醇至刻度，摇匀，浓度0.05780mg/ml。分別进样1μl，2μl，5μl，10μl，20μl，以测得峰面积A对进样质量进行线性回归，所得线性关系如表2所示。
表2线性关系表
表1结果表明，绿原酸在0.0578～1.156μg范围内，Y与X呈良好线性关系。得回归方程为：y＝44.768x-0.022r＝1.00000。
1.4系统适用性试验
取绿原酸对照品溶液和供试品溶液，精密吸取续滤液5μl注入液相色谱仪，记录色谱图。理论塔板数按绿原酸计算不低于1000，该峰与其相邻色谱峰的分离度大于1.5。结果可见，在上述色谱条件下，理论塔板数和分离度均符合要求，绿原酸分离效果好。
1.5专属性试验
不加样品，按照供试品溶液制备方法制得空白对照溶液。精密吸取对照品溶液，空白对照溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪。检测结果表明，空白对照溶液在与供试品溶液保留时间相同的位置上，未出现色谱峰，说明空白无干扰。
1.6精密度实验
①重复性试验
供试品采用的药艾条厂家和批号：盱眙华佗中药厂药艾条130601。精密称取同一批供试品6份，按本实施例提供的含量测定方法及色谱条件进行测定，检测结果见表3。
表3重复性试验结果
从表3结果可见，六组样品测得的含量基本一致，偏差小，说明测试方法的重复性良好。
②中间精密度
不同时间、不同操作人员提取药艾条样品后测定同批样品中绿原酸含量，测定结果见表4。
表4药艾条中间精密度试验结果
从表4结果可见，各组样品测得的含量基本一致，偏差小，表明中间精密度良好。
1.7准确度试验(回收率试验)(应在95.0％～102.0％)
供试品采用的药艾条厂家和批号：盱眙华佗中药厂药艾条130601。取本品，除去棉纸后称取约1g的供试品九份，绿原酸对照品的浓度为0.06692mg/ml，每三份分别精密加入绿原酸对照品5ml，10ml，15ml，按供试品含量测定方法操作，测定并计算绿原酸的回收率，结果见表5。
表5加样回收试验结果
从表5结果可见，加入绿原酸对照品后测得的绿原酸总量基本等于样品及对照品中绿原酸总量之和，且九组的绿原酸回收率均在97％以上，平均回收率达99.43％。可见本测试方法的绿原酸回收率较高。
1.8耐用性
(1)使用不同品牌的色谱柱：
供试品采用的药艾条厂家和批号：盱眙华佗中药厂药艾条130601。分别精密称取样品，按供试品溶液制备方法制备，分别用不同色谱柱，采用相同的测定方法依次测定，结果见表6。
表6不同品牌色谱柱试验结果
表5结果表明：不同品牌的色谱柱测定结果基本一致，说明本测试方法精密度良好。
(2)供试品溶液的稳定性考察：
供试品采用的药艾条厂家和批号：盱眙华佗中药厂药艾条130601。分别精密称取上述批号的样品，分别进样供试品溶液5μl，分别在0、2.5、5、7.5、10小时内测定，测定结果见表7。
表7绿原酸稳定性考察结果
表7结果表明，10小时内测定的供试品绿原酸含量基本相同，说明供试品溶液在10小时内稳定，可满足检测时间的需要。
综上所述,按照2010年版《中国药典》一部附录XIXA中药质量标准分析方法验证指导原则对其方法进行了验证，此含量测定的方法适合艾条。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。