猪心中提取肌红蛋白的方法及含有其的人总抗氧化状态试剂盒与流程

技术特征：

1.一种猪心中提取肌红蛋白的方法，其特征在于：通过硫酸铵沉淀、疏水层析两步法从新鲜猪心中快速提取肌红蛋白，获得高纯度的肌红蛋白。

2.根据权利要求1所述的猪心中提取肌红蛋白的方法，其特征在于：其主要提取步骤包括：

1)将新鲜猪心去除脂肪和结缔组织之后，加入破碎缓冲液，用组织匀浆机快速匀浆，并用高速冷冻离心机离心，去除沉淀，获得粗提液；

2)粗提液中加入硫酸铵，搅拌，室温下沉淀0.5-1.5h后，用高速冷冻离心机离心，保留上清；

3)在上清液中加入硫酸铵至饱和状态，室温下沉淀2h以上，并用高速冷冻离心机离心，弃去上清，获得沉淀；

4)沉淀用含硫酸铵的缓冲液复溶至原体积，过滤待上样；

5)疏水填料装柱后，用含硫酸铵的缓冲液平衡，平衡结束后上样，上样完毕后，继续平衡至无蛋白流出，然后用含有硫酸铵的缓冲液洗脱，根据洗脱峰收集目的蛋白；

6)收集得到的目的蛋白通过SDS-PAGE检测纯度后，加入保护剂通过喷雾干燥技术制备干粉。

3.根据权利要求2所述的猪心中提取肌红蛋白的方法，其特征在于：所用缓冲液为磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOP缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或几种，使用浓度为1mM～1000mM，且pH范围在6～9.5。

4.根据权利要求2所述的猪心中提取肌红蛋白的方法，其特征在于：所述的粗提液中硫酸铵浓度为40～60％，复溶沉淀、平衡缓冲液中硫酸铵浓度为30～40％，洗脱时硫酸铵浓度为15～25％。

5.根据权利要求2所述的猪心中提取肌红蛋白的方法，其特征在于：所用疏水填料为苯基、丁基、辛基、异丙基中的一种。

6.根据权利要求2所述的猪心中提取肌红蛋白的方法，其特征在于：所述的喷雾干燥所用保护剂为海藻糖、玉米糊精、玉米淀粉、阿拉伯树胶中的一种或几种，使用质量浓度为0.1％～10％。

7.一种含有权利要求1的方法制备的肌红蛋白人总抗氧化状态试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂1和试剂2组成，具体为：

试剂1为：

试剂2为：

过氧化氢 2～100mM。

8.根据权利要求7所述的人总抗氧化状态试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液为磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOP缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或几种，且pH范围在5.5～8.5。

9.根据权利要求7所述的人总抗氧化状态试剂盒，其特征在于：所用的防腐剂为叠氮化合物、硫柳汞、PC系列防腐剂中的一种或几种。

10.根据权利要求7所述的人总抗氧化状态试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒能用于检测和评估机体血清、血浆、尿液、唾液、细胞裂解液成分中的总抗氧化状态。