本发明涉及烟草及制品检测领域，具体的说是一种自动定氮仪测定烟草及制品中蛋白质的方法。
背景技术：
蛋白质是存在于细胞中的一种含氮的生物高分子化合物，在生命现象中起着决定性的作用，烟叶中的氮主要以蛋白质的形式存在，并且含量丰富。烟叶中的蛋白质在燃烧时是喹啉、HCN和其它几种有害物质的前体物质，并且有烧羽毛的气味，会使烟气苦味增加，对人体健康和烟叶吸食质量都存在不良影响，因而准确高效检测烟草及制品中蛋白质含量是烟草质量检测中的一项重要工作。
蛋白质的测定方法有多种，受烟草质量安全评价及样品基质等因素的影响，目前烟草中蛋白质含量测定方法主要有克达尔法（YC/T 166-2003 烟草和烟草制品 总蛋白质含量的测定）和连续流动法（YC /T 249-2008 烟草及烟草制品 蛋白质的测定 连续流动法），其中克达尔法所需仪器设备简单，测定结果准确，但在检测中采用手工操作,工作劳动强度大，检测周期长，批量分析能力弱，同时在样品消化时采用氧化汞等作为催化剂，对人体和环境均存在安全风险。连续流动法相对克达尔法工作劳动强度有所减少，批量分析能力有所增加，但连续流动仪价格昂贵，成本和运行费用高，同时在消化时采用氧化汞作等为催化剂，在检测时还需要亚硝基铁氰化钠、水杨酸钠、次氯酸钠、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠等多种试剂，对人体和环境也存在安全风险。
自动定氮仪依据凯氏定氮法的原理设计，适用于粮食、食品、乳制品、饮料、饲料、土壤、水、药物、沉淀物和化学品等中的氨氮、蛋白质氮等含量的检测。由于自动定氮仪实现了分析过程自动化，减少了人为操作，降低了工作劳动强度，具有操作简便、快速、高效，测定结果准确度高，精密度好，以及成本和运行费用合理，易于推广应用等特点，在粮食、饲料等蛋白质测定方面得到了广泛应用。
针对目前烟草及制品中蛋白质测定方法中存在的工作劳动强度大，检测周期长，对人体和环境存在安全风险等问题，通过改变样品消化时的催化剂种类，采用凯氏定氮法，使用自动定氮仪，实现准确、高效、安全测定烟草及制品中的蛋白质含量。
技术实现要素：
一种自动定氮仪测定烟草及制品中蛋白质的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种自动定氮仪测定烟草及制品中蛋白质的方法，包括以下步骤：
1）准确称取通过0.45mm筛孔的烟草及制品样品0.5000g-1.0000g(蛋白质含量在30 mg -60mg左右)于300mL锥形瓶内，加人75mL0.5%乙酸溶液，加热保持沸腾 15min；
2）将步骤1）所得溶液迅速用直径为150mm的定量滤纸在真空抽滤装置内进行抽滤，并用0.5%乙酸溶液冲洗锥形瓶和沉淀物至滤液无色，然后转移滤纸和沉淀于体积为250mL的消化管中，所述真空抽滤装置包括抽滤瓶，抽滤瓶上部设有真空泵接口，抽滤瓶下部设有排废液口，抽滤瓶顶部设有活塞连接布氏漏斗，所述布氏漏斗为120mm；
3）向消化管中加入1.5g K2SO4和0.15g CuSO4•5H2O，再加入15mL浓硫酸，将消化管置于消化器上，升温到420℃后，稳温1小时，消化结束；
4）待消化管温度冷却至室温后，使用硫酸或盐酸标准滴定溶液，设定加水50mL,氢氧化钠溶液70mL和硼酸吸收溶液30mL，将消化管置于自动定氮仪上测定蛋白质含量。
本发明所具有优点：
本发明依据烟草质量安全评价及样品基质特性等因素，在烟草及制品蛋白质测定中，首次采用凯氏定氮法，使用自动定氮仪测定，减少了人为操作，降低了工作劳动强度，测定结果准确度高，精密度好，易于推广应用，同时首次在烟草及制品蛋白质测定中在样品消化时采用K2SO4和CuSO4•5H2O作为催化剂，以及采用凯氏定氮法，减少了检测过程其它试剂种类及用量，降低了检测时的安全风险和环境污染，不仅仅对烟草及制品检测领域蛋白质测定具有重要意义，同时对其他领域和行业的样品也具有很强的应用价值。
附图说明
图1为本发明实施例提供的真空抽滤装置示意图
图中1、抽滤瓶；2、真空泵接口；3、排液废口；4、活塞；5、120mm布氏漏斗。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
①准确称取通过0.45mm筛孔的烤烟样品0.5000g于300mL锥形瓶内，共称取15份，样品编号1-15，在7、8、9号中加入10.0mg酪蛋白标准样品, 在10、11、12号中加入20.0mg酪蛋白标准样品, 在13、14、15号中加入30.0mg酪蛋白标准样品，同时做空白试验3份；
②每个锥形瓶加人75mL0.5%乙酸溶液，加热保持沸腾 15min；
③迅速用直径为150mm的定量滤纸在真空抽滤装置内进行抽滤，并用0.5%乙酸溶液冲洗锥形瓶和沉淀物至滤液无色，然后转移滤纸和沉淀于体积为250mL的消化管中；
④向消化管中加入1.5g K2SO4和0.15g CuSO4•5H2O，再加入15mL浓硫酸；
⑤将消化管置于消化器上，升温到420℃后，稳温1小时，消化结束；
⑥待消化管温度冷却至室温后，使用硫酸标准滴定溶液，设定加水50mL,氢氧化钠溶液70mL和硼酸吸收溶液30mL，将消化管置于自动定氮仪上测定蛋白质质量；
⑦蛋白质测定结果见表1。
表1 烟草样品测试数据结果表
注: 样品的蛋白质含量为6 次测定的平均值。
由表1中测试数据结果分析，样品重复性相对相差1.54%,回收率在96.3%-98.4%间，满足烟草及制品中蛋白质定量分析测试需求，该方法适用于烟草及制品中蛋白质的测定方法，加以实验适合农业及其他领域内类似样品蛋白质的测定方法。