一种眼镜蛇神经毒素的毛细管电泳体内检测方法与流程

文档序号:12592584阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种眼镜蛇神经毒素的毛细管电泳体内分析方法,其特征在于所述方法包括以下步骤:

(1)取含有FITC-NT的待测血浆样品,进样进行高效毛细管电泳,激光诱导荧光检测器检测,获得待测样品的电泳图谱;所述高效毛细管电泳的条件为:以CEofixTMMEKC试剂盒为缓冲液,分离电压为20kV,温度为24℃,检测波长为激发波长488nm,发射波长520nm;所述FITC-NT代表荧光单标记的眼镜蛇神经毒素;

(2)建立FITC-NT的标准曲线方程,根据其标准曲线方程以及步骤(1)所得的待测样品的电泳图谱中FITC-NT的峰面积,计算出待测样品中FITC-NT的浓度。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中,所述高效毛细管电泳中采用的毛细管柱为有效长度为55cm的非涂层毛细管柱,内径75um。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中,所述高效毛细管电泳采用压力进样,6.9kPa,10s。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中,进样量20μL。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(1)中,所述高效毛细管电泳开机后用0.1mol·L-1氢氧化钠溶液冲洗5min,CEofixTMMEKC试剂盒涂层冲洗5min,每次进样前用CEofixTMMEKC缓冲液冲洗毛细管柱3min,每针运行20min,每针检测后用CEofixTMMEKC试剂盒缓冲液冲洗5min,分析结束后用0.1mol·L-1氢氧化钠溶液和水各冲洗5min。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述步骤(2)中,所述FITC-NT的标准曲线方程按以下方法获得:取FITC-NT标准贮备液逐级稀释,配制一系列不同浓度的标准工作溶液,用SD大鼠空白血浆配制成不同FITC-NT浓度的血浆标准添加样品,按照步骤(1)的方法进行检测,获得血浆标准添加样品的电泳图谱,以FITC-NT浓度为横坐标,相应的电泳图谱中的峰面积为纵坐标进行线性回归,绘制标准曲线方程。

7.一种利用FITC-NT进行神经毒素的体内药代动力学参数检测的方法,所述FITC-NT代表荧光单标记的眼镜蛇神经毒素,所述方法包括以下步骤:

(A)对大鼠进行FITC-NT的静脉和/或肌肉注射,注射后在不同时间采血,离心出血浆,血浆样品在-20℃冷冻保存直至测试;

(B)取给药后不同时间的血浆样品,作为待测样品进样进行高效毛细管电泳,激光诱导荧光检测器检测,获得待测样品的电泳图谱;所述高效毛细管电泳的条件为:以CEofixTMMEKC试剂盒为缓冲液,分离电压为20kV,温度为24℃,检测波长为激发波长488nm,发射波长520nm;

(C)建立FITC-NT的标准曲线方程,根据其标准曲线方程以及步骤(B)所得的待测样品的电泳图谱中FITC-NT的峰面积,计算出待测样品中FITC-NT的浓度;

(D)以时间为横坐标,血浆样品中的FITC-NT浓度为纵坐标,绘制FITC-NT的血药时间曲线,获得体内药代学参数。

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