D-二聚体检测试纸条的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种用于检测的试纸条，具体涉及一种用于检测D-二聚体的试纸条。
【背景技术】
[0002]D- 二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物。D- 二聚体主要反映纤维蛋白溶解功能心肌梗死、脑梗死、肺栓塞、静脉血栓形成、手术、肿瘤、弥漫性血管内凝血、感染及组织坏死等均可导致D- 二聚体升高。特别对老年人及住院患者，因患菌血症等病易引起凝血异常而导致D- 二聚体升高。
[0003]目前临床常用的方法包括胶乳增强免疫比浊法、酶联免疫法、化学发光法、胶体金免疫层析法、荧光免疫层析法等。胶乳增强免疫比浊法虽实现高通量筛选，但由于某些待测物所需的检测灵敏度要求高，导致检测时低值样品CV值过大。酶联免疫法及化学发光法虽可以定量准确，但是对于某些疾病的判定方面其检测耗时过长，大大延误了可能需要的治疗。胶体金免疫层析法操作简单，但只能实现半定量。荧光免疫层析法因易受到高浓度的共存杂质产生的背景荧光的影响，灵敏度通过会有所损失，这极大地限制了其在临床诊断领域的应用。更重要地，现有技术中的方法普遍不能满足检测中对于高灵敏度和宽线性范围兼具的要求。
【实用新型内容】
[0004]抟术问题
[0005]针对现有技术中存在的D- 二聚体检测低值灵敏度和检测线性范围无法兼顾的问题，本实用新型提供了一种具有改进的检测灵敏度和线性范围的试纸条。
[0006]技术方案
[0007]一方面，本实用新型提供了一种D-二聚体检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括顺序排列并依次搭接的以下部件:
[0008]i)用于加入待测样品的加样区，
[0009]ii)同时包被有由量子点和稀土焚光材料分别单独标记的第一抗体的第一抗体结合区，
[0010]iii)包被有由生物素标记的第二抗体的第二抗体结合区，其中所述第一抗体和第二抗体分别特异性识别D- 二聚体的不同表位，
[0011]iv)同时包被有彼此相互间隔的检测带和质控带的检测区，其中所述检测带固定有亲和素，所述质控带固定有抗鼠IgG的抗体，和
[0012]V)吸水区。
[0013]在一个实施方式中，所述试纸条进一步包括布置有加样区、第一抗体结合区、第二抗体结合区、检测区和吸水区的底板。
[0014]在一个实施方式中，所述量子点为微球形式且具有2nm-30nm的粒径范围，且所述量子点选自以下组中:CdTe、CdSe, PbSe, InP和GaN。
[0015]在一个实施方式中，所述第一抗体结合区上进一步包被有微球，其中所述微球负载有所述稀土荧光材料和所述第一抗体。
[0016]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为50nm-400nm。
[0017]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为100nm-300nm。
[0018]在一个实施方式中，所述微球的粒径大小为10nm或300nm。
[0019]有益效果
[0020]本实用新型的试纸条的主要优点包括:
[0021]I)联合应用量子点与稀土荧光材料，极好的克服了单独应用量子点或者稀土荧光材料存在的低值灵敏度和检测线性范围无法兼顾的问题；
[0022]2)通过引入生物素亲和素级联放大系统，进一步提高了检测灵敏度；和
[0023]3)通过将两种不同抗体分别包被于不同的抗体结合区上，可以避免抗体之间的相互影响，进一步提高了检测灵敏度。
【附图说明】
[0024]图1本实用新型的试纸条的侧视图。
[0025]图2本实用新型的试纸条的俯视图。
[0026]附图标记:
[0027]加样区1、第一抗体结合区2、第二抗体结合区3、检测区4、吸水区5、底板6、量子点微球7、检测带8和质控带9。
【具体实施方式】
[0028]下文中将参照附图来更详细地描述示例性实施方式。所述附图用于图示说明本实用新型，而非对其进行限制。在附图中，为了清楚的说明，放大了试纸条部分区域的尺寸及其相对比例。
[0029]如图1所示，本实用新型的D- 二聚体检测试纸条包括底板6和在底板6上顺序排列并依次搭接的加样区1、第一抗体结合区2、第二抗体结合区3、检测区4和吸水区5。加样区1、第一抗体结合区2、第二抗体结合区3、检测区4和吸水区5之间的搭接方式并不受图1所示方式的限制。
[0030]加样区I可由选自玻璃纤维素膜或者聚酯膜、棉纤的材料制成。加样区I可以起到过滤样品中的颗粒性不溶物。采用单独加样区的设计有助于提高检测灵敏度。本实用新型的试纸条所适合检测的样品包括但不限于血清、血浆、尿液。
[0031]第一抗体结合区2和第二抗体结合区3相连并彼此搭接，且进一步又分别搭接加样区I和检测区4。在一个实施方式中，加样区I搭接在第一抗体结合区2之上。在另一个实施方式中，第一抗体结合区2搭接在第二抗体结合区3之上。第一抗体结合区2和第二抗体结合区3分别由诸如玻璃纤维素膜或者聚酯膜制成。
[0032]第一抗体结合区2上同时包被有由量子点7和稀土荧光材料分别单独标记的第一抗体。
[0033]量子点是由半导体材料制成的、稳定直径在2nm-30nm的纳米粒子，通常呈现微球形。量子点可由例如IIB-VIA或IIIA-VA族兀素制成。量子点的电子和空穴被量子限域，连续能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，所以量子点在受激后可以发射荧光。稀土荧光材料具有基本相同的外层电子结构，而其内层4f电子(除钪钇外)又具有数量很多的电子能级，使稀土元素离子内层的4f电子可在不同的能级之间跃迀，从而产生大量的吸收光谱信息和荧光光谱信息。单独量子点标记的抗体虽然灵敏度高，但其有时会表现为线性范围不佳，体现为高值检测不准确。单独稀土荧光材料标记的抗体虽然具备良好的线性范围，但是灵敏度有待改进，体现为低值检测不准确。
[0034]D-二聚体的检测需要兼顾精确性和灵敏度的要求。本实用新型联用量子点和稀土荧光材料，量子点有利于低值的检测以达到灵敏度的要求，而稀土荧光材料使得检测的线性范围可覆盖高值区域。
[0035]在本实用新型中，术语“标记”包括采用化学或物理方法使抗D-二聚体的第一抗体与量子点和稀土荧光材料直接连接。然而，标记也可以通过其它方式完成，例如稀土荧光材料和抗D- 二聚体的第一抗体可通过例如同时包埋或负载在微球上的方式达到“标记”的目的。因此，在一个实施方式中，第一抗体结合区2上可进一步具有微球(未示出)，所述微球上同时包埋或负载有稀土荧光材料和抗D- 二聚体的第一抗体。在一个实施方式中，包埋或负载在所述微球上的稀土荧光材料和抗D- 二聚体的第一抗体之间可以具有化学连接，例如以稀土荧光材料标记的抗D- 二聚体的第一抗体的形式存在于所述微球上。在另一个实施方式中，包埋或负载在所述微球上的稀土荧光材料和抗D-二聚体的第一抗体之间可以不具有化学连接，即所述微球上包埋或负载有彼此间无化学连接的稀土荧光材料和抗D-二聚体的第一抗体。
[0036]在一个实施方式中，所述微球可以为聚合物微球，例如聚苯乙烯微球。在一个实施方式中，微球的粒径大小范围在50nm-400nm之间，优选在100nm-300nm之间，更优选为10nm 或 300nm。
[0037]制备稀土荧光微球的方法是现有技术已知的，包括但不限于:包埋法，即在聚合物微球的聚合反应过程中加入稀土材料配合物；键合法，即使稀土元素离子与聚合物侧链上的官能团发生配位反应得到稀土荧光微球；以及溶胀法和包覆法。后两种方法均是在单分散的微球(如:聚苯乙烯微球)的基础上，将稀土材料配合物渗透或包覆在微球的内部或表面，通过控制反应条件，可实现最终制备出单分散性好、荧光强度高、荧光稳定性好的聚合物微球。
[0038]在一个实施方式中，所述量子点具有2nm-30nm的粒径。在一个优选实施方式中，所述量子点具有2nm-20nm的粒径。在一个优选实施方式中，所述量子点具有5nm-20nm的粒径。在一个实施方式中，所述量子点为I1-VI族量子点(如CdTe、CdSe等)。在另一个实施方式中，所述量子点为II1-V族量子点(如InP、GaN等)。在又一个实施方式中，所述量子点为IV-VI族量子点(如PbSe等)。
[0039]在一个实施方式中，所述稀土焚光材料为含有铕(Eu)离子、镇(Tb)离子、钐(Sm)离子、钕(Nd)离子、镝(Dy)离子等各种镧系元素的荧光材料中的一种或者几种。在一个实施方式中，稀土荧光材料为含有铕(Eu)离子、铽(Tb)离子、钐(Sm)离子、钕(Nd)离子、镝(Dy)离子等各种镧系元素的稀土荧光材料中的一种或者几种负载到微球上形成的稀土荧光微球。将稀土荧光材料负载到微球上可进一步提高荧光的稳定性。
[0040]第二抗体结合区3上包被有由生物素标记的第二抗体，其中所述第一抗体和第二抗体分别特异性识别D- 二聚体的不同表位。也就是说，能够特异性识别D- 二聚体的不同表位的第一抗体和第二抗体均能够特异性结合D- 二聚体。在本实用新型的试纸条中，通过将两种特异性结合D-二聚体的抗体分别包被于不同的抗体结合区，最大程度降低了抗体之间的相互影响，提高了检测的灵敏度。
[0041]检测区4位于第二抗体结合区3和吸水区5之间，检测区4具有相间隔的检测带8和质控带9。检测区4可由选自由硝酸纤维素膜、尼龙膜、PVDF膜、玻纤硝纤混合膜的材料制成，优选由硝酸纤维素膜制成。检测带8上固定有亲和素。通过引入生物素亲和素级联放大系统，进一步提高了检测灵敏度。质控带9固定有抗鼠IgG的抗体，用于确定反应体系是否成立，并通过计算检测带8与质控带9的荧光信号值以精确进行定量。
[0042]吸水层5可由选自由棉绒、玻纤的材料制成，优选由棉绒制成。
[0043]试纸条的整体长度在8cm至1cm之间，整体宽度在0.2cm至0.5cm之间，优选在0.2cm至0.3cm之间，最优选为0.3cm。本实用新型的试纸条在提供灵敏度和检测线性范围的同时，通过降低试纸条的长度和/或宽度可降低抗体的用量，大大节约了生产成本。
[0044]图2是本实用新型的试纸条的俯视示意图。对图2中与图1相同的内容不再赘述。
[0045]实施例
[0046]以下实施例用于说明本实用新型，但不应理解为限于在此阐述的实施例。
[0047]下述实施例中，所述D-二聚体第一抗体、D-二聚体第二抗体、抗鼠IgG抗体、亲和素、生物素、量子点、稀土铕荧光微球、氧化铕(Eu2O3)、4，4’-二 (I, I，，2，2，，3，3，-七氟_4’，6’ -己二酮-6’ -基)_氯磺酰-邻三联苯(BHHCT)、2_(N_吗啡啉)乙磺酸(MES)、碳二亚胺(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、吡啶、牛