一种艾里莫芬烷型倍半萜二聚体及其制备方法和应用
【技术领域】 [0001] ：本发明涉及医药，具体涉及从植物侧茎橐吾中分离得到的一 种新的艾里莫芬烧型倍半砲二聚体LigupleurolideA及其制备方法和应用。
【背景技术】 [0002] ：癌症是严重威胁人类健康的一类重大疾病。随着人口老龄化及社会工 业化进程的加快、人类食物有害有毒物质污染和环境污染的加剧，癌症的发病率呈不断上 升的趋势，并且逐步成为了人类死亡的首位因素。根据国际癌症研究署预测，如不采取有效 措施，我国癌症发病数和死亡数到2020年将上升至400万人和300万人；2030年将上升至 500万人和350万人。因此癌症的预防及治疗是我国乃至全世界疾病防治研究的重大课题， 是全社会特别是医学领域急待解决的核心问题之一。药物治疗是癌症预防及治疗的主要手 段之一，高效低毒的新型抗癌药物的研究开发是延长患者存活时间、提高生存质量的希望。 据统计来源于天然产物的小分子药物约占到抗癌治疗药物的60%，因此以天然产物为先导 化合物开发抗癌药物是抗癌新药开发研究的主要途径之一。
[0003]侧莖棄吾（Ligulariapleurocaulis)属于菊科（Compositae)棄吾属 (Ligularia)植物，多种该属植物作为中药"紫菀"的代用品，有着很长的药用历史。对该属 植物的研究发现其富含多种类型的倍半萜类化合物。本发明首次从产自四川的侧茎橐吾中 分离得到一个新的艾里莫芬烷型倍半萜二聚体，并发现该化合物具有较好的抗肿瘤活性。 [0004]
【发明内容】
：本发明的目的在于提供一种新的艾里莫芬烷型倍半萜二聚体及其制备 方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0005] 本发明是从侧茎橐吾（产于四川康定折多山）中分离得到一个新的艾里莫芬烷型 倍半砲二聚体，命名为LigupleurolideA，其化学结构式如下：
[0006]
[0007] 本发明所述的一种新的艾里莫芬烷型倍半萜二聚体的制备方法如下：
[0008] (1)提取：将侧茎橐吾干燥全草粉碎，以80 - 100%的乙醇回流提取2 - 5次，每 次2 - 5小时；合并提取液，提取液减压浓缩成流浸膏，加水稀释后以乙酸乙酯萃取2 - 5 次，减压回收溶剂得到乙酸乙酯部位；
[0009] (2)分离：将上一步得到的乙酸乙酯部位应用硅胶柱色谱，以体积比为30:1 - 1:1 的石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层色谱检测，收集含LigupleurolideA的流份，再经硅胶柱色 谱，以体积比为150:1 - 5:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，进一步经硅胶柱色谱，以体积比为 5:1的环己烷-乙酸乙酯洗脱，最后经葡聚糖凝胶柱色谱，以体积比为2:1的氯仿-甲醇洗 脱，薄层色谱检测，得LigupleuroIideA0
[0010] LigupleurolideA:无色针晶，mp208-2KTC; [a];: =-12 (C0.00丨，CHCI，，）； HR-ESI-MS:m/z705. 2770[M+Na] + (计算值(：4。114201。似，705.2676)，分子式(： 4。1142010， 分子量 682 ;红外光谱unax:3413,1778,1674,1458,1390,1204,1081，743,637cmS1H NMR(CDC13,400MHz)Sppm:6. 20 (2H,dd,J= 10. 0, 2. 8Hz,H-2 和H-2 '），6. 62 (2H,dd,J= 10. 0,I. 8Hz,H-3 和H-3'），3. 10 (2H,m,H-4 和H-4'），5. 71 (2H,d,J= 0? 9Hz,H-6 和H-6'）， 6. 79 (2H,s,H-9 和H-9'），I. 89 (6H,d,J= 0? 9Hz,H-13 和H-13'），I. 10 (6H,dd,s,H-14 和 H-14'），1.22(6H,d，J= 7.6Hz,H-15 和H-15'），6.24(2H,q,J= 7.2Hz,H-3" 和H-3"'）， I.97 (6H,d,J=7. 3Hz,H-4" 和H-4"'），I.96 (6H,s,H-5" 和H-5"'）；和13CNMR(CDC13， 100MHz)Sppm:186.2(s，C-l和C-l'），128.l(d，C-2 和C-2'），155.2(d，C-3 和C-3'）， 41. 7 (d,C-4 和C-4'），50.I(s,C-5 和C-5'），75. 8 (d,C-6 和C-6'），153. 3 (s,C-7 和C-7'）， 86.0(s，C-8 和C-8'），126.6(d，C-9 和C-9'），146.7(s，C-10 和C-10'），126.3(s，C-ll 和C-ll'），171. 3(s，C-12 和C-12'），8. 7(q，C-13 和C-13'），14. 0(q，C-14 和C-14'）， 16. 4(q，C-15 和C-15'），165. 0 (s，C-l"和C-1"'），125. 8 (s，C-2"和C-2"'），142. 4(d，C-3" 和〇3"'），15.8(9,〇4"和(：-4"'），20.2(9，(：-5"和(：-5"'）。
[0011] 上述艾里莫芬烧型倍半砲二聚体（LigupleurolideA)经体外抗肿瘤活性筛选试 验，结果证实该化合物对人肝癌细胞（HepG2)、人肺癌细胞（A549)和人乳腺癌细胞（MCF-7) 三种肿瘤细胞株具有显著细胞毒活性（如表1所示）。
[0012] 本发明所述的艾里莫芬烧型倍半砲二聚体（LigupleurolideA)可作为活性成分， 进一步制备成抗肿瘤药物。
【具体实施方式】：
[0013]实施例I:LigupleurolideA的制备
[0014] 侧莖橐吾（Ligulariapleurocaulis)干燥全草8. 5kg，粉碎，以95%乙醇回流提 取3次，每次3小时，合并所有的提取液，减压浓缩成流浸膏，加水稀释后以乙酸乙酯萃取3 次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯部位270g。将上述乙酸乙酯部位与280g硅胶混合拌 样，应用硅胶柱色谱，以体积比为30:1 - 1:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，薄层色谱检测，收 集含有LigupleurolideA的流分，再经硅胶柱色谱，以体积比为150:1 - 5:1的石油醚-丙酮梯度洗脱，进一步经硅胶柱色谱，以体积比为5:1的环己烷-乙酸乙酯洗脱，最后经葡 聚糖凝胶柱色谱，以体积比为2:1的氯仿-甲醇洗脱，薄层色谱检测，得LigupleurolideA 纯品llmg。
[0015] 实施例2 :体外抗肿瘤实验（MTT法）
[0016] 分别利用含10 %胎牛血清的高糖DMEM培养基培养人肝癌细胞（HepG2)和人肺癌 细胞（A549)，含10 %胎牛血清的低糖DMEM培养基培养人乳腺癌细胞（MCF-7)。然后将处于 对数生长期的三种细胞接种到96孔培养板中，5000细胞/孔。24小时后，往三种肿瘤细胞 中分别加入不同浓度的待测化合物，继续培养72小时。倒去细胞培养基，各孔加入100yI的MTT溶液（PBS配制，0. 5mg/ml)，继续孵育4小时。倒去MTT溶液，各孔中加入150y1的 DMSO,振荡10分钟，测定570nm波长下的吸光度，计算不同浓度待测化合物对肿瘤细胞的生 长抑制率并计算待测化合物对肿瘤细胞半数生长抑制时的药物浓度（ICm)，每个实验重复 三次。
[0017] 上述艾里莫芬烧型倍半砲二聚体（LigupleurolideA)经体外抗肿瘤活性筛选试 验结果证实，LigupleurolideA对人肝癌细胞（HepG2)、人肺癌细胞（A549)和人乳腺癌细 胞（MCF-7)三种肿瘤细胞株均显示出明显的抑制作用（如表1所示）。
[0018] 本发明所述的一种新的艾里莫芬烧型倍半砲二聚体（LigupleurolideA)可作为 活性成分，进一步制备成抗肿瘤药物。
[0019] 表ILigupleurolideA对三种肿瘤细胞株的抑制作用（IC5。，yM)
[0020]
【主权项】
1. 一种艾里莫芬烧型倍半祗二聚体，命名为LigupleurolideA,具有W下结构式：2. 如权利要求1所述的艾里莫芬烧型倍半祗二聚体的制备方法，其特征在于具体步骤 如下： (1) 提取：将侧茎囊吾干燥全草粉碎，W80 - 100%的乙醇回流提取2 - 5次，每次2 -5小时；合并提取液，提取液减压浓缩成流浸膏，加水稀释后W乙酸乙醋萃取2 - 5次，减压 回收溶剂得到乙酸乙醋部位； (2) 分离：将上一步得到的乙酸乙醋部位应用硅胶柱色谱，W体积比为30:1 - 1:1的石 油酸-丙酬梯度洗脱，薄层色谱检测，收集含LigupleurolideA的流份，再经硅胶柱色谱， W体积比为150:1 - 5:1的石油酸-丙酬梯度洗脱，进一步经硅胶柱色谱，W体积比为5:1 的环己烧-乙酸乙醋洗脱，最后经葡聚糖凝胶柱色谱，W体积比为2:1的氯仿-甲醇洗脱， 薄层色谱检测，得LigupleurolideA。3. 权利要求1所述的艾里莫芬烧型倍半祗二聚体LigupleurolideA在制备抗肿瘤药 物中的应用。4. 权利要求1所述的艾里莫芬烧型倍半祗二聚体LigupleurolideA在制备抗肿瘤药 物的前体或先导化合物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种新的艾里莫芬烷型倍半萜二聚体及其制备方法和应用。该化合物分离自菊科橐吾属植物侧茎橐吾(Ligularia？pleurocaulis)的全草，命名为Ligupleurolide？A，经体外抗肿瘤活性研究表明该化合物具有显著的抗肿瘤活性。该化合物可进一步作为活性成分，制备抗肿瘤药物。
【IPC分类】A61P35/00, C07D307/92
【公开号】CN105001188
【申请号】CN201510410139
【发明人】谢光波, 谢亚
【申请人】电子科技大学
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年7月13日