一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒的制作方法

本发明涉及生物检测
技术领域：
，尤其涉及一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒。
背景技术：
：农药残留(pesticideresidues)是指农药使用后一个时期内没有被完全分解而残留在生物体、收获物、农药残留土壤、水体、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。农药残留问题随着农药的大量生产和广泛使用而产生，到目前为止，世界上化学农药年产量近200万吨，约有1000多种人工合成化合物被用作杀虫剂、杀菌剂、落叶剂等类农药，尤其是有机农药的大量施用，造成了严重的农药污染问题，残留的农药进入粮食、蔬菜、水果、鱼、虾、肉、蛋等食品中，造成食物污染，对人体健康构成严重的威胁。目前，大多数国家和地区常常采用塑料薄膜、塑料保鲜膜或者塑胶材料包装各类农产品，这些塑料制品中含有塑化剂，其中，由于邻苯二甲酸二癸酯是邻苯二甲酸酯类(PAEs)物质可以让硬塑胶变成有弹性的塑胶，被广泛运用，研究表明，PAEs类物质在人体内能引起生殖系统异常，甚至导致胎儿畸形等重大疾病，其与农药残留物一起使用不仅对食物造成双重污染，对人体健康的威胁更成倍增长。由于目前测试农药残留物和PAEs类物质需采用液相或气质联用色谱等操作复杂且维护价格高的大型仪器设备进行检测，一方面这些仪器的开机和维护费用昂贵，不利于经济适用，另一方面，这些设备的检测时间较长，不能及时给出结果。因此，亟需一种成本低、操作简单、检测速度快的器件。基于此，本发明提供一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒。技术实现要素：针对上述现有技术存在的不足，本发明提供了一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒，以解决上述技术问题。本发明通过以下技术方案实现：一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒，包括盒体、盖体和盒底座，盖体位于盒体的顶部，盒底座设置于盒体的底部；所述盒底座上设置有多个放置孔，放置孔孔分别固设有检测试纸、样品瓶和检测盘。优选地，所述样品瓶的内壁上设有刻度线。优选地，所述检测盘的内壁上设有检测刻度线。优选地，所述检测试纸为邻苯二甲酸二癸酯胶体金免疫层析检测试纸。优选地，所述邻苯二甲酸二癸酯胶体金免疫层析检测试纸包括样品层、胶体金标记层、检测反应层、吸水层和背衬；所述胶体金标记层上包被有邻苯二甲酸二癸酯单克隆抗体-胶体金标记物和酶标记的抗有机磷特异性抗体，所述检测反应层上设置有检测线T和质控线C，检测线T上包被有邻苯二甲酸二癸酯-载体偶联物的包被抗原；所述质控线C包被有兔抗鼠IgG和生物酶；所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个与抗原特异结合的位点；所述样品层、胶体金标记层和检测反应层按照从左至右、从上至下的顺序依次结合在背衬板同一面上，所述胶体金标记层和检测反应层的端部重叠；所述吸水层结合在检测反应层的另一端。相对于现有技术，本发明的有益效果：该农药残留胶体金检测试剂盒放置、运输方便，操作简单，保存时间长，适用于现场检测和大批量样品的筛查。本发明具有特异性强；灵敏度高，达到9.63ng/ml，检测速度快、通量大、操作简单方便、颜色稳定、检测温度适宜范围宽、试纸保质期长和成本低廉等优点，并能够实现半定量检测，适合于食品药品、环保、检验检疫等部门对样品中的邻苯二甲酸二癸酯进行快速检测，本发明不需要配合大型仪器使用，很多实验条件较差基层单位也可以轻松开展检测，因此具有广阔的市场前景和推广意义。附图说明图1是本发明的结构示意图。图2是图1中所示的检测试纸的结构放大图。其中：1-样品层，2-胶体金标记层，3-检测反应层，4-吸水层，7-背衬板，11-盒体，12-盖体，13-盒底座，14-样品瓶，17-检测盘，18-检测试纸，T1-第一检测线，T2-第二检测线，C1-第一质控线，C2-第二质控线，C3-第三质控线。具体实施方式结合以下实施例对本发明作进一步描述。图1是本发明的结构示意图，如图1所示，一种农产品药物残留胶体金检测试剂盒，包括盒体11、盖体12和盒底座13，盖体11位于盒体11的顶部，盒底座13设置于盒体11的底部；所述盒底座13上设置有多个放置孔，放置孔孔分别固设有如图2所示的检测试纸18、样品瓶14和检测盘17。优选地，所述样品瓶14的内壁上设有刻度线。优选地，所述检测盘17的内壁上设有检测刻度线。优选地，所述检测试纸18为邻苯二甲酸二癸酯胶体金免疫层析检测试纸。如图2所示，所述邻苯二甲酸二癸酯胶体金免疫层析检测试纸包括由具有吸水性能的材料制备而成的样品层1、胶体金标记层2、检测反应层3、吸水层4和由塑料制备而成的背衬板7。所述胶体金标记层2上包被有邻苯二甲酸二癸酯单克隆抗体-胶体金标记物和酶标记的抗有机磷特异性抗体，在本实施例中，酶的种类可以采用辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或者是β-半乳糖苷酶，有机磷为甲基对硫磷、倍硫磷、氯硫磷、久效磷或者二甲硫吸磷中的一种或者多种混合；所述检测反应层3上设置有检测线T和质控线C，检测线T为1～3条，质控线C为1～3条，检测线T上包被有邻苯二甲酸二癸酯-载体偶联物的包被抗原；所述质控线C包被有兔抗鼠IgG和生物酶。在本实施例中，检测线T包括如图2所示的依次排布的第一检测线T1和第二检测线T2；质控线C包括依次排布的第一质控线C1、第二质控线C2和第三质控线C3；本实施例中严格控制胶体金标抗体、邻苯二甲酸二癸酯-载体偶联物和兔抗鼠IgG的比例；可根据不同的检测线或质控线的显色与否以及颜色的深浅，判定样液中是否含有邻苯二甲酸二癸酯和有机磷，可以判定样品中的待检物质浓度差异，实现半定量检测。所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个与抗原特异结合的位点；所述样品层1、胶体金标记层2和检测反应层3按照从左至右、从上至下的顺序依次结合在背衬板7同一面上，所述胶体金标记层2和检测反应层3的端部重叠；所述吸水层4结合在检测反应层3的另一端。在本实施例中，所述金标抗体为邻苯二甲酸二癸酯单克隆抗体以邻苯二甲酸二癸酯-载体蛋白偶联物作为抗原免疫动物后制备获得的。所述邻苯二甲酸二癸酯-载体偶联物所用的载体物质为蛋白质、蛋白质片段、合成多肽、半合成多肽、多糖，或者所述载体物质为具有活性基团的其他合成或天然聚合物，如白喉毒素、破伤风毒素、酵母、尼龙、右旋葡聚糖、纤维素或半纤维素；为了达到更好的效果，所述载体物质进一步可选用牛血清白蛋白、卵清白蛋白、匙孔血蓝蛋白、甲状腺球蛋白或L-多聚赖氨酸等。本发明中所采用的检测试纸的工作原理如下：质控线C在检测试纸中所起的作用是无论样品溶液中是否含有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，胶体金标记层2包被的金标抗体上移到达质控线C时都可以与质控线C上的兔抗鼠IgG或者生物酶集合，聚集形成肉眼可见的红色颗粒，质控线C始终显色，如果在测试过程中，质控线C不显示，则表示测试无效。如果待测样品中有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，待测溶液在吸收层被吸收并通过毛细管作用向前移动，样品中的小分子物质邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷会快速移动，当移动到胶体金标记层2时，就会与该层上的胶体金包被的邻苯二甲酸二癸酯单克隆抗体或者酶标记的抗有机磷特异性抗体结合，因为邻苯二甲酸二癸酯单克隆抗体酶标记的抗有机磷特异性抗体只有一个抗原结合位点，且样品中游离态的邻苯二甲酸二癸酯结合能力比偶合态的邻苯二甲酸二癸酯的强，所以当结合了游离态的邻苯二甲酸二癸酯的胶体金标抗体继续移动到检测线T时，不能与包被在检测线T上的邻苯二甲酸二癸酯-载体偶联物结合，此时检测线为无色，结合了游离态的邻苯二甲酸二癸酯的胶体金标抗体继续向前移动时，当移动到质控线C时，会与包被在质控线上的兔抗鼠IgG或者有机磷结合，此时质控线为红色。即当检测线T为无色，质控线为红色时，检测结果为阳性。如果待测样品中无邻苯二甲酸二癸酯或有机磷，待测溶液在吸收层被吸收并通过毛细管作用向前移动，胶体金标记层2包被的邻苯二甲酸二癸酯胶体金标抗体或酶标记的抗有机磷特异性抗体也向前移动，到达检测线T时就与邻苯二甲酸二癸酯-载体或有机磷-载体偶联物结合，此时检测线T为红色，胶体金标抗体或者酶标记的抗有机磷特异性抗体继续向前移动，当移动到质控线C时，会与包被在质控线上的兔抗鼠IgG或者生物酶结合，此时质控线为红色。即当检测线T为红色，质控线C为红色时，检测结果为阴性。本发明严格控制胶体金标抗体、酶标记的抗有机磷特异性抗体、邻苯二甲酸二癸酯-载体偶联物和兔抗鼠IgG以及生物酶的比例。具体应用时，可根据不同的检测线或参数线的显色与否以及颜色的深浅，判定样液中是否含有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，以及含量的多与少，实现半定量检测。当两条检测线T1和T2均显红色时，则样品为阴性(即不含邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷)；当检测线T1显色，检测线T2不显色时，则样品中含有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，但其浓度不高；当两条检测线均不显色时，则样品中邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷的浓度很高，以此进行半定量检测。当检测线T颜色深于参考线C3时，则样品为阴性(不含邻苯二甲酸二癸酯邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷或极微量)；当检测线T颜色深于C3浅于参考线C2时，则样品含有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，浓度比较低；当检测线T颜色深于C2浅于C1时，则样品中含有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，浓度比较高；当检测线T不显色时，则样品中含有邻苯二甲酸二癸酯或者有机磷，浓度非常高，以此进行半定量检测。本发明由于采用邻苯二甲酸二癸酯胶体金和酶标记的抗有机磷特异性抗体免疫检测试纸，金标抗体酶标记的抗有机磷特异性抗体上只有一个与抗原特异结合的位点，具有特异性强；灵敏度高，达到9.63ng/ml，检测速度快、通量大、操作简单方便、颜色稳定、检测温度适宜范围宽、试纸保质期长和成本低廉等优点，并能够实现半定量检测。该快速检测试纸条在4～40℃都可使用，5～15min以后便可观察结果，适合于食品药品、环保、检验检疫等部门对样品中的邻苯二甲酸二癸酯或有机磷农药进行快速检测。使用不同的检测方法对同一饮料进行邻苯二甲酸二癸酯检测，对比其灵敏度(检出极限)和准确度。表1三种方法对饮料中的邻苯二甲酸二癸酯检测检出极限(ng/ml)准确度检测试纸9.6398.7％HPLC12.4798.2％GC11.3998.6％使用不同的检测方法对同一黄瓜进行有机磷农药残留检测，对比其灵敏度(检出极限)和准确度，如表2所示。表2检出极限(ng/ml)准确度检测试纸9.2099.6％HPLC13.4597.2％GC9.9999.1％由表1和表2可以知，使用本发明的试纸检测饮料中的邻苯二甲酸二癸酯，与传统的方法HPLC和GC法相比，检出极限均低于HPLC和GC法，即灵敏度更高达9.63ng/ml，准确度与HPLC和GC法相比差不多。检测黄瓜表面有机磷残留时检出极限均低于HPLC和GC法。因此使用本发明提供的试剂盒具有操作简单，耗时短，对检测样品不需要进行除杂的预处理，有利于条件一般的基层单位开展工作，也方便相关部门进行现场快速检测。最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。当前第1页1 2 3