一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法及应用与流程

文档序号:12452194阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1) 将直径为3 ~ 5mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨,超纯水清洗干净;

(2) 取6 µL、1.0 ~ 2.0mg/mL的Au@GS滴加到电极表面,室温下晾干,用超纯水冲洗电极表面,晾干;

(3) 继续将6 µL、5 ~ 15 µg/mL的鳞状细胞癌标志物捕获抗体滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 ℃冰箱中干燥;

(4) 继续将3 µL、1.5 ~ 3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到电极表面,用以封闭电极表面上非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,4 ℃冰箱中晾干;滴加6µL、0.0005 ~ 50ng/mL的一系列不同浓度的鳞状细胞癌抗原溶液,超纯水冲洗电极表面,4℃冰箱中干燥;

(5) 将6 µL、2.0~ 3.0 mg/mL的海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液,滴涂于电极表面,置于4℃冰箱中晾干,制得一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法,所述Au@GS的制备,步骤如下:

取8 ~ 16 mg氧化石墨烯溶解在10 mL的超纯水中,超声50 ~70 min,依次加入200 µL、质量分数为1%的HAuCl4,20 µL、含1%柠檬酸钠的聚乙二醇溶液,在180℃下反应8 ~ 12h,冷却至室温,离心、超纯水洗涤各三次,所得固体于60˚C真空干燥箱内干燥10 ~ 14 h,制得Au@GS;

所述含1%柠檬酸钠的聚乙二醇溶液是将0.1g柠檬酸钠固体溶解于9.9g聚乙二醇制得。

3. 如权利要求1所述的一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法,所述海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液的制备,包括以下步骤:

(1) 氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管的制备

将0.5 ~ 1.5 g 碳纳米管置于250mL三口烧瓶中,依次加入60 mL的浓硫酸和20 mL的浓硝酸,在100℃下油浴加热反应2 h,冷却至室温后,将所得悬浊液移入500 mL烧杯,加300 mL超纯水稀释,抽滤,用超纯水洗涤至滤液成中性,所得固体在60˚C真空干燥箱内干燥10 ~ 14 h,制得磺化碳纳米管;

将4 ~ 8 mg上述磺化碳纳米管和15 ~ 30 mg (NH4)2MoS4溶解在15 ~ 30 mL二甲基甲酰胺中,超声30 min后,在210℃条件下反应18 h,冷却至室温,离心、超纯水、无水乙醇分别洗涤三次, 60℃下干燥24 h,得到二硫化钼掺杂磺化碳纳米管;

将0.1 ~ 0.3 g 上述二硫化钼掺杂磺化碳纳米管置于10 mL无水乙醇中超声10 min,在搅拌条件下缓慢加入 0.1 ~ 0.3 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷, 70℃下搅拌反应1.5 ~ 2 h,冷却至室温,离心、超纯水、无水乙醇分别洗涤三次, 60℃下干燥24 h,得到氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管;

(2) 海胆状金钯纳米粒子的制备

将1 ~ 2mL、质量分数为1%的 HAuCl4加入到99mL超纯水中,油浴加热到120℃,搅拌30 min,然后加入10 mL、质量分数为1%的柠檬酸钠,加热20 ~ 30 min后,制得金纳米粒子溶液;

取10mL 金纳米粒子溶液在8000 ~ 10000 rpm条件下,离心6 ~ 10 min,将所得沉淀物分散在10 mL含0.05 moL.L-1的十六烷基三甲基溴化铵和0.0126 moL.L-1的5-溴水杨酸的混合溶液中,离心,超纯水洗涤三次,再分散到10 mL超纯水中备用;将上述分散好的10 mL溶液和40 ~ 60 mL 1 m moL.L-1的H2PdCl4溶液依次加入到100 mL的圆底烧瓶中,超声1 ~ 3 min,加入10 ~ 15 mL、10 m moL.L-1的抗坏血酸溶液,倒置10 ~ 30 s,静置6 h,离心、超纯水洗涤三次,室温下干燥24h, 制得海胆状金钯纳米粒子;

将50mg海胆状金钯纳米粒子分散到50mL超纯水中,制得1 mg.mL-1的海胆状金钯纳米粒子溶液备用;

(3) 海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液的制备

将20 ~ 30 mg上述步骤(1)制备的氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管倒入20 ~ 40 mL、1 mg.mL-1的海胆状金钯纳米粒子溶液中,超声1 h,过滤,室温下干燥20 ~ 24h,制得海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管;

将4~ 6 mg的海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管分散到1 ~ 2 mL超纯水中,加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的鳞状细胞癌标志物检测抗体溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4磷酸盐缓冲溶液,在4˚C恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h;在4˚C下,6000 rpm转速下离心10 ~ 15 min,得到下层沉淀物,加入1 mL、50mmol/L 的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液,制得海胆状金钯@氨基化二硫化钼掺杂磺化碳纳米管检测抗体孵化物溶液,4˚C下保存备用。

4.如权利要求1所述的制备方法制备一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器,用于鳞状细胞癌标志物的检测,步骤如下:

(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.10 ~ 7.98磷酸盐缓冲溶液中进行测试;

(2)用时间-电流法对分析物进行检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔 0.1 s,运行时间400 s;

(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH = 7.4磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。

5.如权利要求1所述的一种鳞状细胞癌标志物夹心型免疫传感器的制备方法制备的传感器,其特征在于,所述鳞状细胞癌标志物为SCCA。

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