本发明属于食品分析测定
技术领域：
，具体涉及一种高效液相色谱检测芝麻油中木脂素的方法。
背景技术：
：芝麻油是一种特色油脂，其油脂氧化稳定性好，保质期也较长。这是由于芝麻油中含有芝麻酚、芝麻素和芝麻林素等天然抗氧化成分（结构式如下），其中芝麻酚是酚类物质，具有很强的抗氧化性；而芝麻素和芝麻林素本身不是酚类，但是其在芝麻油加工和储存过程中会部分转化为芝麻酚。此外，不同来源的芝麻油中所含木脂素含量也存在较大差异。因此，为了更加全面的评价芝麻油的品质以及芝麻油品种，同时测定芝麻油中3种木脂素（芝麻酚、芝麻素和芝麻林素）的含量具有十分重要的意义。芝麻油主要木脂素结构式尽管已经报道的芝麻木脂素以及单独芝麻酚的分析检测方法较多，但是由于芝麻油的原料品种以及不同加工的影响，导致芝麻油中的微量成分非常复杂，干扰较多，对芝麻油中木脂素的同时分析测定仍然是一项具有挑战性的工作。目前常用的方法是国家标准“粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法”（GB/T31579-2015）。该方法采用硅胶固相萃取柱对样品油样进行提取、净化和富集后，所得溶液通过高效液相色谱仪（HPLC）、紫外检测器定量测定芝麻素和芝麻林素的含量。此方法样品前处理复杂费时，一次样品前处理周期为4-6小时。其中固相萃取柱需先活化方能使用；且固相萃取纯化过程，耗时较多、有机溶剂使用量大，严重影响分析效率。因此，建立一种样品前处理简单且灵敏度更高的方法，对于提高分析效率具有重要的意义。技术实现要素：本发明的目的正是针对现有技术中芝麻油中木脂素（芝麻酚、芝麻素和芝麻林素）测定方法前处理繁琐费时、有机溶剂用量大的问题，提供一种基于低共熔溶剂液相微萃取串联高效液相色谱法的分析方法。该方法利用苯酚类低共熔溶剂液-液萃取油脂样品，萃取后经离心，直接采用高效液相色谱仪（HPLC-UV）进行检测，同时测定芝麻油中主要的木脂素（芝麻酚、芝麻素和芝麻林素）的含量。本发明的目的是通过以下方案来实现的：本发明的芝麻油中木脂素的测定方法包括以下步骤：a、样品提取准确称取一定量的芝麻油于三角瓶中，并用正己烷溶解，加入一定量的低共熔溶剂，超声萃取，3000r/min离心10min，取低共熔溶剂相进高效液相色谱仪分析。b、标准溶液的配制分别准确称取0.10g（精确到0.10mg）木脂素于三个不同的100mL棕色容量瓶中，分别用甲醇（色谱纯）溶解并定容至100mL，制得木脂素浓度为1000μg/mL的储备液。置于4℃冰箱中保存备用。移取不同体积的各木脂素储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容，制成浓度为5、10、20、50、100、200、500μg/mL的芝麻酚标准工作溶液、芝麻素标准工作溶液和芝麻林素标准工作溶液。混合均匀，分别过0.45μm有机滤膜后取20μL进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，建立标准溶液的线性工作曲线。c、样品的分析：HPLC-UV分析条件：紫外检测器，检测器波长：298nm；287nm；色谱柱：WatersSymmetryC18柱（250mm×5μm×4.6mm）；柱温：30℃；进样量：20μL。流动相A：甲醇，B：0.5%乙酸水，其中A：0min~10min，30%~0%；10min~10.5min，0%~30%；10.5min~19.5min，30%。19.5min~20min，30%~80%；20min~30min，80%；30min~32min，80%~30%；32min~35min，30%。步骤a中，芝麻油与正己烷、低共熔溶剂的体积比为1∶1-10∶0.5-2。样品提取时，超声温度20~60℃，萃取时间5~30分钟。其中酚类低共熔溶剂的制备过程如下：对甲苯酚（或间甲苯酚）与氯化胆碱（二者摩尔比为：2:1）在圆底烧瓶中80℃加热混合30分钟，形成均一透明的液体，即为酚类低共熔溶剂。利用本发明的方法对以下三种木脂素化合物（芝麻酚、芝麻素和芝麻林素）的标准物品进行测定，其有关数据如化合物的保留时间如表1所示：表1化合物的液相色谱分析参数化合物（英文名称）RT（min）芝麻酚（sesamol）17.8芝麻素（sesamin）27.0芝麻林素（sesamolin）28.0将同芝麻油一天内进行6次平行测定及分5天测定，测定结果的相对标准偏差（RSD）表示该方法的日内重复性和日间重复性，同时进行回收率实验，结果如表2所示。可见，本方法与原有的分析方法相比，简化了样品前处理过程，省去了固相萃取柱纯化步骤，实验的重复性和回收率很好，适用于大批量样品的分析。表2方法的重复性和回收率检测结果化合物sesamolsesaminsesamolinRSD（日内,%）0.740.670.48RSD（日间,%）0.970.810.62回收率（%）97.398.498.8本发明的有益效果如下：本发明的方法的关键是利用一种酚类低共熔溶剂作为液相微萃取的溶剂，其作用机制是通过酚类低共熔溶剂与芝麻油中的各种木脂素组分通过∏-∏相互作用而实现了同时提取。发明采用苯酚类低共熔溶剂液-液萃取油脂样品，萃取后离心，直接采用高效液相色谱仪（HPLC-UV）进行检测，测定芝麻油中主要的木脂素（芝麻酚、芝麻素和芝麻林素）的含量，定量方法为外标法，使样品前处理简化，并且准确性、重复性好。该发明方法不需要采用固相萃取柱进行纯化，同时也省去了下一步浓缩的过程，有效地简化了样品前处理步骤。附图说明图1为此发明中标准溶液在HPLC-UV仪器上的色谱图。具体实施方式本发明以下将结合实施例作进一步说明：实施例1采用酚类低共熔溶剂（对甲苯酚与氯化胆碱摩尔比为2:1）400μL加入到盛有0.2g芝麻油的三角瓶中，并加入正己烷用量3mL，在50℃下萃取萃取30分钟。然后3000r/min离心10min，取酚类低共熔溶剂（100μL）相进高效液相色谱仪分析。HPLC-UV色谱分析条件，紫外检测器，检测器波长：298nm；287nm。色谱柱：WatersSymmetryC18柱（250mm×5μm×4.6mm）；柱温：30℃；进样量：20μL。流动相A：甲醇，B：0.5%乙酸水，其中A：0min~10min，30%~0%；10min~10.5min，0%~30%；10.5min~19.5min，30%。19.5min~20min，30%~80%；20min~30min，80%；30min~32min，80%~30%；32min~35min，30%。对7个品牌的芝麻油样品进行测定，结果如下表所示：芝麻油样品Sesamol(mg/kg)Sesamin(mg/kg)Sesamolin(mg/kg)151.622704.061175.89254.302396.28709.31385.002439.66937.794130.422681.43855.51568.272076.85665.65662.482042.62778.36759.132075.67617.47实施例2采用酚类低共熔溶剂（间甲苯酚与氯化胆碱摩尔比为2:1）100μL加入到盛有0.2g调和油（含有芝麻油）的三角瓶中，并加入正己烷用量1mL，在30℃下萃取萃取20分钟。然后3000r/min离心10min，取酚类低共熔溶剂（100μL）相进高效液相色谱仪分析。HPLC-UV色谱分析条件，紫外检测器，检测器波长：298nm；287nm。色谱柱：WatersSymmetryC18柱（250mm×5μm×4.6mm）；柱温：30℃；进样量：20μL。流动相A：甲醇，B：0.5%乙酸水，其中A：0min~10min，30%~0%；10min~10.5min，0%~30%；10.5min~19.5min，30%。19.5min~20min，30%~80%；20min~30min，80%；30min~32min，80%~30%；32min~35min，30%。对3个品牌的调和油（含芝麻油）样品进行测定，结果如下表所示：调和油样品Sesamol(mg/kg)Sesamin(mg/kg)Sesamolin(mg/kg)12.9564.7524.8224.78127.3546.7035.77165.1160.49当前第1页1 2 3