一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法与流程

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法。

背景技术：

盐酸川芎嗪化学名为盐酸四甲基吡嗪，具有多种心脑血管药理作用，广泛应用于冠心病、脑血栓、脉管炎等闭塞性血管疾病。其可抑制血小板聚集，降低血小板聚集指数、增加血流量，改善微循环。盐酸川芎嗪还能提高血小板表面电荷、抑制血小板的活化、解聚已经聚集的血小板，具有活血化瘀、抗血栓形成的功能。对心血管作用：盐酸川芎嗪具有扩张血管、增加冠脉流量、促进内皮细胞释放活性物质、提高心肌收缩、降低血压的作用，这可能与其可通过交感神经兴奋肾上腺素能的β受体、能对抗血管紧张素ⅱ缩血管的效应有关。因此，盐酸川芎嗪具有保护心脏、促进内皮细胞修复、抗慢性心力衰竭、抗动脉粥样硬化等作用。同时，盐酸川芎嗪还可对缺氧心室肌细胞有浓度依赖性的保护抑制作用，能抑制受损伤的细胞痉挛，提高细胞存活率，有效缓解心肌缺血再灌注。盐酸川芎嗪具有增加肾流量、利尿的作用，这可能与肾小球毛细血管的扩张有关；还能够抑制胃运动来对抗应激性胃溃疡。另据研究表明，盐酸川芎嗪在一定程度上还可用于颈椎病、突发性耳聋、过敏性紫癜、癫痫等疾病的治疗。

盐酸川芎嗪质量标准收载于《中国药典》2015年版二部中，其中只有有关物质检测项，目前尚无基因毒性杂质检测方法，无法全面的反映产品的质量状况；且药典中还没有收录该产品基因毒性杂质的测定方法。

基因毒性杂质能够直接作用于人体细胞基因，进而引发基因突变，产生肿瘤等疾病。利用科学的分析方法对药物中的基因毒性杂质进行分析，能够使药物中的基因毒性杂质数目和来源得以明确，对提升药物质量具有积极的意义。

技术实现要素：

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，本发明可以快速、准确的进行盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定，为保证和提升盐酸川芎嗪质量奠定基础。

本发明提出了一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，采用液相色谱-质谱联用法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇和水的体积比为20-40：60-80的混合溶液，流速为0.2-0.6ml/min；柱温为25-45℃，四级杆质谱检测器，大气压化学离子化为离子源，采用选择离子(sim)153m/z正离子模式检测，干燥气体流速为10l/min，雾化气体流速为4.0l/min，离子源电压为4.0-5.0kv，离子源温度为300-400℃。

优选地，色谱柱的长度为75mm。

优选地，甲醇和水的体积比可以为20：80、21：79、22：78、23：77、24：76、25：75、26：74、27：73、28：72、29：71、30：70、31：69、32：68、33：67、34：66、35：65、36：64、37：63、38：62、39：61或40：60。

优选地，流动相为甲醇和水的体积比为30：70的混合溶液。

优选地，流速可以为0.2、0.3、0.4、0.5或0.6ml/min。

优选地，流速为0.2ml/min。

优选地，柱温可以为25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45℃。

优选地，柱温为40℃。

优选地，离子源电压可以为4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0kv。

优选地，离子源电压为4.5kv。

优选地，离子源温度可以为300、310、320、330、340、350、360、370、380、390或400℃。

优选地，离子源温度为350℃。

优选地，进样量为1-20μl。

优选地，进样量可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20μl。

本发明的具体步骤为：分别取供试品溶液和对照品溶液依次进样，记录色谱图，以外标法计算盐酸川芎嗪中基因毒性杂质的含量。

上述供试品溶液为：取盐酸川芎嗪适量，精密称定，加流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液，作为供试品溶液。

上述对照品溶液为：取1-氧代-2，3，5，6-四甲基吡嗪适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含125ng的溶液，作为对照品溶液。

本发明选用液相色谱-质谱联用(lc-ms)法，并筛选出适宜的测定条件，可以快速、准确的进行盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定，并且测定条件稳定，以1-氧代-2，3，5，6-四甲基吡嗪作为对照品，以外标法进行测定，使得对盐酸川芎嗪质量的监控更加全面，保证了产品质量的有效性和一致性。

附图说明

图1为本发明检测盐酸川芎嗪基因毒性杂质的图谱，其中，a为质谱图，b为质谱对应的峰面积图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，采用液相色谱-质谱联用法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，长度为75mm，流动相为甲醇和水的体积比为30：70的混合溶液，流速为0.2ml/min；柱温为40℃，四级杆质谱检测器，大气压化学离子化为离子源，采用选择离子(sim)153m/z正离子模式检测，干燥气体流速为10l/min，雾化气体流速为4.0l/min，离子源电压为4.5kv，离子源温度为350℃。

样品配制：

供试品溶液为：取盐酸川芎嗪适量，精密称定，加流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液为：取1-氧代-2，3，5，6-四甲基吡嗪适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含125ng的溶液，作为对照品溶液。

试验操作：分别取对照品溶液和供试品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，典型图谱参见图1。

由图1可见对照品及供试品色谱图中质核比为153m/z下检测出的色谱峰保留时间为4.082min，峰形良好，可用于检测盐酸川芎嗪中基因毒性杂质1-氧代-2，3，5，6-四甲基吡嗪的含量。

实施例2

一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，采用液相色谱-质谱联用法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，长度为75mm，流动相为甲醇和水的体积比为20：80的混合溶液，流速为0.3ml/min；柱温为35℃，四级杆质谱检测器，大气压化学离子化为离子源，采用选择离子(sim)153m/z正离子模式检测，干燥气体流速为10l/min，雾化气体流速为4.0l/min，离子源电压为4.5kv，离子源温度为350℃。

样品配制同实施例1。

试验操作：分别取对照品溶液和供试品溶液各1μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例3

一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，采用液相色谱-质谱联用法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，长度为75mm，流动相为甲醇和水的体积比为25：75的混合溶液，流速为0.5ml/min；柱温为30℃，四级杆质谱检测器，大气压化学离子化为离子源，采用选择离子(sim)153m/z正离子模式检测，干燥气体流速为10l/min，雾化气体流速为4.0l/min，离子源电压为4.0kv，离子源温度为360℃。

样品配制同实施例1。

试验操作：分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例4

一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，采用液相色谱-质谱联用法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，长度为75mm，流动相为甲醇和水的体积比为35：65的混合溶液，流速为0.6ml/min；柱温为40℃，四级杆质谱检测器，大气压化学离子化为离子源，采用选择离子(sim)153m/z正离子模式检测，干燥气体流速为10l/min，雾化气体流速为4.0l/min，离子源电压为4.4kv，离子源温度为380℃。

样品配制同实施例1。

试验操作：分别取对照品溶液和供试品溶液各15μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

实施例5

一种盐酸川芎嗪基因毒性杂质含量的测定方法，采用液相色谱-质谱联用法，其色谱条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，长度为75mm，流动相为甲醇和水的体积比为40：60的混合溶液，流速为0.6ml/min；柱温为38℃，四级杆质谱检测器，大气压化学离子化为离子源，采用选择离子(sim)153m/z正离子模式检测，干燥气体流速为10l/min，雾化气体流速为4.0l/min，离子源电压为4.8kv，离子源温度为390℃。

样品配制同实施例1。

试验操作：分别取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。