含川芎嗪基查尔酮芳氧烷酸类化合物、制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及含川芎嗪基查尔酮芳氧烷酸类化合物、其制 备方法及治疗高血脂症、动脉粥样硬化的医药用途。
【背景技术】
[0002] 高脂血症是人体脂代谢异常导致的血中脂质和脂蛋白水平升高，包括总胆固 醇（TC)、甘油三酯（TG)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)水平过高和高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)水平过低，是非酒精性脂肪肝、动脉粥样硬化性心脏病和糖尿病等疾病发生的主要 危险因素[参见RossR.ThePathogenesisofatherosclerosis:aperspectiveforthe 1990s[J].Nature，1993, 362:801]。随着人民生活水平的不断提高，我国高脂血症的发病率 不断上升且呈现年轻化趋势[参见赵文华，张坚，由悦.中国18岁及以上人群血脂异常 流行特点研究[J].中华预防医学杂志，2005, 39 (5) : 306-310]。目前临床上治疗高脂血症 常用的药物主要有贝特类和他汀类药物等，这些药物虽然调血脂效果明显，但价格昂贵且 易引起肝损伤。中医学认为高脂血症属"痰浊"、"瘀血"范畴；"痰浊"是人体津液不归正化 的病理产物，"瘀血"是人体血运不畅或离经之血着而不去的病理表现。痰浊和瘀血作为病 理产物和致病因子，是高脂血症发病的关键环节，所以对高脂血症的治疗以化痰降浊、活血 化瘀为主要原则[参见翁晓清，汪亚群.自拟中药方治疗痰瘀互结型高血脂症80例疗效 观察[J].中医药临床杂志，2006, 18(2) :147-148]。基于中医学的思维，如果能设计出一类 既具有活血化瘀又具有降血脂作用的化合物将具有重要的临床意义。
[0003] 发明人前期研究了结构特征一端为碱性基团，一端为酸性基团的川芎嗪芳酸醚类 化合物对对二磷酸腺苷（ADP)诱导的血小板聚集具有较好的抑制活性，结构式如下：
[0004]
[0005] 该化合物的抑制活性是奥扎格雷的5. 7倍，有很好的临床应用价值[参见李家 明，赵永海，马逢时，等.川芎嗪芳酸衍生物的合成及抗血小板聚集活性[J].有机化 学，2008, 28 (9) :1578-1583]。
【发明内容】
[0006] 本发明公开了一类含川芎嗪基查尔酮芳氧烷酸类化合物，结构特征上包含了一端 为碱性基团，一端为酸性基团，同时具有芳氧烷酸结构，期望所设计的化合物既具有抗血小 板聚集活性又具有降血脂活性，从而为治疗高血脂症及动脉粥样硬化的治疗提供新的选 择。
[0007] 本发明的化合物结构式如下：
[0008]
[0009] 其中R代表Η或甲基A代表H、CH^C2H5。
[0010] 优选下列任一化合物：
[0011]
[0012] 本发明还包括化合物（I)药学上可接受的盐，其药学上可接受的盐是化合物（I) 的钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、精氨酸盐、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、马来酸盐、富马酸盐、枸橼酸 盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、酒石酸盐或醋酸盐。
[0013] 药效学实验证明，本发明的化合物可用于治疗或预防高血脂症及动脉粥样硬化疾 病。
[0014] 本发明所述的化合物可以添加药学上可接受的载体制成常见的药用制剂，如片 剂、胶囊、粉剂、糖浆、液剂、悬浮剂、针剂，可以加入香料、甜味剂、液体或固体填料或稀释剂 等常用药用辅料。
[0015] 本发明的化合物临床所用剂量为0.Olmg~lOOOmg/天，也可根据病情的轻重或剂 型的不同偏离此范围。
[0016] 化合物⑴可用下列方法制备：
[0017]
[0018] 以下通过实验数据说明本发明化合物的有益效果
[0019] 实验一体外抗血小板聚集实验
[0020] 将雄性新西兰家兔（体重1.8~2.2kg)用1 %盐酸普鲁卡因注射液局部麻醉，颈 动脉插管放血，和枸橼酸钠溶液（〇.38g枸橼酸钠与10mL生理盐水配制成3. 8%的枸橼酸钠 溶液）以9:1混合，以1000r/min离心lOmin，取富血小板血浆（PRP)，剩余部分以3000r/ min离心lOmin，取贫血小板血衆（PPP)。采用肝微粒体体外温孵方法：微粒体体外反应体 系一共lml，分别取NADP、G-PD、G-PDH、MgCl2以及肝微粒体适量，加入KC1-磷酸盐缓冲液， 使反应体系终体积为lml，反应体系中分别含0. 5mmol/LNADP、5.Ommol/LG-6-PD、l.OU/mL G-6-PDH、5. 0mm〇l/LMgCl2、l.Omg/ml肝微粒体。取需要进行孵育的筛选药物加入到微粒体 反应体系中，于37°C水浴中温孵振荡60min，放入-20°C冰箱内终止反应。先取300μ1PPP 加入测试杯中，然后放入测试孔，按"ΡΡΡ"键进行定标。然后取280μ1PRP加入测试杯中， 加入10μ1不同浓度的药液，在37°C预温槽中预热3min，放入测试孔后，按"开始"键时立 即加入诱导剂10μ1，以测定最大聚集率，并计算IC5。值。按下列公式计算血小板聚集抑制 率：血小板聚集抑制率（％) =[(空白对照组最大聚集率-给药组最大聚集率）/空白对 照组最大聚集率]X100%。本发明化合物对AA和ADP诱导的血小板聚集的抑制活性见表 1〇
[0021] 表1化合物对AA和ADP诱导的血小板聚集的抑制活性
[0022]
[0023]
[0024] 体外抗血小板聚集实验结果显示，本发明的化合物均表现出一定的抗血小板聚集 作用，其中，化合物YA3和YA5对AA和ADP诱导的血小板聚集的抑制作用较强。虽然化合 物YA3和YA5的药效作用弱于奥扎格雷和阿司匹林，但对同时具有降脂和活血化瘀作用的 药物是有益的。
[0025] 实验二本发明化合物对高脂血症C57/BL6小鼠血脂的影响
[0026] 清洁级雄性健康野生型C57/BL6小鼠84只，随机分成7组，每组12只，分别为空 白组（喂食普通饲料）、模型组（喂食高脂饲料，HFD)、阳性对照非诺贝特（FNB)45mg/kg 剂量组（喂食高脂饲料）、化合物YA345mg/kg、90mg/kg剂量组（喂食高脂饲料）、化合物 YA545mg/kg、90mg/kg剂量组（喂食高脂饲料）。各组灌胃给药3周，于末次给药后30min眼 球取血，3000r/min离心lOmin，分离血清，测定小鼠血清中总胆固醇（TC)，甘油三脂（TG)， 低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C)的含量，测定方法按照试剂盒 说明书进行。数据以平均值土标准差表示，结果用SPSS17.0软件进行统计分析，用t检 验评价实验结果。本发明化合物对高血脂症C57/BL6小鼠血脂水平的影响见表2。
[0027] 表2本发明化合物YA3和YA5对高血脂症C57/BL6小鼠血脂水平的影响
[0028](η= 12，[±或 **P〈0.Olvs空白组；ΛΡ〈0· 05,ΛΛP〈0.Olvs模型组）
[0029]
[0030] 体内降血脂活性结果显示，化合物YA3、YA5具有较明显的体内降血脂活性，可以 明显降低高脂血症C57/BL6小鼠血清总胆固醇和低密度脂蛋白水平，并能升高显高密度脂 蛋白水平。鉴于化合物YA3、YA5具有一定的抗抗血小板聚集作用，又具有明显的降血脂活 性，呈现出良好的药用前景。
【具体实施方式】
[0031] 实施例1
[0032] (E)-2-乙基-(4-(3-(3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）丙烯酰基）苯氧基）乙酸酯的 合成（YA1)的制备1. 12-羟甲基-3, 5, 6-三甲基吡嗪的合成
[0033]
[0034] 反应步骤
[0035] 在250mL三颈烧瓶中依次加入川芎嗪（15. 0g，0.lmol)，30%H202溶液 (24mL，0. 2mol)，冰醋酸15mL，94°C反应12h，TLC(石油醚-乙酸乙酯1:1)检测反应基本 完全后，冷却下，用50%NaOH溶液调节pH= 10,二氯甲烷萃取（3X30mL)，合并有机相， 经无水Na2S04干燥后，减压浓缩，得川芎嗪单氮氧化物白色晶体13. 2g，收率78. 8%，mp 82. 4-84. 1°C。
[0036] 在250mL三颈烧瓶中依次加入川芎嗪单氮氧化物（13.2g，86.8mm〇l)，乙酸酐 (31. 2mL，330. 4mmol)，130°C反应5h，TLC(石油醚-乙酸乙酯1:1)检测反应基本完全后，蒸 除过量乙酸酐，得（3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）乙酸甲酯中间体粗品。
[0037] 往上步反应得到（3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）乙酸甲酯中加入20%NaOH溶液 80mL，室温反应12h，TLC(石油醚-乙酸乙酯1:1)检测反应基本完全，过滤得滤液，用二 氯甲烷萃取（3X50mL)，合并有机相，经无水Na2S04干燥，浓缩，石油醚重结晶，得2-羟甲 基-3, 5, 6-三甲基吡嗪淡黄色针状结晶9. 7g，收率57. 8%，mp75. 3-77. 2°C。
[0038] 1. 23, 5, 6-三甲基吡嗪-2-甲醛的合成
[0039]
[0040] 反应步骤
[0041]在250mL三颈烧瓶中依次加入2-羟甲基-3, 5, 6-三甲基吡嗪（9. 5g，62. 5mmol)， Μη02 (16. 2g，187. 5mmol)，无水乙醇100mL，回流12h，TLC(石油醚-乙酸乙酯2:1)检 测反应基本完全，冷却，过滤得滤液，减压回收乙醇，得黄色固体，经硅胶柱色谱（石油 醚-乙酸乙酯4:1)纯化，得3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-甲醛淡黄色固体8. 8g，收率93. 9%， mp84. 7-86. 5°C。
[0042] 1.3(E)-1-(4-羟基苯基）-3-(3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）丙-2-烯-1-酮的合成
[0043]
[0044] 反应步骤
[0045] 在10〇11^三颈烧瓶中依次加入3,5,6-三甲基吡嗪-2-甲醛（2.(^，13.3臟〇1)， 4-羟基苯乙酮（1.5g，11.Ommol)，无水乙醇10mL，冰浴条件下缓慢滴加入20%Κ0Η溶液 8.OmL，冰浴下反应10h，TLC(石油醚-乙酸乙酯2:1)检测反应基本完全，将反应液倒入 100mL冰水中，用10%稀盐酸调节pH= 6~7,析出黄色沉淀。过滤，滤饼用无水乙醇重结 晶，干燥得黄色晶体1. 〇g，收率33. 8%，mp129. 7-131.5°C。
[0046] 1.4(E)-2-乙基（4-(3-(3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）丙烯酰基）苯氧基）乙酯的 合成（YA1)
[0047]
[0048] 反应步骤
[0049] 在100mL三颈烧瓶中依次加入（E)-l-(4-羟基苯基）-3-(3, 5, 6-三甲 基吡嗪-2-基）丙-2-烯-1-酮（1.0g，3.7mmol)，ClCH2C00Et(0.6g，4.9mmol)， K2C03(0.77g，5.6mmol)，KI20mg，DMF10mL，90°C反应 6h，TLC(石油醚-乙酸乙酯 2:1) 检测反应基本完全。冷却，过滤，滤液加水50mL，乙酸乙酯（3X50mL)萃取，合并有机 相，饱和NaCl溶液（2X25mL)洗涤，经无水Na2S04干燥后，减压浓缩得黄色油状物，经 硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯5:1)纯化得YA1淡黄色晶体0.9g，收率为68.2%，mp 119.1-120.3°C。4NMR(400MHz，CDCl3)S:8.21(d，J= 14·8Ηζ，1Η，=CH)，8.13(d，J= 8. 8Hz, 2Η,PhH), 7. 99 (d,J= 14. 8Hz, 1H, =CH), 7. 01 (d,J= 8. 8Hz, 2H,PhH), 4. 71 (s, 2 H, CH2), 4. 32 (q,J= 7. 2Hz, 2H,CH2), 2. 66 (s, 3H,CH3), 2. 57 (s, 3H,CH3), 2. 55 (s, 3H,CH3), I. 313 (t,J= 7. 2Hz, 3H,CH3);13CNMR(CDC13, 100MHz)δ: 188. 3, 168. 2, 161. 6, 152. 6, 149 .9, 149. 6, 143. 2, 137. 8, 131. 8, 131. 1, 126.