多次纯 化，直至无游离的巧光素出现在超滤管的底部，纯化好的DyLi曲t-800N服Ester-SAV,在分 光光度计下检测0D278nm和0D788nm的光密度值，然后计算每个巧光分子可能结合的抗链 霉亲和素（SAV)的标记个数；
[0019] 3)DyLi曲t-800畑SEster-SAV-Biotin-NT-proBNP抗体偶合物的制备；
[0020] DyLi曲t-800畑SEster-SAV-Biotin-NT-proBNP偶合物的制备方法；按照SAV; Biotin的比例 1:4 计算需要加入DyLi曲t-800畑SEster-SAV和Biotin-NT-proBNP 抗体的浓度，然后用磯酸盐缓冲液（PB巧补充反应体积，按照计算所需的量依次加入 1XPBS,Biotin-NT-proBNP和DyLi曲t-800畑SEster-SAV,充分混合后，在 0D500nm下检测 巧光偶合物的透过率（T% )，并在透过率达到要求时进行终止反应，形成DyLi曲t-800N服 Ester-SAV-Biotin-NT-proBNP。
[0021] 所述的快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白（ST2)和N-末端脑钢肤 (NT-proBN巧的免疫巧光试纸条的制备方法，包括如下步骤；
[0022] 1)制备检测线；检测膜（2)在免疫巧光试纸条中用于固定包被抗体，同时也是免 疫反应的发生处；检测线（7-1)是将抗ST2抗体使用1冲BS、甲醇等缓冲液稀释，划线于所 述检测膜（2)上；检测线（7-2)是将抗NT-proBNP抗体使用1冲BS、甲醇等缓冲液稀释，划 线于所述检测膜（2)上，然后将检测膜（2)充分干燥并烘烤数日后即得；检测线（7-1)、检 巧機（7-。位于同一位置或不同位置，若为不同位置，则检测线（7-1)、检测线（7-。均位于 控制线巧）同一侧，即液体首先接触的位置；
[0023] 2)制备控制线；所述控制线（8)是将抗链霉亲和素（SAV)抗体使用1冲BS、甲醇等 缓冲液稀释，划线于所述检测膜（2)上，然后将检测膜（2)充分干燥并烘烤数日后即得；
[0024] 3)制备偶合物垫；所述偶合物垫片巧）的原材料为玻璃纤维滤膜，将用于制备偶 合物垫片巧）的玻璃纤维滤膜放入预封闭缓冲液中浸泡后取出，充分干燥后，用包膜仪器 将Dye-649畑SEster标记的-ST2抗体偶合物和DyLi曲t-800畑SEster标记的-NT-proBNP 抗体偶合物涂布在偶合物垫片（5)上，充分干燥即得；
[002引 4)制备样本垫片；所述样本垫片（1)可对液态样品起到初步过滤作用，将样本垫 片用封闭液浸泡后，充分干燥即得；
[0026] 5)试纸条的组装；在试纸条支撑片（4)由下而上依次粘附检测膜（2)、吸水垫片 (3)和偶合物垫片巧），在偶合物垫片（5)上设有第一层玻璃纤维垫片化-1)、第二层玻璃纤 维垫片化-2)或者仅设第一层玻璃纤维垫片化-1)或者不设有任一垫片，最上一层为样品 垫片（1);将上述材料组装后，切成小条，即制得所述定量检测ST2和NT-proBNP的免疫巧 光试纸条。
[0027] 本发明的快速定量检测ST2的免疫巧光试纸条，包括试纸条支撑片（4)W及试纸 条支撑片（4)上顺次搭接粘贴的样品垫片（1)、检测膜（2)和吸水垫片（3)，所述样品垫片 (1)和检测膜（2)之间设有偶合物垫片巧），所述的偶合物垫片（5) -端上方设有第一层玻 璃纤维垫片化-1)，其一端下方设有第二层玻璃纤维垫片化-2)或者偶合物垫片（5) -端上 方仅设有第一层玻璃纤维垫片化-1)或者不设有任一垫片，所述的检测膜（2)上设有检测 线（7)，检测线（7)包被有抗ST2单克隆抗体或多克隆抗体，检测线（7)另一边设有控制线 巧），控制线（8)包被有抗链霉亲和素（SAV)抗体，所述偶合物垫片（5)上涂布有巧光标记 的ST2抗体偶合物。
[002引偶尔物垫片巧）中巧光标记的ST2抗体偶合物的制备包括如下步骤；
[0029] (l)Biotin-ST2 抗体的制备；
[0030] ST2抗体溶于磯酸盐缓冲液（PBS)中，活化的生物素炬iotin)溶解于二甲基亚讽 值MS0)中保证其活化度，然后把生物素炬iotin)加入溶于磯酸盐缓冲液（PBS)中的ST2 抗体溶液中，25度反应30分钟，反应完成后，将溶液转移至超滤管中，W4000巧m并多次 纯化，直至超滤管底部无游离的生物素炬iotin)，并计算每个ST2抗体可能结合的生物素 炬iotin)个数；
[0031] (2)巧光分子-SAV的制备：
[0032] 抗链霉亲和素（SAV)粉末溶于磯酸盐缓冲液（PBS)中活化，然后把溶于磯酸盐缓 冲液牌巧中的抗链霉亲和素（SAV)快速溶解巧光素粉末，并加入碳酸盐缓冲液化05M Boratebuffer)进行缓冲，室温反应1小时，反应完成后，将溶液超滤离屯、浓缩，并多次纯 化，直至无游离的巧光素出现在超滤管的底部，纯化好的DyLi曲t-800N服Ester-SAV，在分 光光度计下检测〇D278nm和0D788nm的光密度值，然后计算每个巧光分子可能结合的抗链 霉亲和素（SAV)的标记个数；
[003引 （3)DyLi曲t-800畑SEster标记的ST2抗体偶合物的制备；
[0034] 按照SAV;Biotin的比例1:4计算需要加入DyLi曲t-800畑SEster-SAV和 Biotin-ST2抗体的浓度，然后用磯酸盐缓冲液（PB巧补充反应体积，按照计算所需的量依 次加入1XPBS,Biotin-ST2和DyLi曲t-800畑SEster-SAV,充分混合后，在0D500nm下检测 巧光偶合物的透过率（T% )，并在透过率达到要求时进行终止反应，形成DyLi曲t-800N服 Ester-SAV-Biotin-ST2〇
[0035] 所述的快速定量检测ST2的免疫巧光试纸条的制备方法，包括如下步骤：
[0036] 1)制备检测线；检测膜（2)在免疫巧光试纸条中用于固定包被抗体，同时也是免 疫反应的发生处；检测线（7)是将抗ST2抗体使用1冲BS、甲醇等缓冲液稀释，划线于所述 检测膜（2)上；然后将检测膜（2)充分干燥并烘烤数日后即得；
[0037] 2)制备控制线；控制线（8)是将抗链霉亲和素（SAV)抗体使用1冲BS、甲醇等缓冲 液稀释，划线于所述检测膜（2)上，然后将检测膜（2)充分干燥并烘烤数日后即得；
[003引 3)制备偶合物垫；偶合物垫片巧）的原材料为玻璃纤维滤膜，将用于制备偶合 物垫片巧）的玻璃纤维滤膜放入预封闭缓冲液中浸泡后取出，充分干燥后，用包膜仪器将Dye-649NHSEster标记的-ST2抗体偶合物涂布在偶合物垫片（5)上，充分干燥即得；
[0039] 4)制备样本垫片：样本垫片（1)可对液态样品起到初步过滤作用，将样本垫片用 封闭液浸泡后，充分干燥即得；
[0040] 5)试纸条的组装；在试纸条支撑片（4)由下而上依次粘附检测膜（2)、吸水垫片 (3)和偶合物垫片巧），在偶合物垫片（5)上设有第一层玻璃纤维垫片化-1)、第二层玻璃纤 维垫片化-2)或者仅设第一层玻璃纤维垫片化-1)或者不设有任一垫片，最上一层为样品 垫片（1);将上述材料组装后，切成小条，获得快速定量检测ST2的免疫巧光试纸条。
[0041] 本发明的快速定量检测NT-proBNP的免疫巧光试纸条，包括试纸条支撑片（4)W 及试纸条支撑片（4)上顺次搭接粘贴的样品垫片（1)、检测膜（2)和吸水垫片（3)，所述样 品垫片（1)和检测膜（2)之间设有偶合物垫片巧），所述的偶合物垫片（5) -端上方设有 第一层玻璃纤维垫片化-1)，其一端下方设有第二层玻璃纤维垫片（6-2)或者偶合物垫片 (5) -端上方仅设有第一层玻璃纤维垫片（6-1)或者不设有任一垫片，所述检测膜（2)上设 有检测线（7)，所述检测线（7)包被有抗NT-proBNP单克隆抗体或多克隆抗体，所述检测线 (7)另一边设有控制线巧），控制线（8)包被有抗链霉亲和素（SAV)抗体，所述偶合物垫片 (5)上涂布有巧光标记的NT-proBNP抗体偶合物。
[0042] 所述偶尔物垫片巧）中巧光标记的NT-proBNP抗体偶合物的制备包括如下步骤：
[0043] (1)Biotin-NT-proBNP抗体的制备；
[0044] NT-proBNP抗体溶于磯酸盐缓冲液（PBS)中，活化的生物素炬iotin)溶解于二 甲基亚讽值MS0)中保证其活化度，然后把生物素炬iotin)加入溶于磯酸盐缓冲液（PBS) 中的NT-proBNP抗体溶液中，25度反应30分钟，反应完成后，将溶液转移至超滤管中，W 4000巧m并多次纯化，直至超滤管底部无游离的生物素炬iotin)，并计算每个NT-proBNP抗 体可能结合的生物素炬iotin)个数；
[0045] 似巧光分子-SAV的制备；
[0046] 抗链霉亲和素（SAV)粉末溶于磯酸盐缓冲液（PBS)中活化，然后把溶于磯酸盐缓 冲液牌巧中的抗链霉亲和素（SAV)快速溶解巧光素粉末，并加入碳酸盐缓冲液化05M Boratebuffer)进行缓冲，室温反应1小时，反应完成后，将溶液超滤离屯、浓缩，并多次纯 化，直至无游离的巧光素出现在超滤管的底部，纯化好的DyLi曲t-800N服Ester-SAV，在分 光光度计下检测〇D278nm和0D788nm的光密度值，然后计算每个巧光分子可能结合的抗链 霉亲和素（SAV)的标记个数；
[0047] (3)DyLi曲t-800畑SEster标记的NT-proBNP抗体偶合物的制备；
[0048] 按