滴加7 μ L含有浓度为5 X 10 6mol/L的所述特征单链DNA的第二磷酸缓冲溶液，并在4°C的冰箱中干燥，干燥后即得所述特征单链DNA修饰的金电极，所述特征单链DNA的序列为5’ -TTTTT TTTTTGGGGG-(CH2) 6-SH-3’。
[0067]测定方法:向第一磷酸缓冲溶液中加入浓度为2 μ mol/L的丙烯酰胺标准溶液，分别得到含有丙烯酰胺的终浓度为Onmol/L的溶液a、含有丙烯酰胺的终浓度为3nmol/L的溶液b、含有丙烯酰胺的终浓度为5nmol/L的溶液C、含有丙烯酰胺的终浓度为lOnmol/L的溶液山含有丙烯酰胺的终浓度为15nmol/L的溶液e，含有丙烯酰胺的终浓度为20nmol/L的溶液f，所述溶液a、溶液b、溶液C、溶液d、溶液e和溶液f为六种标准溶液；其中所述第一磷酸缓冲溶液的pH为8.0，其浓度为0.2mol/Lo
[0068]将所述三电极体系分别置入所述六种标准液中，在室温下搅拌2min，静止2min ;扫描示差脉冲图谱，设置扫描初始电位为0V，终止电位为1.2V，电位增量为0.004V，振幅为0.05V，脉冲宽度0.05s，脉冲周期0.5s，等待时间为2s ;分别测量并记录所述六种标准溶液的电流强度的峰值，建立所述溶液b、溶液C、溶液d、溶液e和溶液f共5种标准溶液的示差脉冲伏安曲线。
[0069]如图1所示，其中曲线b、c、d、e和f分别为溶液b、c、d、e和f五种标准溶液差分脉冲伏安曲线图。
[0070]以所述五种标准液的氧化峰的电流值与空白缓冲溶液氧化峰之间的电流值的差值作为纵坐标Y，以丙烯酰胺的浓度作为横坐标X，建立丙烯酰胺标准液浓度值与电流差值的线性关系图，如图2;
[0071]从图2可得知基于特征单链DNA电化学传感的电流强度的差值与丙烯酰胺溶液浓度有良好的线性关系，且Y = 0.066+0.38X，式中Y为电流差值1。_1，单位为μ A，X为丙烯酰胺浓度，单位为nmol/L，相关系数R2为0.999。修饰电极对丙烯酰胺的检测限为1.45nmol/L0
[0072]样品溶液的测定:将所述三电极体系传感器浸没在1mL的所述第一磷酸缓冲溶液中，在所述第一磷酸缓冲液中加入ImL含有未知浓度的丙烯酰胺溶液，搅拌3min，静止3min，扫描示差脉冲图谱，设置扫描初始电位为0V，终止电位为1.2V，电位增量为0.004V，振幅为0.05V，脉冲宽度0.05s，脉冲周期0.5s，等待时间为2s，测量并记录相应的氧化峰电流值，通过所述丙烯酰胺示差脉冲伏安曲线，计算出丙烯酰胺溶液的浓度。
[0073]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
【主权项】
1.一种检测溶液中丙烯酰胺浓度的方法，包括， 使用三电极体系通过示差脉冲伏安法对待检测液中的丙烯酰胺进行检测，根据丙烯酰胺的线性方程得到待检测液中丙烯酰胺的浓度，其中，三电极体系中的工作电极为特征单链DNA修饰的金电极，所述特征单链DNA的序列为5’ -TTTTT TTTTT GGGGG-(CH2)6_SH_3’。2.如权利要求1所述的检测溶液中丙烯酰胺浓度的方法，其中，包括以下步骤: 51:制备所述工作电极，丙烯酰胺的浓度为0-20nmol/L的多份标准溶液； 52:采用所述工作电极，利用示差脉冲伏安法对步骤一种配置的每份标准溶液分别进行检测，得到每份标准溶液的示差脉冲伏安曲线，在此过程中分别记录每份丙烯酰胺标准溶液的示差脉冲伏安曲线中电流强度的峰值； 53:以S2中得到的每份标准溶液的示差脉冲伏安曲线对应的电流强度的峰值与丙烯酰胺浓度为Onmol/L时的标准溶液的电流强度的峰值的差值作为纵坐标，以每份标准溶液的浓度为横坐标绘制标准标准曲线并计算得到两者间的线性方程； 54:采用所述工作电极，利用示差脉冲伏安法对待检测液进行检测，得到待检测液的示差脉冲伏安曲线，将待检测液的示差脉冲伏安曲线对应的电流强度的峰值与丙烯酰胺浓度为Onmol/L的标准溶液的电流强度的峰值的差值代入到所述线性方程中，计算得到待检测液中丙烯酰胺的浓度。3.如权利要求2所述的检测溶液中丙烯酰胺浓度的方法，其中，所述SI中丙烯酰胺的标准溶液的制备方法为:向第一磷酸缓冲溶液中加入浓度为2 ymol/L的丙烯酰胺标准溶液，分别得到含有丙烯酰胺的终浓度为Onmol/L的溶液a、含有丙烯酰胺的终浓度为3nmol/L的溶液b、含有丙烯酰胺的终浓度为5nmol/L的溶液C、含有丙烯酰胺的终浓度为10nmol/L的溶液d，含有丙烯酰胺的终浓度为15nmol/L的溶液e，含有丙烯酰胺的终浓度为20nmol/L的溶液f，所述溶液a、溶液b、溶液C、溶液d、溶液e和溶液f为六种标准溶液；其中所述第一磷酸缓冲溶液的PH为8.0，其浓度为0.2mol/L04.如权利要求3所述的检测溶液中丙烯酰胺浓度的方法，其中，所述SI中制备所述工作电极的方法为: S1.1:金电极的预处理，将金电极依次放置在含有粒度分别为I μπι、0.3μπι、0.05 μm的抛光粉的抛光布上抛光至镜面，随后将所述金电极依次放置在丙酮、浓度为0.5mol/L的硫酸溶液和超纯水中超声I分钟，并在每次超声结束后使用超纯水冲洗0.5分钟，备用； S1.2:配制含有所述特征单链的DNA的第二磷酸缓冲溶液，向0.2mol/L所述第一磷酸缓冲溶液中加入所述特征单链的DNA，使所述特征单链的DNA在所述第一磷酸缓冲溶液中浓度为5 X 10 6mol/L,并且调节pH至7，即得含有所述特征单链的DNA的第二磷酸缓冲溶液； 51.3:在预处理后的金电极上滴加7 μ L的含有所述特征单链DNA的第二磷酸缓冲溶液，在4°C的冷柜中干燥，干燥后，得到特征单链DNA修饰的金电极。5.如权利要求4所述的检测溶液中丙烯酰胺浓度的方法，其中，所述步骤S2具体包括以下步骤: 52.1:将所述三电极体系分别置入所述六种标准液中，在室温下搅拌2min，静止2min ; S2.2:扫描示差脉冲图谱，设置扫描初始电位为0V，终止电位为1.2V，电位增量为0.004V，振幅为0.05V，脉冲宽度0.05s，脉冲周期0.5s，等待时间为2s ； S2.3:分别测量并记录所述六种标准溶液的电流强度的峰值，建立所述溶液b、溶液C、溶液d、溶液e和溶液f共5种标准溶液的示差脉冲伏安曲线。6.如权利要求5所述的检测溶液中丙烯酰胺浓度的方法，其中，所述三电极体系的参比电极为Ag/AgCl电极，辅助电极为铂电极。
【专利摘要】本发明公开了一种使用三电极体系通过示差脉冲伏安法对待检测液中的丙烯酰胺进行检测，根据丙烯酰胺的线性方程得到待检测液中丙烯酰胺的浓度，其中，三电极体系中的工作电极为特征单链DNA修饰的金电极，所述特征单链DNA的序列为5ˊ-TTTTTTTTTTGGGGG-(CH2)6-SH-3’。本发明利用示差脉冲伏安法，进行丙烯酰胺的高灵敏检测，对丙烯酰胺的检测限可达到，操作简单、检测快速、灵敏度高且选择性好，具有相当广泛的应用前景。
【IPC分类】G01N27/48, G01N27/30
【公开号】CN105021687
【申请号】CN201510389871
【发明人】肖琦, 黄珊, 卢双燕, 盛家荣, 黄初升
【申请人】广西师范学院
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月6日