酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药质量控制技术领域，特别是涉及一种酸枣仁对照提取物及其制备 方法和应用。
【背景技术】
[0002] 酸枣仁，别名酸枣核、山枣仁。是鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子。于秋末冬初采 收成熟果实，除去果肉及核壳，收集种子，晒干而成。其生于向阳山坡、路旁，主要产于河南、 河北、陕西、辽宁、山西、山东、云南等地。秋季果实成熟时采收，去果肉及硬核，取种子，生用 或微炒用。
[0003] 酸枣仁作为一种中药材，收载于中国药典中。中国药典分别对酸枣仁药材的皂苷 类和黄酮类成分进行薄层色谱鉴别：其中，皂苷类成分的薄层鉴别方法为：取本品粉末lg， 加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解，作为供试品溶液。 另取酸枣仁皂苷A、B对照品，分别加甲醇制成每lml各含lmg的混合溶液，作为对照品溶 液。照薄层色谱法（附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 y 1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 %香草醛硫酸溶液，立即检视。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。黄酮类成分的薄层鉴别 方法为：取本品粉末lg，加石油醚（60~90°C ) 30ml，加热回流2小时，滤过，弃去石油醚液， 药渣挥干，加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试 品溶液。另取酸枣仁对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取斯皮诺素对照品，加甲醇制 成每lml含0. 5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B)试验，吸取上述三 种溶液各2 y 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以1 %香草醛硫酸溶液，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点。
[0004] 但是，在该鉴别方法中，采用酸枣仁皂苷A、B对照品及斯皮诺素对照品、酸枣仁对 照药材为对照，分别鉴别酸枣仁中皂苷类和黄酮类成分，这样的方法既提高了检测成本，操 作又较为繁琐。
[0005] 对于酸枣仁药材中有效成分的质量控制，中国药典采用高效液相色谱法分别对皂 苷类和黄酮类成分进行了含量测定。但是，在该含量测定方法中，仍沿用常规的中药质量控 制模式，即以酸枣仁皂苷A、B或斯皮诺素对照品等作为对照，对酸枣仁进行质量评价分析， 这种模式评价指标相对单一，过分依赖中药化学对照品，不环保，检测成本高。
【发明内容】
[0006] 基于此，有必要针对上述问题，制备一种酸枣仁对照提取物，并将其作为对照物应 用于酸枣仁及含酸枣仁的中药制剂的质量控制中，具有反馈成分信息全面，且操作简便、检 测成本低的优点。
[0007] -种酸枣仁对照提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0008] 粉碎：取酸枣仁药材，粉碎，得酸枣仁粗粉；
[0009] 脱脂：取上述酸枣仁粗粉，置于超临界C02萃取装置的萃取釜中，以超临界C02萃取 去除酸枣仁粗粉中的脂类成分，得药渣；
[0010] 提取：取上述药渣，按照每克酸枣仁药材6ml-10ml的量加入体积百分浓度为 40 % -80 %乙醇水溶液，加热回流1-4小时，过滤，得滤液；
[0011] 大孔树脂纯化：将上述滤液浓缩后上样加至大孔吸附树脂柱上，以7-11个柱体积 的体积百分浓度为0-10%的乙醇水溶液洗脱，弃去，再以3-5个柱体积的体积百分浓度为 50% -70%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得酸枣仁对照提取物粗品；
[0012] 硅胶纯化：取上述酸枣仁对照提取物粗品，以体积百分浓度为50% -70%的乙醇 水溶液溶解，加入适量硅胶拌样，蒸干溶剂后上样至硅胶柱，先以20-30个柱体积的乙酸乙 酯洗脱，弃去，再以40-60个柱体积的体积比为70:30-50:50的乙酸乙酯-甲醇洗脱，收集 洗脱液，回收溶剂，得酸枣仁对照提取物。
[0013] 上述酸枣仁对照提取物的制备方法，首先将酸枣仁以超临界C02萃取，去除其中的 脂类成分，然后以50 % -70 %乙醇水溶液进行提取，再依次以大孔树脂和硅胶进行纯化，去 除冗杂成分，最后得到具有特定成分的酸枣仁对照提取物。该提取物中不仅含有酸枣仁皂 苷A和酸枣仁皂苷B等皂苷类成分，还含有斯皮诺素和6"' -阿魏酰斯皮诺素等黄酮类成 分。因此，将该制备方法得到的酸枣仁对照提取物作为对照用于酸枣仁及含酸枣仁药味中 药制剂的质量控制中，具有反馈成分信息全面的优点，并且，将该酸枣仁对照提取物作为对 照使用，无需进行繁琐的前处理步骤，可以直接溶解后检测，具有操作简便、检测成本低的 优点。
[0014] 在其中一个实施例中，所述脱脂步骤中，采用以下条件进行超临界C02萃取：萃取 釜温度为40-60°C，压力为25-35Mpa，第一分离釜温度为40-50°C，压力为5. 5-6. 5Mpa，第二 分离釜温度为30-40°C，压力为4-5Mpa，C(V流量为25-35L/小时，萃取2-4小时。采用上述 条件，能够较好的脱去酸枣仁中的脂类杂质。并且，采用超临界〇) 2萃取的方式进行脱脂， 与常规石油醚脱脂相比，安全性好，利于大生产中的应用，不需要在防爆车间中操作，极大 的提高了其大生产的可操作性。
[0015] 在其中一个实施例中，所述大孔树脂纯化的具体步骤为：将上述滤液浓缩后上样 加至大孔吸附树脂柱上，以4-6个柱体积的水洗脱，弃去，再以3-5个柱体积的体积百分浓 度为10 %的乙醇水溶液洗脱，弃去，再以3-5个柱体积的体积百分浓度为50 % -70 %的乙醇 水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得酸枣仁对照提取物粗品。采用上述条件，具有较好的 大孔树脂纯化效果。
[0016] 在其中一个实施例中，所述大孔树脂纯化的具体步骤为：将上述滤液浓缩后上样 加至D101型大孔吸附树脂柱上，以5个柱体积的水洗脱，弃去，再以4个柱体积的体积百分 浓度为10 %的乙醇水溶液洗脱，弃去，再以4个柱体积的体积百分浓度为60 %的乙醇水溶 液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，60°C减压干燥12小时，研成细粉，得酸枣仁对照提取 物粗品。采用上述条件，具有最佳的大孔树脂纯化效果。
[0017] 在其中一个实施例中，所述硅胶纯化步骤中，所述硅胶柱中填充的为粒径为300 目的正相硅胶，洗脱过程具体为：先以25个柱体积的乙酸乙酯洗脱，弃去，再以17个柱 体积的体积比为70:30的乙酸乙酯-甲醇洗脱，收集洗脱液，最后以33个柱体积的体 积比为50:50的乙酸乙酯-甲醇洗脱，收集洗脱液，合并两次收集得到的洗脱液，回收 溶剂，得酸率仁对照提取物。所述硅胶柱可选用商品硅胶柱Grace Reveleris silica cartridges (column size 12g)。采用上述条件，具有最佳的硅胶纯化效果。
[0018] 在其中一个实施例中，所述硅胶纯化步骤中，将加入适量硅胶拌样并蒸干溶剂后 的样品均匀填充至胶管中，将该胶管与低压制备液相相连，以该低压制备液相进行洗脱。以 低压制备液相进行纯化，洗脱，具有操作方便，洗脱效果好的优点。
[0019] 在其中一个实施例中，所述提取的具体步骤为：按照每克酸枣仁药材8ml的量加 入体积百分浓度为60%乙醇水溶液，加热回流2次，每次1小时，过滤，合并滤液。采用分次 回流提取的方法，具有更好的提取效率。
[0020] 本发明还公开了一种酸枣仁对照提取物，通过上述的酸枣仁对照提取物的制备方 法制备得到。
[0021] 上述酸枣仁对照提取物，其中不仅含有酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B等皂苷类成 分，还含有斯皮诺素和6"' -阿魏酰斯皮诺素等黄酮类成分。因此，将该制备方法得到的酸 枣仁对照提取物作为对照用于酸枣仁及含酸枣仁药味中药制剂的质量控制中，具有反馈成 分信息全面的优点，并且，将该酸枣仁对照提取物作为对照使用，无需进行繁琐的前处理步 骤，可以直接溶解后检测，还具有操作简便、检测成本低的优点。
[0022] 本发明还公开了一种酸枣仁对照提取物的应用，将上述的酸枣仁对照提取物用于 酸枣仁及含酸枣仁的中药制剂的质量控制中。
[0023] 将上述的酸枣仁对照提取物用于酸枣仁及含酸枣仁药味中药制剂的质量控制中， 具有反馈成分信息全面的优点，并且，将该酸枣仁对照提取物作为对照使用，无需进行繁琐 的前处理步骤，可以直接溶解后检测，还具有操作简便、检测成本低的优点。
[0024] 在其中一个实施例中，所述酸枣仁及含酸枣仁的中药制剂的质量控制方法为：将 所述酸枣仁对照提取物、待测样品以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测，对比判 别；
[0025] 所述薄层色谱法的检测条件为：
[0026] 薄层板：硅胶薄层板；
[0027] 展开剂：水饱和正丁醇；
[0028] 显色剂及检视：以香草醛硫酸溶液为显色剂检视，和/或置于日光灯下检视，和/ 或置于365nm的紫外灯下检视；
[0029] 所述高效液相色谱法包括黄酮类检测和皂苷类检测；
[0030] 黄酮类检测条件为：
[0031] 固定相：C18色谱柱；
[0032] 柱温：20-30。(：；
[0033] 流动相：A相为乙腈，B相为水，按照以下梯度洗脱程序进行：
[0034]
[0035]流速：1.0ml/min;
[0036] 检测器：二极管阵列检测器；
[0037] 皂苷类检测条件为：
[0038] 固定相：C1S色谱柱；
[0039] 柱温：30-40。(：；
[0040] 流动相：A相为乙腈，B相为水，按照以下梯度洗脱程序进行：
[0041 ]
[0042]流速：1.0ml/min ;
[0043] 检测器：蒸发光散射检测器。
[0044] 采用以上方法能够很好地在薄层色谱及液相色谱中分离酸枣仁中的多种成分，较 好的分离度将有利于后续的分析判别。
[0045] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0046] 本发明的一种酸枣仁对照提取物的制备方法，采用特定的方法对酸枣仁药材进行 脱脂，提取和纯化，最终得到具有特定成分的酸枣仁对照提取物，该提取物中不仅含有酸枣 仁皂苷A和酸枣仁皂苷B等皂苷类成分，还含有斯皮诺素和6-阿魏酰斯皮诺素等黄酮类 成分。因此，将该制备方法得到的酸枣仁对照提取物作为对照用于酸枣仁及含酸枣仁药味 中药制剂的质量控制中，具有反馈成分信息全面的优点，并且，将该酸枣仁提取物作为对照 使用，无需进行繁琐的前处理步骤，可以直接溶解后检测，具有操作简便、检测成本低的优 点。
[0047] 本发明的一种酸枣仁对照提取物的应