用，将上述的酸枣仁对照提取物用于酸枣仁 及含酸枣仁药味中药制剂的质量控制中，除具有上述优点外，还对分析方法进行了优化，采 用该分析方法，能够很好地在薄层色谱及液相色谱中分离酸枣仁中的多种成分，较好的分 离度将有利于后续的分析判别。
[0048] 并且，从酸枣仁对照提取物的应用中看出，酸枣仁对照提取物可以应用于枣仁安 神胶囊、枣仁安神液和酸枣仁配方颗粒的定性定量分析，结果准确可靠，其整体评价效果与 对照品、对照药材相当，甚至优于单用对照品作为对照的评价方法。另外，酸枣仁对照提取 物的使用方法与对照品类似，称重后直接溶解即可，尤其在多成分含量测定时，对照提取物 溶液的配制比对照品溶液的配制更加简便。因此，对照提取物评价模式具有可行性和一定 的优势，值得推广应用。
【附图说明】
[0049] 图1为实施例1中酸枣仁对照提取物制备方法工艺流程图；
[0050] 图2为实施例1中酸枣仁对照提取物的黄酮类化合物的HPLC图谱；
[0051] 图3为实施例1中酸枣仁对照提取物的皂苷类化合物的HPLC图谱；
[0052] 图4为实施例1中日光下检视薄层色谱图；
[0053] 图5为实施例1中UV365nm下检视薄层色谱图；
[0054] 图6为实施例2中枣仁安神胶囊和枣仁安神液日光下检视的薄层色谱图；
[0055] 图7为实施例2中枣仁安神胶囊和枣仁安神液UV365nm下检视的薄层色谱图；
[0056] 图8为实施例3中酸枣仁配方颗粒日光下检视的薄层色谱图；
[0057] 图9为实施例3中酸枣仁配方颗粒UV365nm下检视的薄层色谱图；
[0058] 图10-图11为实施例3中酸枣仁配方颗粒和酸枣仁对照提取物的HPLC图谱；
[0059] 图12为实施例3中酸枣仁对照提取物色谱图与酸枣仁配方颗粒色谱图20~105 分钟区间的相似度示意图；
[0060] 图13为对比例中不同酸枣仁对照提取物日光下检视的薄层色谱图；
[0061] 图14为对比例中不同酸枣仁对照提取物UV365nm下检视的薄层色谱图。
【具体实施方式】
[0062] 为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中 给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所 描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻 全面。
[0063] 除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的 技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具 体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语"和/或"包括一个或多个 相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0064] 以下实施例中使用到的仪器和试剂如下：
[0065] -、仪器：
[0066] 超临界0)2萃取装置（江苏南通华安超临界萃取有限公司，型号：HA221-50-06)
[0067]二、试剂：
[0068] 酸枣仁对照药材（中检院：121517-201103);
[0069] 斯皮诺素对照品（中检院：111869-201102);
[0070] 6"'-阿魏酰斯皮诺素对照品（上海同田生物技术股份有限公司：13111922);
[0071] 酸枣仁皂苷A对照品（中检院：110734-200611);
[0072] 酸枣仁皂苷B对照品（中检院：110814-200607);
[0073] 枣仁安神胶囊（市售，批号：130202);
[0074] 枣仁安神液（市售，批号：3260034、3260036);
[0075]酸枣仁配方颗粒（市售，批号：503396T，404236L，402017L)。
[0076] 实施例1
[0077] -种酸枣仁对照提取物，通过以下方法制备得到，其工艺流程如图1所示，具体如 下：
[0078] 1、粉碎。
[0079] 取酸枣仁药材，粉碎，得酸枣仁粗粉。
[0080] 2、脱脂。
[0081] 取上述酸枣仁粗粉lkg，置于超临界C02萃取装置的萃取釜中，按以下条件进行萃 取：萃取釜温度为50°C，压力为30Mpa，第一分离釜温度为45°C，压力为6. OMpa，第二分离釜 温度为35°C，压力为4. 5Mpa，C(V流量为30L/小时，萃取3小时。
[0082] 萃取去除酸枣仁粗粉中的脂类成分后，得到药渣。
[0083]3、提取。
[0084] 取上述药渣，按照每克酸枣仁药材8ml的量加入体积百分浓度为60%乙醇水溶 液，加热回流2次，每次1小时，趁热过滤，得滤液，滤液呈橙红色。
[0085] 4、大孔树脂纯化。
[0086] (1)浓缩：滤液回收乙醇至约2000ml(浓缩过程中会产生沉淀物，保留）。
[0087] (2)吸附：取以上浓缩液上清液250ml (沉淀物用适量的水溶解后，同法上样）上 D101型大孔吸附树脂柱（柱内径4cm，高20cm)。
[0088] (3)洗脱：先以1200ml (4. 78个柱体积）的水洗脱，弃去，再以1000ml (3. 98个柱 体积）的体积百分浓度为10 %的乙醇水溶液洗脱，弃去，再以1000ml (3. 98个柱体积）的体 积百分浓度为60%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液。
[0089](4)浓缩干燥：将上述洗脱液回收溶剂至干，60°C减压干燥12小时，研成细粉，得 酸枣仁对照提取物粗品。
[0090]5、硅胶纯化。
[0091] (1)上样：取上述酸枣仁粗品细粉2. 0g，加适量60 %乙醇溶解，加硅胶（60~100 目）l〇g拌样，水浴上蒸干溶剂，均匀填充至空白胶管中，置低压制备液相上，连接预制硅胶 柱（约 300 目，12g，内径2.5cm)。
[0092] (2)设定洗脱方法为：流速为30ml/min;先采用乙酸乙酯洗脱15min (约25个柱体 积），然后采用乙酸乙酯：甲醇（70 : 30)洗脱lOmin(约17个柱体积），最后采用乙酸乙 酯：甲醇（50 : 50)洗脱20min (约33个柱体积），收集并合并乙酸乙酯：甲醇（70 : 30) 洗脱液和乙酸乙酯：甲醇（50 : 50)洗脱液。
[0093] (3)浓缩干燥：回收洗脱液溶剂至干，60°C减压干燥2小时，即得酸枣仁对照提取 物。
[0094] 按照上述方法，制备了 10个批次的酸枣仁对照提取物，以高效液相色谱法进行检 测。
[0095] 一、供试品制备。
[0096] 1、酸枣仁对照提取物溶液的制备。
[0097] 取实施例1中1-10批次的酸枣仁对照提取物10mg，以10ml甲醇溶解，即得。
[0098] 2、对照品洛液的制备。
[0099] 取斯皮诺素对照品和6"' -阿魏酰斯皮诺素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 lml含斯皮诺素0. 2mg、6〃' -阿魏酰斯皮诺素0. lmg的混合溶液，即得。
[0100] 取酸枣仁皂苷A对照品和酸枣仁皂苷B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml 含酸枣仁皂苷A 50 y g、酸枣仁皂苷B 30 y g的混合溶液，即得。
[0101] 二、检测。
[0102] 1、黄酮类化合物的测定。
[0103] 测定条件如下：
[0104] 固定相：YMC Hydrosphere_C18色谱柱（250 X 4. 6mm，5 y m);
[0105] 柱温：2(TC ;
[0106] 流动相：A相为乙腈，B相为水，按照以下梯度洗脱程序进行：
[0107] 表1.梯度洗脱程序
[0108]
[0109] 流速：1.0ml/min ;
[0110] 检测器：二极管阵列检测器；
[0111] 检测波长：335nm。
[0112] 2、皂苷类化合物的测定。
[0113] 测定条件如下：
[0114] 固定相：Waters X-bridge C18色谱柱（250 X 4. 6mm，5 y m);
[0115] 柱温：35°C;
[0116] 流动相：A相为乙腈，B相为水，按照以下梯度洗脱程序进行：
[0117] 表2.梯度洗脱程序
[0118]
[0119]流速：1.Oml/min;
[0120] 检测器：蒸发光散射检测器。
[0121] 三、结果。
[0122] 得到如图2-3所示的酸枣仁对照提取物HPLC图谱，其中，图2为黄酮类化合物的 HPLC图谱，标号为A的色谱峰为斯皮诺素（t R= 31. 351min);标号为B的色谱峰为6"'-阿 魏酰斯皮诺素（tR= 67. 348min);图3为皂苷类化合物的HPLC图谱，标号为C的色谱峰为 酸率仁阜苷A (tR= 18. 437min);标号为D的色谱峰为酸率仁阜苷B (t R= 22. 161min)。
[0123] 并以斯皮诺素、6"' -阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品计算 这几种成分的含量（以干燥品计算，含量以wt%计），结果如下表所示。
[0124] 表3.不同批次中各化学成分的含量及总量（％ )
[0125]
[0126] 从上述结果中可以看出，采用本实施例的方法制备得到的酸枣仁对照提取物，具 有较高含量的斯皮诺素、6"' -阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B，且不同批次 之间的酸枣仁对照提取物中各成分含量相对稳定。
[0127] 再将上述10个批次的酸枣仁对照提取物，以薄层色谱法进行检测。
[0128] 一、供试品制备。
[0129] 1、酸枣仁对照提取物溶液的制备：取实施例1中1-10批次的酸枣仁对照提取物 10mg，以lml甲醇溶解，即得。
[0130] 2、对照品溶液的制备：再取斯皮诺素对照品、6"' -阿魏酰斯皮诺素对照品、酸枣 仁皂苷A对照品和酸枣仁皂苷B对照品，分别加甲醇制成每lml各含lmg的溶液，作为对照 品溶液。
[0131] 3、酸枣仁对照药材溶液的制备：取酸枣仁对照药材lg，加石油醚（60~ 90 °C ) 30ml，加热回流2小时，滤过，滤渣挥干，加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液。
[0132]4、酸枣仁药材溶液的制备同酸枣仁对照药材溶液。
[0133]二、检测。
[0134] 测定条件如下：