各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0217](2)、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的测定。
[0218] 按照实施例1中皂苷类化合物的测定方法，分别精密吸取对照品溶液5 yl和 25 y 1、对照提取物溶液5 y 1和25 y 1以及供试品溶液20 y 1，注入液相色谱仪，测定，用外 标两点法对数方程计算，即得。
[0219] 3、结果。
[0220] (1)、斯皮诺素和6"' -阿魏酰斯皮诺素的含量。
[0221] 酸枣仁配方颗粒中各成分的含量如下表所示。
[0222] 表7酸枣仁配方颗粒中各成分的含量结果比较（n = 2)
[0223]
[0225] 由上表可见，分别采用对照品法和对照提取物法计算酸枣仁配方颗粒中斯皮诺素 和6"' -阿魏酰斯皮诺素的含量，两种方法的测定结果差异小（相对平均偏差在3. 0%以 下），表明酸枣仁对照提取物可以应用于酸枣仁配方颗粒中斯皮诺素和6"'-阿魏酰斯皮诺 素的含量测定，结果可靠。
[0226] (2)、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量。
[0227] 酸枣仁配方颗粒中各成分的含量如下表所示。
[0228] 表8酸枣仁配方颗粒中各成分的含量结果比较（n = 2)
[0229]
[0230] 由上表可见，分别采用对照品法和对照提取物法计算酸枣仁配方颗粒中酸枣仁皂 苷A和酸枣仁皂苷B的含量，两种方法的测定结果差异小（相对平均偏差在3. 0%以下）， 表明酸枣仁对照提取物可以应用于酸枣仁配方颗粒中酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量 测定，结果可靠。
[0231] 对比例
[0232] 本对比例的酸枣仁对照提取物，采用以下不同的制备方法制备得到：
[0233] 酸枣仁对照提取物A，其制备方法与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于 该酸枣仁提取物A的制备过程中没有经过脱脂步骤，直接提取后以大孔树脂和硅胶纯化。
[0234] 酸枣仁对照提取物B，其制备方法与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于 该酸枣仁对照提取物B的制备过程中没有经过大孔树脂和硅胶纯化。
[0235] 酸枣仁对照提取物C，其制备方法与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于 该酸枣仁对照提取物C的制备过程中没有脱脂，也没有经过大孔树脂和硅胶纯化。
[0236] 一、对比性状特性
[0237] 将本对比例制备得到的酸枣仁对照提取物与实施例1中制备得到的酸枣仁对照 提取物进行性状特性比较，结果如下表所示。
[0238] 表9性状对比
[0239]
[0240] 从上表中可以看出，酸枣仁对照提取物B和C在甲醇中的溶解性比较差，有不溶 物；酸枣仁对照提取物B和C极具引湿性，不易保存。而实施例1得到的酸枣仁对照提取物 在甲醇中全部溶解，引湿性也得到改善，易保存。
[0241] 二、对比薄层色谱。
[0242] 将本对比例制备得到的酸枣仁对照提取物与实施例1中制备得到的酸枣仁对照 提取物以薄层色谱法进行检测，检测方法同上，检测结果如图12-13所示。
[0243] 其中：图13为日光下检视薄层色谱图，图14为UV365nm下检视薄层色谱图（t: 24°C，RH :35% )。标号1-4,10为上述酸枣仁对照提取物C，标号5-9,11-12为上述酸枣仁 对照提取物B，标号13为酸枣仁对照药材，标号14为酸枣仁皂苷A对照品，标号15为酸枣 仁皂苷B对照品，标号16为斯皮诺素对照品。
[0244] 从图13-14的薄层色谱图中可以看出：与实施例1图谱（图4-图5)相比，酸枣仁 对照提取物B和C薄层图谱中，在靠近溶剂前沿的区域油脂等杂质成分的斑点很多，黄酮类 和皂苷类有效成分的斑点清晰度不够，影响薄层色谱的鉴别效果。
[0245] 二、对比成分含量。
[0246] 将本对比例制备得到的酸枣仁对照提取物A、B和C与实施例1中制备得到的酸枣 仁对照提取物以高效液相色谱法进行检测，检测方法同上，检测结果如下表所示。
[0247] 表10不同酸枣仁对照提取物中各成分含量（％ )
[0248]
[0250] 从上表中可以看出，与实施例1得到的酸枣仁对照提取物比较，酸枣仁对照提取 物A中所含有的酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B含量及指标性成分的总含量均较低；而酸枣 仁对照提取物B和C，各指标性成分的含量及总含量均非常低；而实施例1中各指标性成分 的含量及总含量均较高。
[0251] 以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实 施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存 在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0252] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并 不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护 范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1. 一种酸要仁对照提取物的制备方法，包括W下步骤： 粉碎：取酸要仁药材，粉碎，得酸要仁粗粉； 脱脂：取上述酸要仁粗粉，置于超临界C〇2萃取装置的萃取蓋中，W超临界CO2萃取去除 酸要仁粗粉中的脂类成分，得药渣； 提取：取上述药渣，按照每克酸要仁药材Sna-IOml的量加入体积百分浓度为40%-80%乙醇水溶液，加热回流1-4小时，过滤，得滤液； 大孔树脂纯化：将上述滤液浓缩后上样加至大孔吸附树脂柱上，W 7-11个柱体积的 体积百分浓度为0-10%的乙醇水溶液洗脱，弃去，再W 3-5个柱体积的体积百分浓度为 50% -70%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得酸要仁对照提取物粗品； 硅胶纯化：取上述酸要仁对照提取物粗品，W体积百分浓度为50% -70%的乙醇水溶 液溶解，加入适量硅胶拌样，蒸干溶剂后上样至硅胶柱，先W 20-30个柱体积的乙酸乙醋洗 脱，弃去，再W 40-60个柱体积的体积比为70:30-50:50的乙酸乙醋-甲醇洗脱，收集洗脱 液，回收溶剂，得酸要仁对照提取物。2. 根据权利要求1所述的酸要仁对照提取物的制备方法，其特征在于，所述脱脂步骤 中，采用W下条件进行超临界C〇2萃取：萃取蓋溫度为40-60°C，压力为25-35Mpa，第一分离 蓋溫度为40-50°C，压力为5. 5-6. 5Mpa，第二分离蓋溫度为30-40°C，压力为4-5Mpa，C〇2流 量为25-35L/小时，萃取2-4小时。3.根据权利要求1所述的酸要仁对照提取物的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂 纯化的具体步骤为：将上述滤液浓缩后上样加至大孔吸附树脂柱上，W 4-6个柱体积的水 洗脱，弃去，再W 3-5个柱体积的体积百分浓度为10%的乙醇水溶液洗脱，弃去，再W 3-5个 柱体积的体积百分浓度为50% -70%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得酸要仁 对照提取物粗品。4.根据权利要求3所述的酸要仁对照提取物的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂 纯化的具体步骤为：将上述滤液浓缩后上样加至DlOl型大孔吸附树脂柱上，W 5个柱体积 的水洗脱，弃去，再W4个柱体积的体积百分浓度为10 %的乙醇水溶液洗脱，弃去，再W4个 柱体积的体积百分浓度为60%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，60°C减压干 燥12小时，研成细粉，得酸要仁对照提取物粗品。5.根据权利要求1所述的酸要仁对照提取物的制备方法，其特征在于，所述硅胶纯化 步骤中，所述硅胶柱中填充的为粒径为300目的正相硅胶，洗脱过程具体为：先W25个柱体 积的乙酸乙醋洗脱，弃去，再W 17个柱体积的体积比为70:30的乙酸乙醋-甲醇洗脱，收集 洗脱液，最后W 33个柱体积的体积比为50:50的乙酸乙醋-甲醇洗脱，收集洗脱液，合并两 次收集得到的洗脱液，回收溶剂，得酸要仁对照提取物。6. 根据权利要求5所述的酸要仁对照提取物的制备方法，其特征在于，所述硅胶纯化 步骤中，将加入适量硅胶拌样并蒸干溶剂后的样品均匀填充至胶管中，将该胶管与低压制 备液相相连，W该低压制备液相进行洗脱。7.根据权利要求1所述的酸要仁对照提取物的制备方法，其特征在于，所述提取的具 体步骤为：按照每克酸要仁药材8ml的量加入体积百分浓度为60%乙醇水溶液，加热回流2 次，每次1小时，过滤，合并滤液。8. -种酸要仁对照提取物，其特征在于，通过权利要求1-7任一项所述的酸要仁对照 提取物的制备方法制备得到。9. 一种酸要仁对照提取物的应用，其特征在于，将权利要求8所述的酸要仁对照提取 物用于酸要仁及含酸要仁的中药制剂的质量控制中。10. 根据权利要求9所述的酸要仁对照提取物的应用，其特征在于，所述酸要仁及含酸 要仁的中药制剂的质量控制方法为：将所述酸要仁对照提取物、待测样品W薄层色谱法和 /或高效液相色谱法进行检测，对比判别； 所述薄层色谱法的检测条件为： 薄层板：硅胶薄层板； 展开剂：水饱和正下醇； 显色剂及检视：W香草醒硫酸溶液为显色剂检视，和/或置于日光灯下检视，和/或置 于365nm的紫外灯下检视； 所述高效液相色谱法包括黄酬类检测和皂巧类检测； 黄酬类检测条件为： 固定相：Cis色谱柱； 柱溫：20-30°C; 流动相：A相为乙腊，B相为水，按照W下梯度洗脱程序进行：流速：1.Oml/min; 检测器：二极管阵列检测器； 皂巧类检测条件为： 固定相：Cis色谱柱； 柱溫：30-40°C; 流动相：A相为乙腊，B相为水，按照W下梯度洗脱程序进行：流速：1.Oml/min; 检测器：蒸发光散射检测器。
【专利摘要】本发明涉及一种酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用，属于中药质量控制技术领域。该酸枣仁对照提取物的制备方法包括以下步骤：粉碎；脱脂；提取；大孔树脂纯化；硅胶纯化；最终得酸枣仁对照提取物。采用特定的方法对酸枣仁药材进行脱脂，提取和纯化，最终得到具有特定成分的酸枣仁对照提取物，该对照提取物中不仅含有酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B等皂苷类成分，还含有斯皮诺素和6”’-阿魏酰斯皮诺素等黄酮类成分。将该酸枣仁对照提取物作为对照用于酸枣仁及含酸枣仁药味中药制剂的质量控制中，具有反馈成分信息全面的优点，并且，使用该酸枣仁对照提取物时，无需进行繁琐的前处理步骤，可以直接溶解后检测，具有操作简便、检测成本低的优点。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/90
【公开号】CN105203657
【申请号】CN201510585856
【发明人】林彤, 毕福钧, 谢培山, 侯惠婵, 江英桥
【申请人】广州市药品检验所
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月15日