B细胞C4d@C4d)标志物；和
[0067] (m)抗核抗体（ANA);
[006引其中所述的风险得分表明了受试对象患有SLE的可能性。
[0069] 与现有技术的方法相比，本发明的方法在诊断和治疗系统性红斑狼疮（SL巧方面 提供了改善。在任一方面的实施方案中，所述的方法进一步包括在由受试对象得到的生物 样品中，测定一种或多种（例如1、2、3或所有4种）被排除的标志物的水平，其中所述的标 志物选自SjSgrcn综合征B型抗原（SS-B化a))标志物、Scl-70标志物（拓扑异构酶I)、J〇-l 标志物、和着丝粒B蛋白（CEN巧标志物，其中计算SLE风险得分包括根据主要标志物的每 一种标志物W及一种或多种被排除的标志物的水平来计算SLE风险得分。在运种实施方案 中，SLE诊断的特异性比现有技术的方法得到大幅的改善。
[0070] 所述的标志物可W为任何合适的标志物，例如生物样品中对抗一种或多种被排 除的标志物的抗体。例如化-1标志物可W为抗化-1抗体，SS-B化a)标志物可W为抗 SS-B化a)抗体，Sd-70标志物可W为抗Sd-70抗体，并且CENP标志物可W为抗CENP抗 体。在其他的实施方案中，被排除的标志物可W进一步包括MCV(突变的瓜氨酸波形蛋白） 标志物，例如抗MCV抗体。
[0071] 用于测量运些标志物的每一种标志物的水平和在各种组织样品中的正常水平的 探针和检测是本领域那些技术人员已知的，并且用于实施此类测量的试剂盒可得自许多的 审雌商，包括但不限于W下实例中提及的那些。
[0072] 在任一方面的另一个实施方案中，计算SLE风险得分包括通过一种或多种转化分 析来调节主要标志物的一种或多种标志物的水平。可W使用任何此类的转化分析，包括但 不限于逻辑回归分析。在此类实施方案中，逻辑回归分析可W包括：
[0073] (i)调节主要标志物的每一种标志物的水平，从而产生各主要标志物的加权得分， 和
[0074] (ii)将各主要标志物的加权得分结合，从而产生SLE风险得分。
[00巧]在另一个实施方案中，计算SLE风险得分包括通过一种或多种转化分析来调节主 要标志物的一种或多种标志物的水平和一种或多种（1、2、3或所有4种）被排除的标志物 的水平。在此类实施方案中，所述的一种或多种转化分析包括逻辑回归分析，其包括：
[0076] (i)调节主要标志物的每一种标志物的水平W及一种或多种被排除的标志物的每 一种标志物的水平，从而产生各主要标志物W及一种或多种被排除的标志物的加权得分， 和
[0077] (ii)将各主要标志物W及一种或多种被排除的标志物的加权得分结合，从而产生 SLE风险得分。
[0078]指数=-5. 2626+0. 9877XANA.成分+[0. 2955Xl0g(EC4d)+1.0260Xl0g度C4d)] -2. 4944X特异性成分
[0079] 在此类实施方案中，针对巧C4d)和度C4d)测量平均巧光强度（例如流式细胞仪 的输出），并取对数。"ANA20"是指阳性率；高于ANA单位的阔值数/ml样品，ANA20 = 1 ; 低于单位的阔值数/ml样品，ANA20 = 0。如本领域那些技术人员所理解的那样，用于测定 标志物作为"阳性"或非阳性的"阔值"在制造商/检测的彼此之间是不同的，但是本领域 的那些技术人员可W容易地测定。"被排除的"如下测定：如果对于任何"被排除的"标志物 而言，所述的检测为阳性，则ANA20为1 ;W及如果对于所有"被排除的"标志物而言，所述的 检测为阴性，则ANA20为0。
[0080] 在一个实施方案中，SLE风险得分可W通过W下方法计算：
[0081] (a)针对EC4d和BC4d测定净平均巧光强度（通过巧光激活细胞分选术（FAC巧测 定）的自然对数；
[0082] 化）根据预定的阔值（例如通过试剂盒制造商或最终用户测定的阔值）来测定 ANA是否为阴性（值为0)、中阳性（值为1)或强阳性（值为2);
[0083](C)测定任何被排除的标志物是否落入上述预定阔值并因此为阳性（值为1)，或 者被排除的标志物是否均未落入上述预定阔值并因此均为阴性（值为0) 及
[0084] (d)将（a)-(C)中测定的值结合，从而得到SLE风险得分，可任选地包括通过一种 或多种转化分析来调节一种或多种标志物的水平。
[0085] 在另一个实施方案中，测定BC4d标志物的水平包括测定B淋己细胞表面上BC4d 的水平，并且测定EC4d标志物的水平包括测定红细胞表面上EC4d的水平。例如测定BC4d 标志物的水平可W包括测定细胞或包含B淋己细胞的组织提取物中BC4d的水平，并且测定 EC4d标志物的水平可W包括测定细胞或包含红细胞的组织提取物中EC4d的水平。在其他 的实施方案中，使用C4d特异性抗体（例如本领域已知的那些）来测定BC4d标志物的水平 和EC4d标志物的水平。
[0086]本发明提供了用于诊断和治疗处于患有系统性红斑狼疮（SL巧风险之下的受试 对象的改善的方法，其中所述的受试对象根据初始评估（使用单个标志物的水平）而显示 为阴性的。
[0087]所述的受试对象优选为人类受试对象（成人或儿童）。SLE为自身免疫疾病，其 可表征为血液中产生不常见的自身抗体。运些自身抗体与它们各自的抗原结合，形成免疫 复合物，该免疫复合物循环并最终沉积在组织中。处于SLE风险之下的受试对象可W具有 多种症状，包括但不限于不适、发烧、慢性炎症、组织损伤；高于脸颊的觀骨的红斑或"蝴蝶" 红斑；盘状皮肤红斑：可W导致结瘤的斑片状发红；光敏感：对暴露日光产生反应的皮肤红 斑；粘膜溃瘍：口腔、鼻或喉魄内膜的溃瘍；关节炎：手和足的2处或多处肿胀的压痛关节； 胸膜炎/屯、包炎：屯、脏或肺周围的内膜组织的炎症，与呼吸有关的胸痛；肾脏异常：异常量 的尿蛋白或成堆的细胞基本组分（称为管型）；脑刺激：通过癒痛（惊厥）和/或精神病表 明；血细胞计数异常；免疫素乱；W及梅毒的假阳性血液检验。
[008引如本文所用，"生物样品"得自受试对象的肌体。可W使用得自受试对象的任何合 适的生物样品。特别适用于本发明的方法的样品为血液样品、活组织检查样品，包括但不限 于肾活组织检查样品。在一个实施方案中，血清学标志物（例如ANA，CENP，Jo-1，La/SS-B 和SCn-70标志物）得自血液样品，而EC4d，PC4d，ECRl和/或BC4d标志物为沉积在循环血 细胞上的那些。
[0089]优选的是使用邸TA(乙二胺四乙酸盐）处理血液样品，从而抑制补体激活。样品 可W保持在室溫或储存在4°C下。在一些实施方案中，全血样品可W分级成不同的成分。例 如在一个实施方案中，通过差式离屯、将红细胞与样品中的其他类型的细胞分离。与红细胞 结合的补体激活产物（例如EC4d和ECR1)的分析可W在分离的红细胞上实施。在一些实 施方案中，白细胞与血液样品的其他成分分离。例如可W通过离屯、将白细胞（白细胞层） 可W与血浆分离并且与红细胞分离。可W通过使用针对已知的细胞表面标志物的抗体来分 离各种类型的白细胞（例如淋己细胞、单核细胞等），其中所述的标志物是该类型细胞特异 性的。针对白细胞的细胞表面标志物的抗体是本领域那些技术人员已知的。例如细胞表面 标志物CD3,CD4,CD8和CD19的特异性单克隆抗体是市售可得的，并且可W用于选择淋己细 胞。对在白细胞表面上发现的补体激活产物（例如BC4d)的分析可W在白细胞的分离级份 中实施。血小板级份可W得自其他的血液成分，从而可W分析与血小板结合的补体激活产 生，流入PC4d。可W使用本领域已知的方法来进行血小板的分离，包括差式离屯、和使用血小 板特异性抗体的免疫沉淀（例如CD42b)。
[0090]可W使用本领域那些技术人员已知的多种方法来测量样品中特定生物标志物的 水平（例如定量或数量）。此类方法包括但不限于流式细胞仪、ELISA(使用红细胞、血小板 或白细胞溶解产物（例如淋己细胞溶解产物））和放射性免疫测试。在一个实施方案中，使 用流式细胞计数方法并使用各种分子特异性的多克隆或单克隆抗体通过直接或间接免疫 巧光进行的测量来测定C4d的水平，运些分子的每一种分子都可W使用分离的样品（例如 红细胞、白细胞或血小板特异性级份）或使用单一样品（例如全血）来测量。
[0091] 如本文所用，"转化分析"可W为任何合适的操作，包括但不限于广义模型（例如 逻辑回归、广义相加模型），多变量分析（例如判别分析、主成分分析、因子分析），W及时 间-事件"生存"分析。
[0092] 如本领域那些技术人员根据本文的教导所理解的那样，加权系数可W通过多种技 术测定并可W广泛改变。在测定合适的加权系数的一个实例中，使用在2组患者中发现的 标志物水平来进行多变量逻辑回归（MLR)，其中所述的2组患者中，一组患者患有SLE，一组 未患有SLE。对于MLR可W使用的变量（标志物）选择，具有多种方法，因此，未选择的标志 物由模型中删除，而测定保留在模型中的各预示性标志物的加权系数。然后，运些加权系数 可W例如乘W样品中的标志物水平（W任何合适的单位表示，包括但不限于有限重量/体 积、重量/重量、重量/细胞压积数等），然后例如求和，从而计算SLE风险得分。
[0093] 在一个非限定性的实施方案中，构成指数得分的一些成分（例如ANA和被排除的 标志物）可W与预定的阔值/临界值有关（例如ANA成分可W具有0、1或2的值；被消除 的标志物可W具有0或1的值）。在此类方案中，根据ANA或被排除的标志物在阔值决定 极限下的分析误差，所述的指数可W潜在地由正值变为负值（或者反之亦然）。因此，在一 些实施方案中，当使用阔值/临界值（例如ANA和/或被排除的标志物）来评估用于测定 指数得分的成分时，可W定义所述指数的"模棱两可的结果"，并且在阔值的20%或更低内 (因此能够潜在地影响指数的阳性率或阴性率）。在运种实施方案中，所述的得分可W注释 为模棱两可的。
[0094] 如本文所用，"结合"包括结合使用标志物的任何数学操作，从而得到可W与阔值 相比较的单一得分（加、减、除、乘和它们的组合）。在运些模型中，可W使用合适的加权系 数来调节标志物的水平。
[0095] 所述的方法可W使用测量SLE风险得分与标准SLE风险得分之间的比较。可W使 用用于比较的任何合适的标准，包括但不限于由正常个体或患有SLE的受试对象群体得到 的SLE风险得分的预定水平或范围，或者包围所述的相反情况。如本文所用，"预定的水平" 或"预定的范围"是指值或值的范围，其可W由在对照受试对象（即，健康受试对象）群体 或受到自身免疫疾病（例如SLE或非SLE自身免疫素乱）折磨的受试对象群体中测量的特 定SLE分析得分的定量或数量（例如绝对值或浓度）来测定。可W通过计算可W取得最大 的统计学意义的SLE风险得分的值或值范围来选择SLE风险得分的预定水平或预定范围。 在一些实施方案中，预定值的水平可W基于由对照/正常受试对象群体得到的SLE风险得 分的变化。例如预定水平可W为高于正常SLE风险得分范围的至少2、3、4或5标准偏差。 此外，还可W通过计算SLE风险得分（对于该得分而言，SLE风险得分在该水平或范围内的 超过50% ,60% ,70% ,75% ,80% ,85% ,90%或95%的患者患有SLE)的水平或范围来 测定SLE风险得分的预定水平或预定范围。
[0096] 如本文所用，"诊断（分词形式）/诊断（名词形式）"是指确认SLE的存在或本 性。诊断方法在它们的敏感性和特异性方面不同。诊断检测的"敏感性"为检验阳性的患 病个体的百分率（"真阳性"的百分率）。所述的检测未能检测到的患病个体为"假阴性"。 未患病的并且在检测中为检验阴性的受试对象被称为"真阴性"。诊断检测的"特异性"为 1减去假阳性率，其中"假阳性"率定义为检验为阳性的未患病的那些群体。尽管特定的诊 断方法未能提供一种状况的决定性诊断，但是如果该方法提供了有助于诊断的明确指示， 便足够了。
[0097] 至少部分根据SLE