风险得分来"治疗"受试对象的SLE或另一种疾病是指主治医师 或其他医学专业人±根据被认为合适的方法随后治疗那些被确认为可能患有SLE(根据他 们的风险得分）的受试对象。此类治疗可W包括但不限于免疫抑制剂（例如环憐酷胺、皮 质酱类等）和/或缓解疾病的抗风湿性药物值MARD，例如甲氨蝶岭、咪挫硫嚷岭、来氣米特、 Belimum油和抗追药（例如必赖克擾锭和径化氯哇））。缓解疾病的抗风湿性药物值MARD) 预防性地用于降低耀斑的发生率、疾病的进展W及降低对酱类化合物使用的需要；当耀斑 形成时，使用皮质酱类治疗它们。
[0098] 本文所述的本发明所有方面的方法可W人工实施，或者可W与自动化系统或计算 机联合使用。例如可W使用自动化系统来实施所述的方法，其中分析受试对象的血液样品 从而对特定的生物标志物的水平作出一个或多个测定，并且通过适用于该目的的软件自动 化地实施预定水平或预定范围的比较。用于本发明的方法的计算机软件或计算机可读介 质包括运样的计算机可读介质，其包括：(a)用于接收与测定沉积在红细胞或淋己细胞（例 如B细胞）表面上的补体成分C4d相应的数据的编码，和用于接收与ANA，SS-B化a)标志 物，Scl-70标志物，Jo-1标志物，CENP标志物和/或抗dsDNA抗体（例如生物样品中的此 类样品）的量相应的数据的编码；化）用于检索沉积在个体此类细胞表面上的补体成分C4d 的预定水平的编码，和用于检索ANA,SS-B化a)标志物，Scl-70标志物，Jo-1标志物，CENP 标志物和/或抗dsDNA抗体（例如此类样品）的预定水平的编码；化及（C)用于比较（a) 中的数据与化）中的预定水平的编码，从而测定是否可W作出精确的SLE诊断或者是否需 要额外测量其他的生物标志物。
[0099] 在本发明的某些实施方案中，生物标志物水平的一个或多个预定的水平或预定的 范围可W存储在与数字计算机有关的存储器中。在获得与补体C4d，ANA，SS-B化a)标志 物，Scl-70标志物，Jo-1标志物，CENP标志物和/或抗dsDNA抗体（例如此类样品）相应 的数据后（例如得自合适的分析仪器），该数字计算机可W将测量的生物标志物数据与一 个或多个合适的预定水平或预定范围比较。在进行比较之后，如果数据表明了SLE诊断，贝U 该数字计算机可W自动化地计算。
[0100] 因此，本发明的一些实施方案可W通过数字计算机执行的计算机编码体现。数字 计算机可W为使用任何标准的或专用操作系统（例如基于Windows的操作系统）的微型、 迷你或大帖计算机。所述的编码可W存储在任何合适的计算机可读介质上。计算机可读介 质的实例包括磁盘、电子盘、光盘、磁带、记忆棒、忍片等。此外，本领域的那些普通技术人员 还可任何合适的计算机程序语言（包括C，C++等）编写编码。
[0101] 因此，本发明进一步包括非临时性的计算机可读存储介质，其包括使得用于测量 样品中标志物水平的装置实施本发明的任何方面或实施方案的方法的一组指令。在另一个 方面中，本发明提供了在计算机上提供用于自动化地实施本发明的方法的非临时性计算机 可读存储介质，其中所述的计算机与用于测量样品（例如血液样品）中所述标志物水平的 装置连接。如本文所用，术语"计算机可读介质"包括磁盘、光盘、有机物存储器、W及CPU 可读的任何其他的易失性（例如随机存储存储器（"RAM"))或易失性（例如只读存储器 ("ROM"))海量存储系统。计算机可读介质包括协作的或相互连接的计算机可读介质，其 专口存在于处理系统上，或者分布于多重相互连接的处理系统（可W位于或远离于处理系 统）中。可w使用用于测量标志物水平的任何合适的装置，包括但不限于流式细胞仪装置 和用于实施化ISA的装置。
[0102] 此外，本发明还提供了用于诊断SLE的检验试剂盒和组合。在一个实施方案中，本 发明包括用于诊断SLE的检验组合，其包括W下检验的至少3种（即，3、4或所有5种）： 用于EC4d水平的第一检验；用于BC4d水平的第二检验；用于SS-B化a)标志物、Sd-70标 志物、化-1标志物和CENP标志物的一种或多种（1、2、3或所有4种）的水平的第S检验； ANA水平的第四检验；W及抗dsDNA抗体水平的第五检验。用于测定特定生物标志物水平 的试剂盒或检验包括用于根据本文所述的方法来实施测量的多种试剂。例如在一个实施方 案中，所述的试剂盒或检验包括针对各种生物标志物实施免疫巧光测试的试剂，例如对一 种或多种标志物（对所述的祀物具有特异性）具有特异性的单克隆抗体与巧光部分的缀合 物。此外，所述的试剂盒可W包括：在实施此类型检测时可能需要的此类其他的材料，例如 缓冲剂、放射性标记的抗体、比色剂的试剂、用于将不同细胞级份与全血分离的指令、W及 基于生物标志物的特定预定水平来诊断SLE的指令。
[0103] 在另一个实施方案中，所述的试剂盒或检验包括针对各种生物标志物来实施其他 标准检测（例如化ISA或放射免疫检测）的试剂。在此类实施方案中，所述的试剂盒或检 验包括对所述的祀物具有特异性的单克隆抗体或其他标志物，其中所述的祀物与合适的标 签（例如放射性舰、亲和素、生物素或酶，例如过氧化物酶）缀合。所述的试剂盒可W额外 包括缓冲剂，用于抗体缀合的酶的底物，用于将不同的细胞级份与全血分离的指令、W及基 于生物标志物的特定预定水平来诊断SLE的指令。
[0104] 应该理解的是本文所述的实例和实施方案仅是为了说明的目的，并且根据它们的 各种修改或改变对于本领域的技术人员是启示性的，并且包含在本申请的精神和范围W及 所附权利要求的范围内。本文所述的所有参考文献、出版物、专利和专利申请对于所有目的 而言W引用方式全文并入本文。 实施例
[0105] 引言
[0106] 系统性红斑狼疮（SL巧为慢性自身免疫疾病，从而导致自身抗体介导的组织损 伤及潜在地威胁生命的多器官衰竭（1)。在美国，运种混杂的炎性疾病影响了 161，000至 322, 000的成人，其中受影响的女性为男性的9倍W上（2)。此外，在非裔美国人和西班牙 人中，患病率比高加索人更高，并且社会人口学背景预示为预后不良（3)。SLE的表现是多 样的，包括红斑、关节炎、贫血、血小板减少、浆膜炎、肾炎、癒痛和精神病。由于运些症状是 混杂的、非特异性的、发展性的，并且通常模仿了其他疾病的那些情况，所WSLE的诊断是 复杂的，并且可W成为医生的挑战。诊断SLE依赖于患者的病史、当前的症状和试验室检验 的组合。尽管1982年出版的修订版的AmericanCollegeof化eumatology标准（4)需要 存在11个标准中的4个标准，从而将患者分类为患有SLE，但是在临床实践中使用运些标准 并非是始终如一的巧）。在标准的试验室检验中，常用于支持SLE诊断的标准试验室检验主 要为抗核抗体（ANA)和抗双链DNA(抗dsDNA)抗体化）。但是，ANA和抗dsDNA抗体具有局 限，并且运些血清型标志物均不能提供足够平衡的敏感性和/或诊断SLE的特异性。公认 的是补体激活对SLE发病机理的核屯、（7)，并且沉积在红细胞和B淋己细胞上的细胞结合 C4d片段可W促进SLE的诊断（8-11)。此外，多个报道已经确定CB-CAP对疾病活性的潜在 贡献（12 ;13)，并且它们的测量可W帮助治疗医生管理SLE患者。
[0107] 我们之前在大规模多中屯、横向研究中确定了CB-CAP对SLE诊断的贡献（14)，并 且我们的数据证明过多的C4d补体沉积在红细胞、B细胞和血小板上，而且备选地，在SLE中红细胞上降低的CR1的表达通常与其他疾病具有几倍的差异（14)。然而，在SLE和其他 风湿性疾病之间观察到运些标志物的表达具有明显的重叠，由此表明单独的CB-CAP均不 能独立地获得足够平衡的临床敏感性和特异性（15)。在该研究中，抗dsDNA是不敏感的 (29. 5% )但却特异性的标志物（>95% )，而ANA是敏感的，但却是特异性差的标志物。我们 依赖于抗dsDNA抗体的高特异性（低的假阳性率）来评价CB-CAPANA和抗MCV的递增值。 在抗dsDNA阴性个体中，逐步加入对数归一化的EC4d和BC4d标志物会显著增加敏感性，同 时保持足够的特异性。抗MCV进一步增加的特异性的增益依赖于类风湿性关节炎（RA)(不 具有抗MCRRA的针对RA的特异性为87. 7 %，具有抗MCF的对抗RA的特异性为97. 4 % )并 且能够选择更佳的临界值，从而增加总体SLE敏感性。将ANA、EC如、BC4d的加权总和与抗 MCV结合的指数得分（〉0)对SLE是敏感的（71. 6% )和特异性的巧0. 1% )。总之，抗DNA 与指数得分结合将单独的抗DNA的临床敏感性由29. 5 %改善至80 %。临床敏感性上的运 种50. 5%的改善大幅地超过了特异性由96. 1 %至86. 5%的9. 6%的损失。此外，当与结合 的抗dsDNA和ANA相比时，抗dsDNA的指数使得特异性改善30. 3 %巧9. 0 %与89. 3 % )，敏 感性仅损失10. 0% (89. 0%与79. 0% )。
[010引然而，在我们的诊断方法的特异性是高度针对患有RA的患者的同时，针对其他疾 病（包括硬皮病、皮肌炎、脉管炎和Sjogren综合征）的特异性明显低于75%，因此潜在地 限制了临床实践中我们诊断方法的值。
[0109] 方法
[0110] 临床草案和验证计划
[0111] 在2010年5月至8月（组1)和2011年6月至2013年9月（组2)招募的2组 受试对象中建立多变量指数的性能特征。
[0112] 研究设计和计划
[0113] 2个独立的研究（组1和2)为多中屯、横向研究，并且需要一次对受试对象的随访。 无需定期随访来评价诊断方法学的性能特征。在获得受试对象的知情同意书后，实施W下 过程：
[0114] ?获得受试对象与任何和所有风湿性疾病状况的诊断有关的病史，并针对与运些 状况的诊断有关的纳入/排除标准和细节回顾所述的病史；
[0115] ?针对SLE和其他风湿性疾病疾病的状况来记录诊断的数据，并将满足特定的SLE 诊断标准的归档（修订版的ACR Criteria for the Classification ofSLE)((Tan et al.，1982;Hochberg,1997);
[0116] ?将受试对象的人口特征归档（出生日期，性别，种族/种族特点）；
[0117] ?就分娩可能性而言，通过试纸对所有女性实施尿妊辰试验；
[om] ?获得大约15血患者血液用于分析CB-CAPS(EC4d和BC4d)、ANA、抗dsDNA、抗MCV 和ENA抗体；在禁食或未禁食的状况下获得血液样品。所述的样品由1个7.5ml邸TA管 (紫色帽）和1个SST管（红虎（redtiger)帽），其需要在运送前离屯、。所有生物样品都 通过过夜传递由研究位点运送至ExagenDiagnostics(使用所提供的运输试剂盒）。由于CB-CAPS应该在收集样品的48小时内分析（参见预分析变量项目ID25945)，周日不接收 样品；因此仅由周一至周六招募受试对象（周四运送的截止时间为10:00a.m.)。
[0119] ?获得血液，并将其由该位点运送至ExagenDia即ostics(SanDiego的基础设 施）。为了使分析试验室保持盲态，公开受试对象的诊断的CRF和任何受试对象的信息都被 传真至Exagen临床项目管理者，而用于分析的血液样品直接送至分析试验室，并附有完整 的受试对象特定的申请表。在实施研究的过程中，研究者不可获得运些检验结果。样本仅 通过受试对象编号和姓名的首字母确认，并且分析试验室对受试对象特定的诊断保持是盲 态的。仅临床成员在整个研究中具有接近患者诊断的权限。
[0120] ?分离、洗涂红细胞和B淋己细胞，使用C4d特异性的单克隆和/或多克隆抗体对 红细胞和B淋己细胞进行免疫巧光标记，并使用我们临床试验室批准的检测通过流式细胞 仪进行分析。使用平均巧光强度作为各种细胞表面标志物表达水平的指示物；使用FDA批 准的固相免疫检测