(1)依次用1.0,0.3,0.05 Pm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；
(2)在电极表面滴加6μ L浓度为2 mg/mL的二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体水溶液，干燥；
(3)继续将6μ?浓度为20 Pg/mL的伏马毒素抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净；
(4)用3μ L浓度为20 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干净；
(5)将6μ L浓度为0.0001 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的伏马毒素抗原用于和抗体的特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。
[0017]实施例4 二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体的制备
将0.05 g七水合二氧化铈和0.89 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在19 mL水中，随后加入0.5 mL的甲酰胺和0.05 mL的双氧水，搅拌30 min后，将上述混合溶液转移到反应釜中，在180°C下反应24 h，离心洗涤后干燥，得到二氧化铈空心球；
将I mL的I mg/mL 二氧化铈空心球水溶液和I mL的I mg/mL亚甲基蓝溶液混合，震荡12 h后离心，加入含有0.4 mL的离子液体的浓度为10 mg/mL的壳聚糖溶液，继续震荡I h，离心后重新分散在I mL的水中，得到二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体水溶液；
所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖，所述离子液体为1- 丁基吡啶四氟硼酸盐。
[0018]实施例5 二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体的制备
将0.1 g七水合二氧化铈和0.178 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在19 mL水中，随后加入ImL的甲酰胺和0.1 mL的双氧水，搅拌30 min后，将上述混合溶液转移到反应釜中，在180°C下反应24 h，离心洗涤后干燥，得到二氧化铈空心球；
将I mL的2 mg/mL 二氧化铈空心球水溶液和I mL的2 mg/mL亚甲基蓝溶液混合，震荡12 h后离心，加入含有0.8 mL的离子液体的浓度为10 mg/mL的壳聚糖溶液，继续震荡1 h，离心后重新分散在1 mL的水中，得到二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体水溶液；
所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖，所述离子液体为1- 丁基吡啶四氟硼酸盐。
[0019]实施例6 二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体的制备
将0.2 g七水合二氧化铈和0.356 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在19 mL水中，随后加入2mL的甲酰胺和0.2 mL的双氧水，搅拌30 min后，将上述混合溶液转移到反应釜中，在180°C下反应24 h，离心洗涤后干燥，得到二氧化铈空心球；
将1 mL的4 mg/mL 二氧化铈空心球水溶液和1 mL的4 mg/mL亚甲基蓝溶液混合，震荡12 h后离心，加入含有1.6 mL的离子液体的浓度为10 mg/mL的壳聚糖溶液，继续震荡1 h，离心后重新分散在1 mL的水中，得到二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体水溶液；
所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖，所述离子液体为1- 丁基吡啶四氟硼酸盐。
[0020]实施例7伏马毒素的检测方法
(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试；
(2)选择差分脉冲伏安法对伏马毒素抗原进行检测，选择在-0.6~ 0 V电压下进行扫描，记录电流变化；
(3)将待测样品溶液代替伏马毒素抗原标准溶液进行检测；
(4)该生物传感器对伏马毒素抗原检测线性范围为0.0001~ 10 ng/mL，检测限0.05pg/mL0
【主权项】
1.一种基于二氧化铈空心球构建的伏马毒素传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下: (1)依次用1.0,0.3,0.05 Mm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干； (2)在电极表面滴加6μ L浓度为1 ~ 2 mg/mL的二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体水溶液，干燥； (3)继续将6PL浓度为5 ~ 20 Pg/mL的伏马毒素抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4 °C冰箱中孵化1 h，清洗干净； (4)用3yL浓度为5 ~ 20 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4°C冰箱中孵化1 h，清洗干净； (5)将6μ L浓度为0.0001 ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的伏马毒素抗原用于和抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4°C冰箱中储存备用。2.如权利要求1所述的一种基于二氧化铈空心球构建的伏马毒素传感器的制备方法，所述二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体的制备，其特征在于，步骤如下: 将0.05 ~ 0.2 g七水合二氧化铈和0.89 ~ 0.356 g聚乙烯吡咯烷酮溶解在19 mL水中，随后加入0.5 ~ 2 mL的甲酰胺和0.05 ~ 0.2 mL的双氧水，搅拌30 min后，将上述混合溶液转移到反应釜中，在180°C下反应24 h，离心洗涤后干燥，得到二氧化铈空心球； 将1 mL的1 ~ 4 mg/mL 二氧化铈空心球水溶液和1 mL的1 ~ 4 mg/mL亚甲基蓝溶液混合，震荡12 h后离心，加入含有0.4 ~ 1.6 mL的离子液体的浓度为10 mg/mL的壳聚糖溶液，继续震荡1 h，离心后重新分散在1 mL的水中，得到二氧化铈空心球-亚甲基蓝-壳聚糖-离子液体水溶液； 所述壳聚糖为羧甲基壳聚糖，所述离子液体为1- 丁基吡啶四氟硼酸盐。3.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于二氧化铈空心球构建的伏马毒素传感器对伏马毒素的检测方法，其特征在于，步骤如下: (1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10 mL的pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液中进行测试； (2)选择差分脉冲伏安法对伏马毒素抗原进行检测，选择在-0.6~ 0 V电压下进行扫描，记录电流变化； (3)将待测样品溶液代替伏马毒素抗原标准溶液进行检测。
【专利摘要】本发明涉及一种基于二氧化铈空心球构建的伏马毒素传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。基于二氧化铈空心球良好的吸附性能，显著提高了生物传感器的灵敏度，对粮食中伏马毒素的检测具有重要的意义。
【IPC分类】G01N27/30, G01N27/26
【公开号】CN105241932
【申请号】CN201510664276
【发明人】魏琴, 马洪敏, 范大伟, 曹伟, 罗川南, 吴丹, 庞雪辉, 胡丽华
【申请人】济南大学
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年10月14日
【公告号】CN105241932B