。然后将注射器/注射针浸入填充有液氮的绝缘的容器中，及以全 血样品位于液氮表面以下的方式定位。快速冷冻处理在所述条件下耗时5秒钟，其对应于 约2700°C /分钟的冷却速度。然后，将含冷冻的样品的注射器/注射针在2秒钟内浸入调 至50°C的水浴中，及以冷冻的样品位于水表面以下的方式定位。解冻时间为8秒钟，其对应 于约1900°C /分钟的加热速度。
[0108] 快速冷冻/解冻处理之前及后使用Neubauer计数室显微镜观察及细胞计数显示， 存在于处理的血样品的细胞血成分（红细胞5. 2X IO6/ μ 1 ;白细胞6. 5X IO3/ μ 1 ;血小板 2· 2Χ IO5/μ 1)被定量解离。
[0109] 【实施例2 :清洁流体处理单元及同时监控清洁效率】
[0110] 将已用于类似于实施例1的全血样品的50次快速冷冻及解冻处理的不锈钢毛细 导管（内径0. 5mm ;长度IOcm)通过以下方式清洁。将原本用于蛋白测定的所谓的BCA试 剂溶液（双金鸡宁酸，酒石酸钠，碳酸氢钠，碳酸钠，4%硫酸铜，在0.1 N NaOH中；Pierce Chemical)通过毛细导管，以200 μ 1/分钟的流速抽栗。此外，将毛细导管浸入加热至50°C 的水浴。洗脱液体通过USV/UIS检测器，及在562nm处监控吸收。信号再次达到基线后（此 情况中，9分钟后）实现完全清洁，即残留的蛋白等的除去。
[0111] 本发明涉及以下实施方式：
[0112] 1.在以下条件下产生经处理的生物流体的方法，
[0113] (i)提供所述细胞成分的基本上定量解离，及
[0114] (ii)不导致流体成分的实质性沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝，
[0115] 包括以下步骤：
[0116] (a)提供包括细胞成分的生物流体，
[0117] (b)冷冻所述生物流体，及
[0118] (C)解冻步骤（b)的冷冻的流体。
[0119] 2.实施方式1的方法，其中
[0120] 在所述冷冻处理中所述流体被冷冻至-20 °C~-196 °C，优选-120 °C~-190 °C的温 度，及
[0121] 其中使所述冷冻的流体经历解冻处理至达室温，优选达40°C及更优选达50°C的 温度。
[0122] 3.实施方式1~2中任一项的方法，
[0123] 其中所述冷冻处理以约1260 °C /分钟~约12600 °C /分钟，优选约2000~ 4000°C /分钟的冷却速度进行，及
[0124] 其中所述解冻处理以约1000°C /分钟~约11400 °C /分钟，优选约1500~ 4000 °C /分钟的解冻速度进行。
[0125] 4.实施方式1~3中任一项的方法，其中所述生物流体是体液或细胞培养液，优选 全血，更优选有0. 1和0. 6之间的血细胞比容的全血。
[0126] 5.实施方式1~4中任一项的方法，其不包括：
[0127] (i)沉积和/或沉淀步骤和/或离心步骤和/或
[0128] (ii)在冷冻/解冻过程之前添加化学裂解试剂。
[0129] 6.未稀释的经处理的生物流体，其包括基本上定量解离的细胞成分，其基本上无 沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝产物。
[0130] 7.实施方式6的经处理的生物流体，其包括基本上解离的红细胞，白细胞及血小 板。
[0131] 8.在生物流体样品中测定分析物的方法，其中所述生物流体根据实施方式1~5 中任一项的方法处理，及在所述经处理的生物流体中测定所述分析物。
[0132] 9.实施方式8的方法，
[0133] 其中所述分析物选自：
[0134] 生物化合物，例如核酸，多肽，肽，脂质，糖，激素，代谢物等；及
[0135] 药物化合物，
[0136] 其中所述分析物优选是免疫抑制药物，例如环孢菌素，雷帕霉素或他克莫司。
[0137] 10.全血样品中测定免疫抑制药物的方法，其中所述全血根据实施方式1~5中任 一项的方法处理，及在所述经处理的全血中测定所述免疫抑制药物。
[0138] 11.在来自新生儿的全血样品中测定临床-化学参数的方法，其中所述全血根据 实施方式1~5中任一项的方法处理，及在所述经处理的全血中测定所述临床-化学参数。
[0139] 12.用于处理包括细胞成分的生物流体的装置，其中所述装置包括：
[0140] (a)流体处理单元，其至少部分可冷冻/可加热，
[0141] (b)冷却元件，其用于冷冻预定部分的流体处理单元，
[0142] (C)加热元件，其用于加热预定部分的流体处理单元，
[0143] (d)任选流体运输元件，例如抽栗元件，
[0144] (e)控制元件，其用于在以下条件下控制流体的冷冻/加热
[0145] (i)提供所述细胞成分的基本上定量解离，及
[0146] (ii)不导致流体成分的实质性沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝，
[0147] (f)任选清洁元件，及
[0148] (g)任选样品分析元件。
[0149] 13.实施方式14的装置，其中所述清洁元件适于在清洁过程后监控流体处理导管 或其一部分中有生物材料。
[0150] 14.实施方式15或16中任一项的装置，其中所述清洁元件包括清洁流体，所述清 洁流体是双金鸡宁酸（BCA)试剂。
[0151] 15.双金鸡宁酸（BCA)试剂用于清洁与生物样品接触的装置的用途。
【主权项】
1. 用于处理包括细胞成分的生物流体的装置，其中所述装置包括： (a) 流体处理单元，其至少部分可冷冻/可加热， (b) 冷却元件，其用于冷冻预定部分的流体处理单元， (c) 加热元件，其用于加热预定部分的流体处理单元，和 (d) 控制元件，其适于在以下条件下控制流体的冷冻/加热： (1) 提供全血的冷冻，及 (2) 以500°C/分钟~2500°C/分钟的解冻速度将所述冷冻的全血解冻到至少室温，从 而 (i) 提供所述细胞成分的基本上定量解离，及 (ii) 不导致全血成分的实质性沉积，沉淀，变性，凝集及胶凝。2. 权利要求1的装置，其中还包含： (d)流体运输元件。3. 权利要求2的装置，其中所述流体运输元件是抽栗元件。4. 权利要求1的装置，其中还包含： (f) 清洁元件。5. 权利要求1的装置，其中还包含： (g) 样品分析元件。6. 权利要求4的装置，其中所述清洁元件适于在清洁过程后监控流体处理导管或其一 部分中生物材料的存在情况。7. 权利要求4或6中任一项的装置，其中所述清洁元件包括清洁流体，所述清洁流体是 双金鸡宁酸（BCA)试剂。8. 双金鸡宁酸（BCA)试剂用于清洁与生物样品接触的装置的用途。9. 包含双金鸡宁酸（BCA)的双金鸡宁酸试剂用于清洁与生物样品接触的装置的用途。10. 权利要求9的用途，其中所述BCA试剂包含金属离子和具有碱性pH的含水缓冲溶 液。11. 权利要求10的用途，其中所述金属离子是铜离子。12. 权利要求10的用途，其中所述pH在10和12之间。13. 权利要求10的用途，其中所述含水缓冲溶液包含酒石酸盐、碳酸氢盐或碳酸盐缓 冲液，或其组合。14. 权利要求9的用途，其中所述BCA试剂是碱性双金鸡宁酸（BCA) /酒石酸盐/铜试 剂。
【专利摘要】本发明指通过冷冻/解冻处理包括细胞成分的生物流体的方法。该方法对于制备用于分析物检测的生物样品特别有用。
【IPC分类】G01N1/28, G01N1/42, G01N1/44
【公开号】CN105258989
【申请号】CN201510621231
【发明人】D·塞德尔
【申请人】萨莫芬尼根有限责任公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2009年7月23日
【公告号】CA2731060A1, CN102105796A, CN102105796B, CN103823072A, CN103823072B, EP2149793A1, EP2310863A1, EP2310863B1, US9012137, US20110229870, WO2010009895A1