Ehd2抗体在制备前列腺癌免疫组化试剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，设及一种前列腺癌免疫组化分子病理检测试剂的制 备，具体设及我们开发的一种E皿2特异抗体在制备前列腺癌免疫组化试剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 前列腺癌是威胁男性的常见肿瘤之一，在欧美国家，仅次于肺癌，位列男性癌症死 因的第二位。流行病学资料显示，前列腺癌发病具有显著的地域、种族、年龄差异。多项研 究还指出前列腺癌的发病与生活习惯、饮食文化、工作压力、雄性激素水平及家族病史等有 相关性。中国处于前列腺癌的低发区，但近年来，我国男性的前列腺癌的发病呈上升趋势， 与我国的人口老龄化加剧、生活质量改善及生活方式的改变有关。
[0003] 我国前列腺癌的基础研究仍相对薄弱，现在常用的前列腺癌诊断方法主要有：直 肠指诊、血清PSA、超声和穿刺、影像学检查等。运些诊断方法都停留在对前列腺癌发生的表 象进行检查W作为诊断及预后判断的依据，一方面受病理医师经验等人为因素影响，另一 方面缺乏更深层次的与病人个体发病因素相关的分子依据。而在分子水平对前列腺癌进行 相关检测将对前列腺癌个体化诊断及精准医疗具有重要意义。
[0004] 肿瘤的发生与多种因素有关，每个发病个体又具有不同的发病因素。目前开展的 基因序列检测主要从基因突变水平理解肿瘤的异常变化。然而，现有大规模测序研究结果 表明，几乎所有的肿瘤相关基因的功能突变率只占肿瘤中的很小部分，在大多数情况下，其 它因素特别是真正发挥生物学作用的蛋白质的功能异变才是肿瘤的本质，其影响因素又可 包含蛋白的异常表达、异常修饰、异常调控和异常细胞定位。因此，对肿瘤恶性本质的深刻 认识和有效控制的前提是明确运些功能蛋白分子的异变情况，免疫组织化学是最有效的检 测手段。免疫组织化学技术应用免疫学抗原抗体反应基本原理，通过抗体对体内蛋白质分 子抗原的特异性识别，W及化学标记的第二抗体的显色等作用来检测组织细胞内目标抗原 的表达量及其亚细胞定位。 阳〇化]近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的成功研发，更主要的 是对肿瘤分子机制认识的不断深入，免疫组化在肿瘤诊断与鉴别中的应用价值得到了普遍 的认可。虽然前列腺特异性抗原PSA、己糖激酶化2等非免疫组化检测指标被广泛用于前列 腺癌的临床分子病理诊断，但对前列腺癌的病理分析和临床用药所起的作用非常有限、不 够精准。为了不断提高前列腺癌的诊治水平，更深入的研究前列腺癌的发病机理，有待其它 分子指标被掲示并纳入到临床应用中，本发明公开的一种E皿2特异抗体及其免疫组化试 剂为前列腺癌的免疫组化分子病理检测提供了一个新的分子指标，将有助于前列腺癌的精 准诊疗。
[0006] 本申请项目前期研究发现E皿2蛋白的表达与定位在前列腺癌中产生异变，自 主研发的E皿2特异抗体W及W此抗体为核屯、的免疫组化试剂可对此异变进行检测。 E皿 2(lipsinhomology巧H)-domain-containingprotein2)是E皿蛋白的一种，是一类新 型膜转运调控蛋白，含有高度保守的邸结构域。参与受体内吞等胞膜转运的多步调控，是 整个胞膜转运机制的必不可少的重要环节，在多种细胞中起分子与物质运输及信号传导等 关键作用，它的失调将导致细胞信号应答失当及细胞功能素乱，并可能进而引发疾病。因此 对E皿2进行免疫组化检测将更客观准确地反映肿瘤的异化本质和患者个体的临床特性。 目前，由E皿2特异抗体制备的免疫组化试剂未见报道，E皿2抗体在制备前列腺癌免疫组化 检测试剂中的应用也没有先例。
[0007] 为解决上述问题，本发明公开了E皿2抗体在制备前列腺癌免疫组化检测试剂中 的应用。
【发明内容】
[0008] 为解决【背景技术】中提到的问题，本发明公开了一种E皿2抗体及其在制备前列腺 癌免疫组化检测试剂中的应用。
[0009] 本发明解决的技术问题通过W下技术方案来实现：
[0010] E皿2抗体在制备前列腺癌免疫组化检测试剂中的应用，是W-种对人E皿2蛋白 特异的抗体作为一抗或核屯、抗体。所述前列腺癌免疫组化检测试剂，用于前列腺癌诊断和 预后判断，其特征是采用前述对人E皿2蛋白特异的抗体作为一抗或核屯、抗体，配W常规免 疫组化试剂，用于对组织细胞中的E皿2蛋白进行定量和定位分析。
[0011] 所述常规免疫组化试剂，包括二抗、显色剂及缓冲剂。 阳01引所述E皿2蛋白是指由基因E皿2编码的蛋白，所述基因E皿2的GeneBank国际 通用序列编号为：NM_〇14601，所述基因E皿2编码蛋白的GeneBank国际通用序列编号为： NP-055416。
[0013] 所述一种对人E皿2蛋白特异的抗体，其特征在于，所述抗体能特异性识别人E皿2 蛋白，所述识别位点的氨基酸序列为：503-SEQ ID NO :1-543,由该氨基酸序列构成的一种 多肤，其氨基酸序列为SEQ ID N0:1。
[0014] W所述多肤的氨基酸序列为核屯、序列对其进行修饰，所述修饰为在所述多肤N端 连接一个半脫氨酸；修饰后的所述多肤经纯化后作为抗原对动物进行免疫W制备E皿2抗 体并进行纯化。
[0015] 有益效果
[0016] 本发明的有益效果为：
[0017] 本发明公开了一种E皿2特异抗体在制备前列腺癌免疫组化检测试剂中的应用， 由于E皿2蛋白参与受体与胞膜转运的多步调控，W及在各种细胞中对维持物质运输与信 号传导等起关键作用，与肿瘤等疾病的发生密切相关。因此对E皿2进行免疫组化检测将更 客观准确地从分子水平反映肿瘤的异化本质和患者个体的临床特点，符合肿瘤的精准医疗 原则和趋势。
[0018] 本发明公开的E皿2抗体在制备前列腺癌免疫组化检测试剂中的应用，W对人 E皿2蛋白特异的抗体作为一抗或核屯、抗体，制备前列腺癌免疫组化检测试剂，制备出的试 剂特异性好，灵敏度高，显色性好，能有效判别组织细胞中E皿2基因在蛋白水平的表达情 况W及定位特征，为前列腺癌的个体化精准医疗提供新的分子依据。
【附图说明】
[0019] 图1为免疫印迹检测结果图。
[0020] 图2为前列腺增生组织200倍镜下免疫组化图。
[0021] 图3为前列腺癌组织200倍镜下免疫组化图。
[0022] 图4为前列腺癌组织400倍镜下免疫组化图。
【具体实施方式】
[0023] 实施例1 :对E皿2特异抗体的制备
[0024] 1)实验材料来源
[00巧]新英格兰大白兔购于上海强耀生物。
[0026] 多肤CD邸FALASHLIEAKLEGHGLPANLPRRLVPPSKRRHKGSAE由天津赛尔生物技术有限 公司定制并与KLH偶联。
[0027] CNBr活化的凝胶珠，福氏完全佐剂及福氏不完全佐剂购自Invitrigen公司。 阳0測。动物免疫
[0029] 取4月龄新西兰大白兔3只，将lOOug抗原多肤溶于0. 2ml0. 1MPBS(pH7. 2)， 与等体积福