学式，精确质量数，保留时间以 及农药英文名称等信息。T0F/MS数据库中3种化合物技术内容示例如下：
[0031]
[0032] 1.2 Q-T0F/MS数据库技术内容包括:544种农药在4个碰撞能量下的碎片离子信息 质谱图。Q-T0F/MS数据库技术内容示例如图1所示。
[0033] 2、本发明提供了一种瓜类蔬菜中544种农药LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术方法。侦 测和确证技术方法内容包括如下：
[0034] 2.1样品制备
[0035] 2.1.1瓜类蔬菜样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。
[0036] 2.1.2称取1(^瓜类蔬菜样品（精确至0.(^)，于8〇1^离心管中，加入4〇 1^1%醋酸 乙腈，用高速勾衆机13500r/min，勾衆提取lmin，加入lg氯化钠，4g无水硫酸镁，振荡5min， 在4200r/min下离心5min，取上清液20mL，在40 °C水浴中旋转蒸发浓缩至约lmL，待净化。
[0037] 2 · 1 · 3在Carbon/NH2柱中加入约2cm高无水硫酸钠。先用4mL乙腈+甲苯（3+1，v/v) 淋洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱 上，下接新鸡心瓶接收。再每次用2mL乙腈+甲苯(3+1，v/v)洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移 入SPE柱中。在柱上连接50mL贮液器，再用25mL乙腈+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药，合并于鸡心 瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0038] 2.1.4将浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腈+0.1 %甲酸水(2+8，v/v)混匀，经 〇. 2μπι滤膜过滤后定容，得到待测样品溶液a。
[0039] 2.2 LC-Q-T0F/MS检测
[0040] 2.2.1液相色谱分离：待测样品溶液&通过配有反相色谱柱（201^4父38-(：18 (3〇11111111〇1^2.11]1111\1001]1111，3.5以111)的液相色谱系统分离;流动相4为511^[的乙酸铵-0.1%甲 酸-水;流动相B为乙腈;液相色谱梯度洗脱程序为:Omin: 1 % B，3min: 30 % B，6min: 40 % B， 911^11:40%8，1511^11:60%8，1911^11:90%8,2311^11 :90%8,23.0111^11:1%8，后运行411^11;流速 为0 · 4mL/min;柱温:40°C ;进样量：10yL。
[0041 ] 2.2.2质谱检测:六8丨161^ 6530^：-〇-1'0?/^3在电喷雾电离正离子模式化31+);毛 细管电压:4000V;干燥气温度:325°C ;干燥气流量10L/min，鞘流气流速1 lL/min，鞘流气温 度为325°C;雾化气压力40psi，锥孔电压60V，碎裂电压140V。全扫描质核比范围为50-1600m/z，并采用内标参比溶液对仪器质量精度进行实时校正。通过Agilent MassHunter Workstation Software(version B.05.00)对质谱数据米集与处理。
[0042] 2.3 T0F/MS数据库定性侦测
[0043] 在Agilent MassHunter定性软件中调用已建立的T0F/MS数据库，设置检索参数保 留时间偏差为± 0.5min，精确质量偏差为± 10ppm，离子化形式选择+H，+順4，+Na模式;依据 T0F/MS数据库对上述采集的样品溶液质谱数据进行定性检索，通过软件计算出每种化合物 检索匹配得分值，检索匹配得分值>70的化合物，为疑似检出化合物。
[0044] 2.4 Q-T0F/MS数据库定性确证
[0045]在Targeted MS/MS采集模式下，输入疑似检出化合物的母离子，保留时间和最佳 的碰撞能量，对待测样品溶液a再次检测，将检测质谱图与Q-T0F/MS数据库中化合物碎片离 子的全扫描质谱图，在镜像对比条件下匹配确证。其匹配得分值>70,即确认检出该目标化 合物。
[0046] 本发明相比现有技术所具有的有益效果为：
[0047] 1、本发明以高分辨精确质量数、同位素分布及同位素丰度等化合物信息为识别标 准，建立的500多种农药侦测和确证技术方法，彻底改变了原有以化合物标准物为参比的定 性模式，是一种不需要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术；
[0048] 2、本发明在不需标准物对照的前提下，实现了500多种农药残留的定性侦测和确 证，可以大大节省购买标准物的成本，也更加环保、安全；
[0049] 3、本发明可在1小时内完成500多种农药侦测、定性与确证，与传统检测方法相比 较，可以提高工作效率数百倍；
[0050] 4、本发明能够做到对瓜类蔬菜样品中500多种农药残留一次性提取净化，一次进 样检测，与传统检测方法相比较，可以节省检测成本、提高工作效率数百倍；
[0051 ] 5、本发明同时侦测的544种农药中，有327种农药侦测灵敏度低于10微克/千克，占 比64.1 %，基本满足各国农药残留MRL水平筛查的要求；
[0052] 6、本发明在不需农药标准物对照的前提下，依据精确质量数据库对目标化合物的 定性和确证，使80 %以上农药确证点达到10个以上，全部农药满足欧盟对化合物4个确证点 的要求，定性结果更加准确可靠；
[0053] 7、本发明可以测试的瓜类蔬菜样品中农药包括以下物质中的一类或几类:有机磷 类农药，氨基甲酸酯类农药，苯并咪唑类农药，磺酰脲类农药，烟碱类农药，除虫菊酯类农药 及其他类型的农药及代谢物；
[0054] 8、本发明建立的侦测技术指标；扫描范围50-1600m/z;测定的精确质量可达 0.0 OOlm/z ;质量精度可控制在分子质量的lOppm以内；扫描速度在50-600m/z范围为每秒4 次；
[0055] 9、本发明提供的二种544种农药的精确质量数据库以及一种用于检测瓜类蔬菜中 544种农药残留侦测技术已经在7个农药残留分析实验室得到推广和应用，经过对30省市 500多个市售瓜类蔬菜样品的侦测验证，取得了重要的残留侦测数据。
【附图说明】
[0056]图1黄瓜样品全扫描模式T0F得分图；
[0057]图2黄瓜样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0058]图3黄瓜样品中检出农药二级Q-T0F/MS确证得分图；
[0059]图4西萌芦样品全扫描模式T0F得分图；
[0060]图5西萌芦样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0061 ]图6西萌芦样品中检出农药二级Q-T0F/MS确证得分图；
[0062]图7苦瓜样品全扫描模式T0F得分图；
[0063]图8苦瓜样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0064]图9苦瓜样品中检出农药二级Q-T0F/MS确证得分图。
【具体实施方式】
[0065] 实施例1
[0066]瓜类蔬菜（以黄瓜为例）中544种农药(见表1)LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术实施实 例，包括如下步骤：
[0067] 1、样品前处理技术的具体步骤：
[0068] 1.1黄瓜样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记；
[0069] 1.2称取10g黄瓜样品（精确至O.Olg)，于80mL离心管中，加入40mL 1%醋酸乙腈， 用高速勾衆机13500r/min，勾衆提取lmin，加入lg氯化钠，4g无水硫酸镁，振荡5min，在 4200r/min下离心5min，取上清液20mL，在40 °C水浴中旋转蒸发浓缩至约lmL，待净化。
[0070] 1.3在Carbon/NH2柱中加入约2em高无水硫酸钠。先用4mL乙腈+甲苯（3+1，v/v)淋 洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至SPE柱中， 下接新鸡心瓶接收。再每次用2mL乙腈+甲苯(3+1，v/v)洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入 SPE柱中。在柱上连接50mL贮液器，用25mL乙腈+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药及相关化学品，合 并于鸡心瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0071] 1.4将浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腈+水(2+8，v/v)混匀，经0.2μπι滤膜过 滤后定容，得到待测样品溶液。
[0072] 2、LC-Q_T0F/MS 操作条件
[0073]色谱条件:液相色谱流动相A为5mM的乙酸铵-0.1 %甲酸-水;流动相B为乙腈;梯度 洗脱程序为：0min:l%B，3min:30%B，6min:40%B，9min :40%B，15min:60%B，19min:90% B，23min:90，23 · Olmin: 1 ，后运行4min;流速为0 · 4mL/min;柱温:40°C ;进样量：10yL。
[0074] 质谱条件:Agilent 6530LC-Q-T0F/MS质谱仪的毛细管电压：4000V;干燥气温度： 325°C ;干燥气流量10L/min，鞘流气流速1 lL/min，鞘流气温度为325°C ;雾化气压力40psi， 锥孔电压60V，碎裂电压140V。全扫描质核比范围为50-1600m/z，并采用内标参比溶液对仪 器质量精度进行实时校正。通过Agilent MassHunter