一种基于具有过氧化氢酶活性的纳米酶的elisa检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种基于具有过氧化氢酶活性的纳米酶的ELISA检测方法，适用于双抗体夹心法或双抗原夹心法，先在金纳米颗粒上修饰检测抗体/检测抗原；再进行ELISA检测形成捕获抗体/捕获抗原?待测抗原/待测抗体?检测抗体/检测抗原?金纳米颗粒复合物；然后进行银铂染，在金纳米颗粒表面包裹银壳层和铂壳层，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶Au@AgPt颗粒，再利用其在密闭体系中催化过氧化氢分解产生氧气，使密闭体系中气压增强，检测气压变化即可检测得到待测抗原/待测抗体的量。本发明采用先修饰后成酶的方法，具有简单、快捷的优点和很好的稳定性，能够有效避免非特异性吸附及修饰导致的纳米酶颗粒催化活性下降，为环境监测和疾病诊断提供新的平台。
【专利说明】
一种基于具有过氧化氢酶活性的纳米酶的ELISA检测方法
技术领域
[0001]本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种基于纳米酶的ELISA检测方法，更具体地是涉及一种基于具有过氧化氢酶活性的纳米酶的ELISA检测方法。
【背景技术】
[0002]过氧化氢酶是一种能够催化过氧化氢分解产生氧气的蛋白酶。目前，过氧化氢酶已经被广泛的应用于化学传感、环境检测和疾病诊断。然而，蛋白酶具有易失活、不易保存和难制备等不足，极大的限制了过氧化氢酶的应用范围。
[0003]纳米酶是具有类似于蛋白酶催化能力的纳米材料，它们有合成简单、成本低廉和催化活性强的优点，能够很好的弥补蛋白酶的不足。在各种纳米酶中，铂纳米颗粒由于极强的过氧化氢酶活性而被广泛的应用于环境监测与疾病诊断。然而铂纳米颗粒催化活性不稳定、容易发生团聚，并且会由于表面修饰而使催化活性下降，限制了具有过氧化氢酶活性的纳米酶在分析检测中的应用。
[0004]因此，发展简单、快捷、稳定且能够避免由于修饰导致催化活性下降的方法，制备具有强过氧化氢酶活性的纳米酶具有重要的意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种基于纳米酶的ELISA检测方法，该种纳米酶通过银铂染的方法制备，具有过氧化氢酶活性，本发明能够解决现有技术中纳米酶催化活性不稳定，容易由于修饰导致催化活性降低的问题。
[0006]本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是:
[0007]一种基于具有过氧化氢酶活性的纳米酶的ELISA检测方法，适用于双抗体夹心法或双抗原夹心法，其中双抗体夹心法的检测步骤包括:
[0008]a)根据待测样品中待测抗原的种类选择相应的捕获抗体和检测抗体；
[0009]b)在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a)所述的检测抗体，得到修饰有检测抗体的金纳米颗粒；
[0010]c)进行ELISA检测:包被捕获抗体4加入待测样品使待测抗原与捕获抗体结合4加入步骤b)得到的修饰有检测抗体的金纳米颗粒并使待测抗原与其中的检测抗体结合，形成捕获抗体-待测抗原-检测抗体-金纳米颗粒复合物；
[0011]d)对步骤c)得到的捕获抗体-待测抗原-检测抗体-金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和0.04?5mM，利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl62—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtCl62+以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒，形成捕获抗体-待测抗原-检测抗体-AuOAgPt颗粒复合物；
[0012]e)在0.1?1M过氧化氢存在条件下，利用步骤d)得到的捕获抗体-待测抗原-检测抗体-AuOAgPt颗粒复合物中具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒在密闭体系中催化过氧化氢分解产生氧气，使密闭体系中气压增强，检测气压变化量以得到待测抗原的量。
[0013]双抗原夹心法的检测步骤包括:
[0014]a’)根据待测样品中待测抗体的种类选择相应的捕获抗原和检测抗原；
[0015]b’)在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a’)所述的检测抗原，得到修饰有检测抗原的金纳米颗粒；
[0016]c’)进行ELISA检测:包被捕获抗原—加入待测样品使待测抗体与捕获抗原结合—加入步骤b’)得到的修饰有检测抗原的金纳米颗粒并使待测抗体与其中的检测抗原结合，形成捕获抗原-待测抗体-检测抗原-金纳米颗粒复合物；
[0017]d’)对步骤c ’)得到的捕获抗原-待测抗体-检测抗原-金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和0.04?5mM，利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl 62—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtCl62—以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒，形成捕获抗原-待测抗体-检测抗原-AuOAgPt颗粒复合物；
[0018]e’)在0.1?1M过氧化氢存在条件下，利用步骤d’)得到的捕获抗原-待测抗体-检测抗原-AuOAgPt颗粒复合物中具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒在密闭体系中催化过氧化氢分解产生氧气，使密闭体系中气压增强，检测气压变化量以得到待测抗体的量。
[0019]—实施例中:所述步骤b)或b’)中，金纳米颗粒粒径为13?20nm。
[0020]一实施例中:所述步骤d)或d’)中，Ag+溶液的终浓度为100?150μΜ。
[0021]—实施例中:所述步骤d)或d’)中，对苯二酚的终浓度为0.2?ImM。
[0022]一实施例中:所述步骤d)或d’)中，PtCl62—溶液的终浓度为0.4?0.6mM。
[0023]—实施例中:所述步骤d)或d’)中，抗坏血酸的终浓度为10?20mM。
[0024]一实施例中:所述步骤e)或e’)中，过氧化氢的浓度为I?5M。
[0025]本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是:
[0026]—种具有过氧化氢酶活性的纳米酶制备方法，其特征在于:包括:
[0027]I)在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰蛋白质，得到修饰有蛋白质的金纳米颗粒；或直接选用粒径5?30nm的金纳米颗粒，不修饰蛋白质；
[0028]其中，所述蛋白质可以为抗体或抗原，相应地制备得到的修饰后的金纳米颗粒可应用于ELISA的双抗体夹心法或双抗原夹心法;当然，所述蛋白质也可以为其他种类；
[0029]2)对步骤I)得到的修饰有蛋白的金纳米颗粒进行银铂染，或直接对不修饰蛋白质的金纳米颗粒进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和
0.04?5mM，利用对苯二酚还原Ag+以在金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl62—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtCl62+以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到AuOAgPt颗粒，即为所述之具有过氧化氢酶活性的纳米酶。
[0030]其中，当所述蛋白质为抗体或抗原时，得到的纳米酶可以用于ELISA检测中，作用于过氧化氢并用于检测。当所述蛋白质为其他种类时，可以相应地用于其他用途。若直接对未修饰蛋白质的金纳米颗粒进行银铂染，则得到的纳米酶也可以单纯地作为过氧化氢酶使用。
[0031]本发明还提供了根据上述制备方法所制备的具有过氧化氢酶活性的纳米酶。
[0032]本技术方案与【背景技术】相比，它具有如下优点:
[0033]首先，本发明利用金纳米颗粒表面与蛋白的强吸附作用，可以有效避免检测抗体或检测抗原修饰的金纳米颗粒发生非特异性吸附；其次，本发明先将检测抗体或检测抗原修饰在金纳米颗粒上，进行ELISA检测反应后，再利用银铂染形成具有强过氧化氢酶活性的纳米颗粒，即先修饰再成酶，从而避免了传统先成酶再修饰技术中修饰过程导致的酶催化活性下降;然后，本发明制备的具有过氧化氢酶活性的纳米酶具有催化活性强、稳定且重现性好的优点，其催化形成的产物是环境友好的氧气与水，并且能够通过手持式的气压计测定靶标浓度。综上所述，与基于铂纳米颗粒的ELISA方法相比，本发明的方法简单、快捷、稳定性好，且能够避免非特异性吸附及修饰导致的催化活性降低，为具有过氧化氢酶活性的纳米酶在生物分析和生物医学中的应用提供新的平台。
【附图说明】
[0034]下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
[0035]图1为本发明的ELISA检测原理图(双抗体夹心法)。
[0036]图2为实施例2中银铂染条件优化的实验结果示意图，(A)为不同浓度硝酸银，(A)为不同浓度氯铂酸，(C)为不同浓度对苯二酚，(D)为不同浓度抗坏血酸。
[0037]图3为实施例3中Au/BSA颗粒、Au/BSA@Ag颗粒和Au/BSA@AgPt颗粒的照片(A)，紫外可见光谱示意图(B)，扫描电镜表征银铂染前后的对比示意图(C)，高分辨透射电镜表征银铂染后的元素分布示意图(D)。
[0038]图4为实施例5中利用本发明的ELISA检测方法检测待测抗原CRP的检测结果示意图(A)和选择性示意图(B)，以及利用本发明的ELISA检测方法检测待测抗原H5N1的检测结果示意图(C)和选择性示意图(D)。
【具体实施方式】
[0039]下面通过实施例具体说明本发明的内容:
[0040]实施例1:金纳米颗粒的制备
[0041]在圆底烧瓶中加入10mL0.01wt%氯金酸，在连续搅拌下煮沸回流，勾速加入ImL3?^%梓檬酸钠，继续搅拌煮沸30111；[11，合成粒径为16111]1的金纳米颗粒(411即8)。通过调整氯金酸和柠檬酸钠的比例，可以得到不同粒径大小的金纳米颗粒。
[0042]实施例2:银铂染条件的对比试验
[0043]本实施例之中，采用牛血清白蛋白BSA修饰金纳米颗粒。当然，也可以不用BSA修饰，直接对实施例1得到的金纳米颗粒进行银铂染，同样可得到具有过氧化物酶活性的纳米酶。
[0044]首先，向96孔板中加入10yL 2wt%BSA/PBS溶液，37°C下孵育lh，300yL PBS洗涤三遍。随后加入10yL 2.5nM实施例1中制备的16nm AuNPs(对照组不加AuNPs)，37°C孵育lh,300yL PBS洗涤三遍。然后加入300yL Blocking Buffer(含2wt%BSA和0.lwt%Tween20的I3BS溶液)，37°C孵育Ih，300yL PBS洗涤三遍，得到BSA修饰的金纳米颗粒Au/BSA，其包裹吸附在96孔板表面。
[0045]随后，向上述96孔板中加入50yL不同浓度硝酸银(AgNO3)溶液和50yL不同浓度对苯二酚，使48+的终浓度分别为0、31.25、62.5、125、250、50(^1而对苯二酚的终浓度分别为
0、0.008、0.04、0.2、1、5mM，37°C反应20min，300yL水洗涤三遍。然后加入50yL不同浓度氯铂酸(H2PtCl6)溶液和50yL不同浓度抗坏血酸，使PtCl62+的终浓度分别为O、0.125、0.25、0.5、
1、2mM而抗坏血酸的终浓度分别为0、0.08、0.4、2、10、50mM,37 °C反应20min，300yL水洗涤三遍，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶Au/BSA@AgPt颗粒。
[0046]最后，向96孔板中加入10yL IM过氧化氢，用盖子封闭96孔板，利用具有过氧化氢酶活性的纳米酶Au/BSA@AgPt颗粒在37°C催化过氧化氢，反应20min，利用气压计测定反应后的96孔板内的压强。
[0047 ] 结果如图2所示(图中BSA即为不加AuNPs的对照组)，Ag+的终浓度以100?150μΜ为佳，对苯二酚的终浓度以0.2?ImM为佳，PtCl 62—的终浓度以0.4?0.6mM为佳，抗坏血酸的终浓度以1?20mM为佳，效果较好。
[0048]实施例3:银铂染后得到的具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒的表征
[0049]向ImL 2.5nM实施例1中得到的金纳米颗粒AuNPs中加入AgNO3溶液和对苯二酚并使Ag+和对苯二酚的终浓度分别为125μΜ和0.2mM，37°C反应SOminJOOyL水洗涤三遍，得到AuOAg颗粒。随后加入H2PtCl6溶液和抗坏血酸并使PtCl62—和抗坏血酸的终浓度分别为0.5mM和10mM，37°C反应20min，300yL水洗涤三遍，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒。利用相机、紫外可见吸收光谱仪、扫描电镜和高分辨透射电镜对银染前后的金纳米颗粒进行表征。
[0050]结果如图3所示，得到的具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒中，金纳米颗粒外依次包裹有银壳层和铂壳层。
[0051 ] 实施例4:在金纳米颗粒上修饰检测抗体
[°°52] 取ImL实施例1得到的粒径为16nm的金纳米颗粒AuNPs于1.5mL离心管中，向其中加AlOyL lmg/mL检测抗体和50yL 0.2M Na2HPO4,在37°C孵育20min。随后向其中加入50yL2%BSA/PBS溶液，混匀后在37°C孵育20min，然后将其在HOOOrpm下离心lOmin，用ImL
0.1%BSA/10mM Na2HPO4重悬，该离心/重悬过程重复2遍，最后将其分散于250yL 0.1%BSA/1mM Na2HPO4溶液中，得到修饰有检测抗体的金纳米颗粒;4°C保存备用。
[0053 ]实施例5: ELI SA检测反应(双抗体夹心法)
[0054]a)根据待测样品中待测抗原的种类选择相应的捕获抗体和检测抗体;本实施例之中，待测抗原为CRP和H5N1，根据两种待测抗原分别选择各自相应的捕获抗体和检测抗体；
[0055]b)采用实施例4的方法得到两种分别修饰有CRP和H5N1对应的检测抗体的金纳米颗粒；
[0056]c)进行 ELISA 检测:
[0057]在96孔板中加入10yL 2yg/mL捕获抗体，4°C孵育过夜，300yL Wash Buffer(含有
0.1wt%Tween 20PBS 溶液)洗涤三遍。随后，加入 300yL Block Buffer(含有 2wt%BSA 的Wash Buffer)，37°C孵育Ih，300yL Wash Buffer洗涤三遍；
[0058]加入10 0μL待测样品，2 5 °C孵育I h使待测抗原与捕获抗体结合，3 0 0μL Wa s h
Buf f er冼涤三遍；
[0059]加入10yL 2.5nM步骤b)得到的修饰有检测抗体的金纳米颗粒，37°C孵育Ih，使待测抗原与其中的检测抗体结合，300yL Wash Buffer洗涤两遍，300yL水洗涤一遍，在96孔板中得到捕获抗体-待测抗原-检测抗体-金纳米颗粒复合物；
[0060]d)对步骤c)得到的捕获抗体-待测抗原-检测抗体-金纳米颗粒复合物进行银铂染:在96孔板中加入50yL AgNO3溶液和50yL对苯二酚并使Ag+和对苯二酚的终浓度分别为125μΜ和0.2mM，37°C反应20min，利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;300yL水洗涤三遍；随后加入50yL H2PtCl6溶液和50yL抗坏血酸并使PtCl62+和抗坏血酸的终浓度分别为0.5mM和10mM，37°C反应20min，利用抗坏血酸还原PtCl62+以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，300yL水洗涤三遍，分别得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶Au/CRP@AgPt颗粒和AuAfeN1OAgPt颗粒，即在96孔板中分别形成捕获抗体-待测抗原-检测抗体Au/CRP@AgPt颗粒复合物和捕获抗体-待测抗原-检测抗体Au/HsN1AgPt颗粒复合物；
[0061 ] e)向96孔板中加入10yL IM过氧化氢，用盖子封闭96孔板，37 V反应20min，利用步骤d)得到的捕获抗体-待测抗原-检测抗体Au/CRP@AgPt颗粒复合物和捕获抗体-待测抗原-检测抗体Au/HsN1AgPt颗粒复合物中具有过氧化氢酶活性的纳米酶Au/CRP@AgPt颗粒和AwUN1MgPt颗粒催化过氧化氢分解产生氧气，引起密闭的96孔板内压强改变，利用气压计测定反应后的96孔板内的压强，以分别计算得到待测抗原CRP和H5N1的量。
[0062]结果如图4所示，利用本发明的方法对待测抗原CRP和H5N1分别进行检测，线性和选择性良好。
[0063]上述实施例提供了双抗体夹心法的ELISA检测，但本发明同样适用于双抗原夹心法的ELI SA检测:
[0064]a’)根据待测样品中待测抗体的种类选择相应的捕获抗原和检测抗原；
[0065]b’)参照实施例4的方法，在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a’)所述的检测抗原，得到修饰有检测抗原的金纳米颗粒；
[0066]c，)参照实施例5的具体参数进行ELISA检测:包被捕获抗原—加入待测样品使待测抗体与捕获抗原结合—加入步骤b’)得到的修饰有检测抗原的金纳米颗粒并使待测抗体与其中的检测抗原结合，形成捕获抗原-待测抗体-检测抗原-金纳米颗粒复合物；
[0067]d’)参照实施例5的具体参数对步骤c’)得到的捕获抗原-待测抗体-检测抗原-金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和
0.04?50mM，利用对苯二酸还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤；加入PtCl62—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtClf以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒，形成捕获抗原-待测抗体-检测抗原-AuOAgPt颗粒复合物；
[0068]e’)参照实施例5的具体参数，利用步骤d’)得到的捕获抗原-待测抗体-检测抗原-AuOAgPt颗粒复合物中具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒在密闭体系中催化过氧化氢分解产生气体，引起密闭体系的压强改变，利用气压计测定反应后的96孔板内的压强，以计算得到待测抗体的量。
[0069]以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
【主权项】
1.一种基于具有过氧化氢酶活性的纳米酶的ELISA检测方法，其特征在于:适用于双抗体夹心法或双抗原夹心法，包括: a)根据待测样品中待测抗原的种类选择相应的捕获抗体和检测抗体； b)在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a)所述的检测抗体，得到修饰有检测抗体的金纳米颗粒； c)进行ELISA检测:包被捕获抗体—加入待测样品使待测抗原与捕获抗体结合—加入步骤b)得到的修饰有检测抗体的金纳米颗粒并使待测抗原与其中的检测抗体结合，形成捕获抗体-待测抗原-检测抗体-金纳米颗粒复合物； d)对步骤c)得到的捕获抗体-待测抗原-检测抗体-金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和0.04?5mM，利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl62—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtCl62—以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒，形成捕获抗体-待测抗原-检测抗体-AuOAgPt颗粒复合物； e)在0.1?1M过氧化氢存在条件下，利用步骤d)得到的捕获抗体-待测抗原-检测抗体-AuOAgPt颗粒复合物中具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒在密闭体系中催化过氧化氢分解产生氧气，使密闭体系中气压增强，检测气压变化量以得到待测抗原的量； 或， a’)根据待测样品中待测抗体的种类选择相应的捕获抗原和检测抗原； b’)在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a’)所述的检测抗原，得到修饰有检测抗原的金纳米颗粒； c’)进行ELISA检测:包被捕获抗原—加入待测样品使待测抗体与捕获抗原结合—加入步骤b’)得到的修饰有检测抗原的金纳米颗粒并使待测抗体与其中的检测抗原结合，形成捕获抗原-待测抗体-检测抗原-金纳米颗粒复合物； d’)对步骤c’)得到的捕获抗原-待测抗体-检测抗原-金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和0.04?5mM，利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl 62—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtCl62—以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒，形成捕获抗原-待测抗体-检测抗原-AuOAgPt颗粒复合物； e’)在0.1?1M过氧化氢存在条件下，利用步骤d’)得到的捕获抗原-待测抗体-检测抗原-AuOAgPt颗粒复合物中具有过氧化氢酶活性的纳米酶AuOAgPt颗粒在密闭体系中催化过氧化氢分解产生氧气，使密闭体系中气压增强，检测气压变化量以得到待测抗体的量。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述步骤b)或b’)中，金纳米颗粒粒径为13?20nm。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述步骤d)或d’)中，Ag+溶液的终浓度为100?150μΜ。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述步骤d)或d’)中，对苯二酚的终浓度为0.2?lmM。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述步骤d)或d’)中，PtCl62—溶液的终浓度为0.4?0.6mM。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述步骤d)或d’)中，抗坏血酸的终浓度为10?20mM。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述步骤e)或e’)中，过氧化氢的浓度为I?5M。8.一种具有过氧化氢酶活性的纳米酶制备方法，其特征在于:包括: 1)在粒径5?30nm的金纳米颗粒上修饰蛋白质，得到修饰有蛋白质的金纳米颗粒;或直接选用粒径5?30nm的金纳米颗粒，不修饰蛋白质； 2)对步骤I)得到的修饰有蛋白的金纳米颗粒进行银铂染，或直接对不修饰蛋白质的金纳米颗粒进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5?250μΜ和0.04?5mM，利用对苯二酸还原Ag+以在金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtClV—溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25?ImM和2?50mM，利用抗坏血酸还原PtCl62—以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层，得到AuOAgPt颗粒，即为所述之具有过氧化氢酶活性的纳米酶。9.一种根据权利要求8的制备方法所制备的具有过氧化氢酶活性的纳米酶。
【文档编号】G01N33/532GK105911278SQ201610347565
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月23日
【发明人】杨朝勇, 李久兴, 刘芳, 何梦逸, 朱志
【申请人】厦门大学