专利名称：类球红细菌工业化规模发酵方法及其发酵液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用细菌发酵制成一种功能性发酵液的生产方法，特别是利用类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)制成一种功能性发酵液的生产方法。
目前，对于类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的研究仅限于实验室水平，没有利用类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的技术方案进行工业规模的深层发酵方法。同时，在饮料行业中，缺少一种利用生物发酵技术生产的能对人体的健康起到极大促进作用的饮料。
本发明的目的是提供一种利用对类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)进行深层的工业化规模的发酵方法，得到的发酵液对人体的健康有益，能对人体的免疫系统进行调节，增加人体抵抗力。
培养液的配方如下a、无机盐溶液配比；(1000ml蒸馏水中)MgSO4·7H2O 2.0克CaCl·2H2O 0.75克FeSO4·7H2O 0.12克NaEDTA 0.2克b、微量元素溶液配比；(250ml蒸馏水中)H3BO4 0.7克MnSO4 398毫克NaMoO4 180毫克ZnSO4 60毫克Cu(NO3)210毫克c、生长因子溶液配比；(100ml蒸馏水中)生物素 1.5毫克维生素B1100毫克烟酸100毫克对氨基苯甲酸100毫克d、乳酸溶液配比；(1000ml溶液)蒸馏水 800毫升乳酸200毫升(用12N的NaOH溶液调pH6.5)e、硫酸铵溶液配比；(1000ml溶液)
蒸馏水800毫升硫酸铵20克溶解后用蒸馏水添至1000毫升，然后用12N的NaOH溶液调pH6.5f、磷酸缓冲液；(1000ml蒸馏水中)K2HPO460克KH2PO440克分别取a、无机盐溶液 10％、b、微量元素溶液 0.1％c、生长因子溶液 0.1％d、乳酸溶液 2％e、硫酸铵溶液 0.5％f、磷酸缓冲液 1.5％将配比a-f按照上述百分比进行混合，其余为水，即得到培养液。
做斜面试管或培养皿培养基时候另外添加蛋白胨1％，酵母膏0.5％。
菌种来源山东省蓬莱市村里集镇宋家河上段淤泥中。
菌种保藏号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC No.1.2778。
保藏时间2001年6月14日。
分离方法于7-8月取河中淤泥1升，用按照上述方法配制的培养液10升分别装入22个500ml三角烧瓶中，用纱布包棉塞塞好瓶中，外用旧报纸包好，用纸绳扎紧，置于高温灭菌锅内加热至121℃进行30分钟灭菌后，降至28℃。将淤泥在无菌室内边搅拌慢慢地分别平均地分入22瓶培养液。然后用10％乳酸溶液调节pH6.5-6.8，用原瓶上的棉塞塞好，包好报纸用纸绳扎紧，置于28-30℃恒温摇床上，摇床转速每分钟50-60转摇动，同时给白炽灯光照，光照要求每平方米100LX即可。摇床培养40小时后，取有红色反应的培养液(取上层液)，在接种室内用移液管移入培养皿(按照上述的培养基配方配制)，置于上述培养条件下培养一周，然后再从培养皿中在无菌室内取红点较大的菌落接入上述相同的培养液中，进入扶壮培养，这样反复进行数十次分离培养、扶壮，取样镜检，达到无杂菌的纯种并能在24小时的发酵指数达到35亿个/毫升以上可为生产用种。
生产方法将试管或培养皿菌种在无菌室内接入500ml三角烧瓶的培养液中(三角烧瓶中的培养基配方同上，消毒及温度和pH值同上)，放置摇床上恒温28-30℃，用300LX白炽灯光照，摇床转速每分钟50-60转下进行24小时，抽样检测35亿个/毫升以上时用消毒后的接种器接入200L种子罐，接种量应大于10％，种子罐的培养液配方同上，培养液配制完成后测pH6.5-6.8为宜，调pH用乳酸溶液或12N的NaOH溶液，消毒温度121℃进行30分钟。然后往罐体夹套通冷水降温至30℃时接种，接种完成后通进过滤除菌后的压缩空气从罐的底部进入进行搅拌，罐内的温度为28-30℃，进气压力0.15Mpa，罐内压力0.04Mpa左右为宜。同样用白炽灯通过两个不同角度的视镜光照300LX。罐内压力的调整从罐顶部的放气阀控制。恒温28-30℃发酵24小时后，再按上述方法通过一级种子罐(200L)与二级种子罐(2000L)的连接管道转接至二级种子罐(二级种子罐的培养液与一级种子罐相同)进行扩大培养28小时，其中的培养温度、pH值、光照和通气压力与一级种子罐相同，在二级种子罐发酵培养完成后，用同样的方式转接至10000L大型发酵罐中进行规模化发酵。大型发酵罐内的基料配方与前述相同，只是把所用的蒸馏水改成膜过滤净水，转入大型发酵罐的条件如下通过三个不同角度的视镜给白炽灯光1000LX的光照，料液pH6.5-6.8，进气压力0.2Mpa，调整罐内压力0.05Mpa，控制温度30℃，发酵28小时，每2小时取样检测，发酵中发现染菌时立即停止发酵，发酵的成品菌液为40-50亿个/毫升。得到的发酵液即为本发明的功能性口服液。
发酵液的应用1、用发酵液配以3％的槐花蜂蜜即可做成免疫调节，养护肠道功能的口服液。
2、莲子草提取液接二级种子发酵完成的发酵液即为调节血糖的降糖液。
3、用发酵液与纯净水加食品添加剂调整口味即为生物饮料。
4、用发酵液直接用于无公害蔬菜、水果等植物营养液。
用本发明发酵液所生产的产品具有对人体无副作用，能够对免疫系统起到调节的作用，对人体健康极为有利。
权利要求
1.一种利用类球红细菌工业化规模发酵的方法，该方法是将类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)在28-30℃、pH6.5-6.8摇床培养40小时后，于盛有培养液的培养皿中在相同条件下培养一周，再依次经过500ml三角烧瓶、200L的一级种子罐、2000L的二级种子罐和10000L大型发酵罐深层发酵于pH6.5-6.8，进气压力0.2Mpa，调整罐内压力0.05Mpa，控制温度30℃，发酵28小时，即得到发酵液，其特征在于所述的类球红细菌为保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、编号CGMCC No.1.2778，所述的培养液的配制方法为a、1000ml蒸馏水中无机盐溶液配比；MgSO4·7H2O2.0克CaCl·2H2O 0.75克FeSO4·7H2O0.12克NaEDTA0.2克b、250ml蒸馏水中微量元素溶液配比；H3BO4 0.7克MnSO4 398毫克NaMoO4 180毫克ZnSO4 60毫克Cu(NO3)2 10毫克；c、100ml蒸馏水中生长因子溶液配比生物素 1.5毫克维生素B1 100毫克烟酸 100毫克对氨基苯甲酸 100毫克；d、乳酸溶液配比蒸馏水 800毫升乳酸 200毫升(用12N的NaOH溶液调pH6.5)；e、硫酸铵溶液配比蒸馏水 800毫升硫酸铵 20克用水加至1000毫升；溶解后用蒸馏水添至1000毫升，然后用12N的NaOH溶液调pH6.5f、磷酸缓冲液K2HPO4 60克KH2PO4 40克用水加至1000毫升；分别取a、无机盐溶液 10％、b、微量元素溶液0.1％c、生长因子溶液0.1％d、乳酸溶液2％e、硫酸铵溶液 0.5％f、磷酸缓冲液 1.5％将配比a-f按照上述百分比进行混合，其余为水，即得到培养液。做斜面试管或培养皿培养基时候另外添加蛋白胨1％，酵母膏0.5％。
2.用如权利要求1中方法生产的发酵液。
3.用权利要求2中所述的发酵液配以3％的槐花蜂蜜做成的口服液。
4.用权利要求2中所述的发酵液配以莲子草提取液为调节血糖的降糖液。
5.用权利要求2中所述的发酵液与纯净水混合后，加食品添加剂调整口味即为生物饮料。
6.用权利要求2中所述的发酵液直接做成无公害蔬菜、水果的植物营养液。
全文摘要
本发明公开了一种利用细菌发酵制成一种功能性发酵液的生产方法，特别是利用类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)制成一种功能性发酵液的生产方法。该菌种的保藏号为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCCNo.1.2778。保藏时间2001年6月14日。方法是将培养皿分离后进行了摇瓶扶壮的菌种进行一级种子罐(200L)与二级种子罐(2000L)的扩大培养，用同样的方式转接至10000L大型发酵罐中进行规模化发酵。
文档编号C05B11/08GK1393546SQ0112965
公开日2003年1月29日 申请日期2001年6月26日 优先权日2001年6月26日
发明者王栋 申请人:山东万和生物科技有限公司