专利名称：一种从发酵液中分离、收集细菌细胞的方法
技术领域：
本发明属于一种生化生产过程中细菌细胞分离及收集工艺过程中盐析法的改良，尤其涉及ZL89100684.2发明专利技术中，含转化酶的细菌活细胞的分离、收集工艺方法。
目前从发酵液中对菌体细胞的分离、收集除采用高速离心法外(该法需要昂贵的离心机)，采用的传统絮凝法，包括有机溶剂沉淀法、化学沉淀法、盐析法，有机溶剂沉淀法需在低温下进行，容易造成酶蛋白分子的变性失活；盐析法需加入大量的无机盐，蛋白质易变性，回收率不高，对环境影响较大；化学沉淀法通用性差，需分解沉淀回收目的产物。
针对上述方法所存在缺点，本发明其目的是提供一种能在常温、常压下进行，分离收集快速、分离简单、回收率高、无污染的从发酵液分离、收集细菌细胞的方法。
为实现上述目的，本发明拟采用以下技术方案一种从发酵液中分离、收集细菌细胞的方法，其具体包括以下步骤(w/v为质量体积比)a、在固定化a-葡糖基转移酶(a-glucosyltransferase)制备帕拉金糖工艺中，取一定体积的发酵液，加入0.5％-2.5％的吸附剂(w/v)，充分搅拌，放置5-25分钟，加入0.01％-0.1％(w/v)的絮凝剂，充分搅拌，待出现絮凝物后加入40-100ppm(w/v)的助沉剂，再用倾泻法或吊滤法除去发酵液；b、取上述所得絮凝物，用去离子水充分洗涤。
所述的吸附剂可以为活性碳、高岭土或硅藻土；所述的絮凝剂可以为硫酸铝钾、铝酸盐或三价铁的盐类；
所述的助沉剂可以为聚丙烯酰胺(Polyacrylamide)、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)。
本方法通过吸附-絮凝法，即用吸附剂将发酵液中细菌细胞进行预先吸附，然后加入絮凝剂、助沉剂，处理时间大幅缩短，絮凝剂用量低，对所收集细菌细胞酶活力影响小，含菌体絮凝物酶回收率高。
下面详述本发明的五个实施例实施例一取100升发酵液，加入活性碳1公斤，充分搅拌，放置15分钟，加入明矾(硫酸铝钾)50克(预先配成5％水溶液)，充分搅拌，待絮凝物出现后，加入聚丙烯酰胺7克(预先配成0.1％水溶液)，充分搅拌后静置1-2分钟，此时絮凝物快速沉降，用吊滤法除去发酵液，用去离子水洗涤絮凝物三次(每次10升)后备用。
实施例二取100升发酵液(含细胞湿重6％)，加入高岭土1.5公斤，充分搅拌后放置10分钟，加入明矾50克(预先配成5％溶液)，充分搅拌，待絮凝物出现后，加入聚乙烯吡咯烷酮5克(预先配成0.1％水溶液)，充分搅拌，静置1-2分钟，用吊滤法除去发酵液，收集到的含菌絮凝物用去离子水洗涤3次(每次10升)后备用。
实施例三取100升发酵液(含细胞湿重6％)，加入硅藻土2公斤，充分搅拌后放置15分钟，加入铝酸钠80克(预先配成5％水溶液)，充分搅拌，待絮凝物出现后，加入聚丙烯酰胺5克(预先配成0.1％水溶液)，充分搅拌，静置1-2分钟，用吊滤法除去发酵液，收集到的含菌絮凝物用去离子水洗涤3次(每次10升)后备用。
实施例四取100升发酵液(含细胞湿重6％)，加入高岭土2公斤，充分搅拌后放置20分钟，加入三氯化铁30克(预先配成5％水溶液)，充分搅拌，待絮凝物出现后，加入聚丙烯酰胺10克(预先配成0.1％水溶液)，充分搅拌，静置1-2分钟，用吊滤法除去发酵液，收集到的含菌絮凝物用去离子水洗涤3次(每次10升)后备用。
实施例五取100升发酵液(含细胞湿重6％)，加入活性碳1公斤，充分搅拌后放置10分钟，加入三氯化铁30克(预先配成5％水溶液)，充分搅拌，待絮凝物出现后，加入聚乙烯吡咯烷酮6克(预先配成0.1％水溶液)，充分搅拌，静置1-2分钟，用吊滤法除去发酵液，收集到的含菌絮凝物用去离子水洗涤3次(每次10升)后备用。
权利要求
1.一种从发酵液中分离、收集细菌细胞的方法，其特征在于该方法具体包括以下步骤(w/v为质量体积比)a、在固定化a-葡糖基转移酶制备帕拉金糖工艺中，取一定体积的发酵液，加入0.5％-2.5％的吸附剂，充分搅拌，放置5-25分钟，加入0.01％-0.1％的絮凝剂，充分搅拌，待出现絮凝物后加入40-100ppm的助沉剂，再用倾泻法或吊滤法除去发酵液；b、取上述取得的絮凝物用去离子水充分洗涤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于吸附剂为活性碳、高岭土或硅藻土。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于絮凝剂为硫酸铝钾、铝酸盐或三价铁的盐类。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于助沉剂为聚丙烯酰胺(Polyacrylamide)、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)。
全文摘要
本发明属于一种生化生产过程中细菌细胞分离及收集工艺过程中盐析法的改良,具体包括以下步骤:(w/v为质量体积比)a．在固定化a－葡糖基转移酶制备帕拉金糖工艺中,取一定体积的发酵液,加入0.5%－2.5%的吸附剂(w/v),充分搅拌,放置5－25分钟,加入0.01%－0.1%(w/v)的絮凝剂,充分搅拌,待出现絮凝物后加入40－100ppm(w/v)的助沉剂,再用倾泻法或吊滤法除去发酵液;b．取上述所得絮凝物用去离子水充分洗涤。本方法通过吸附－絮凝法,处理时间大幅缩短,絮凝剂用量低,对所收集菌体细胞酶活力影响小,含菌体絮凝物酶回收率高。
文档编号C12N1/02GK1388242SQ0111473
公开日2003年1月1日 申请日期2001年5月25日 优先权日2001年5月25日
发明者莫树平, 臧向莹, 贺鹰抟, 郑婉玲, 柏建玲 申请人:广东省微生物研究所